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Boston Biochem/Recombinant Human His6-VCIP135/VCPIP1 Protein, CF/E-590-050
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SummaryProduct DatasheetsCarrier FreeReconstitution CalculatorBackgroundRelated Research Areas
Recombinant Human His6-VCIP135/VCPIP1 Protein, CF Summary
Purity
>90%, by SDS-PAGE under reducing conditions and visualized by Colloidal Coomassie® Blue stain.
Activity
Reaction conditions will need to be optimized for each specific application. We recommend an initialVCIP135concentration of 100-500 nM in reactions utilizing Ubiquitin-AMC or Ubiquitin-Rhodamine substrates (U-550 or U-555) or Poly-ubiquitin chain substrates.
Source
Spodoptera frugiperda, Sf 21 (baculovirus)-derived human VCIP135/VCPIP1 proteinContains an C-terminal 6-His tag
Accession #
Q96JH7
Predicted Molecular Mass
135 kDa
Product Datasheets
Product Datasheet
COA
SDS
Carrier Free
What does CF mean?
CF stands for Carrier Free (CF). We typically add Bovine Serum Albumin (BSA) as a carrier protein to our recombinant proteins.Adding a carrier protein enhances protein stability, increases shelf-life, and allows the recombinant protein to be stored at a more dilute concentration.The carrier free version does not contain BSA.
What formulation is right for me?
In general, we advise purchasing the recombinant protein with BSA for use in cell or tissue culture, or as an ELISA standard.In contrast, the carrier free protein is recommended for applications, in which the presence of BSA could interfere.
E-590
| Formulation | X mg/ml (X μM) in 50 mM HEPES pH 8.0, 100 mM NaCl, 10% (v/v) Glycerol, 1 mM TCEP |
| Shipping | The product is shipped with dry ice or equivalent. Upon receipt, store it immediately at the temperature recommended below. |
| Stability & Storage: | Use a manual defrost freezer and avoid repeated freeze-thaw cycles.
|
Reconstitution Calculator
Reconstitution Calculator
Background: VCIP135/VCPIP1
Valosin-containing protein p97/p47 complex-interacting protein, or VCIP135, is a member of the OTU superfamily of Deubiquitinating Enzymes. It is 1222 amino acids (aa) in length with a predicted molecular weight of 134 kDa. Human VCIP135 shares 95% aa sequence identity with the mouse ortholog. In the cell, VCIP135 function requires membrane association and interaction with p97, both of which are inhibited by VCIP135 phosphorylation during mitosis. VCIP135 activity is necessary for VCP-mediated reassembly of Golgi stacks after mitosis. In vitro, VCIP135 efficiently hydrolyzes K11- and K48-linked Poly-ubiquitin chains.
References
- Zhang, X. et al. (2014) Cell Sci 127: 172-181
Long Name
Valosin-Containing Protein P97/P47 Complex-Interacting Protein p135
Entrez Gene IDs
80124 (Human); 70675 (Mouse); 286761 (Rat)
Alternate Names
DKFZp686G038; DUBA3; EC 3.4.22.-; FLJ23132; KIAA1850FLJ60694; valosin containing protein (p97)/p47 complex interacting protein 1; valosin-containing protein (p97)/p47 complex-interacting protein p135; Valosin-containing protein p97/p47 complex-interacting protein 1; Valosin-containing protein p97/p47 complex-interacting protein p135; VCIP135; VCIP135deubiquitinating protein VCIP135; VCPIP1 VCIP135; VCPIP1
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
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运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2021-08-13
华津科技（天津）有限公司是膜片钳技术服务技术服务商之一，从事膜片钳技术服务已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业膜片钳技术服务技术服务，您可以搜索更多相关的膜片钳技术服务实验技术服务，以便挑选到性价比高，合适的膜片钳技术服务产品。而生物在线将会为您在膜片钳技术服务方面提供全方位的解决方案。 查看更多
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2020-03-24
SyncroPatch96工业型96通道全自动膜片钳系统是由北京安麦格贸易有限公司代理或销售的Nanion品牌的仪器，产品来源于德国。北京安麦格贸易有限公司是中国最权威的SyncroPatch96工业型96通道全自动膜片钳系统销售服务商之一，在北京等地方销售SyncroPatch96工业型96通道全自动膜片钳系统已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业SyncroPatch96工业型96通道全自动膜片钳系统仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的SyncroPatch96工业型96通道全自动膜 查看更多
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2018-11-13
膜片钳技术“匠心”计划 作者：王功新 膜片钳技术是一个... 查看更多
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2020-03-03
服务名称：细胞膜片钳实验服务 查看更多
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2021-07-24
普升科技有限公司是美国MD（Axon）公司膜片钳放大器系统的中国北方独家代理商，长期从事膜片钳技术以及其他电生理学技术的配套设备销售、培训与售后服务。为帮助国内广大从事膜片钳技术的实验人员、教师和学生了解与熟悉Axon膜片钳技术，解决膜片钳实验中的具体疑难问题，我公司联合美国MD公司决定于2013年6月25日在北京大学生命科学学院举办AXON膜片钳记录分析技术研讨会（6月25日）暨膜片钳技术培训班（6月26日和27日）。本次活动由美国... 查看更多
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2018-12-26
Forceps: consist of two tines held together at one end with a spring device that holds the tines open. Forceps can be either tissue or dressing forceps. Dressi 查看更多
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2018-12-26
Instruments For ElectrophysiologyProducts include microelectrode, voltage and current clamp amplifiers, perfusion chambers, perfusion heating systems, perfus 查看更多
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2021-09-04
本书内容包括：细胞膜的电学效应及其等效电路的分析，膜片钳实验系统工作原理、伪迹信号的消除和各种误差的补偿，电极的制备与溶液的配制，降低噪声和排除干扰的方法，膜片钳实验操作步骤与注意事项，膜片钳技术的扩展性应用，细胞电生理实验标本的制备，各种离子通道的生物物理及电生理... 查看更多
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SyncroPatch96工业型96通道全自动膜片钳工作站是由北京安麦格贸易有限公司代理或销售的Nanion品牌的仪器，产品来源于德国。北京安麦格贸易有限公司是中国最权威的SyncroPatch96工业型96通道全自动膜片钳工作站销售服务商之一，在北京等地方销售SyncroPatch96工业型96通道全自动膜片钳工作站已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业SyncroPatch96工业型96通道全自动膜片钳工作站仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的SyncroPatch96工业型96通道 查看更多
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自从2002年第一台自动电生理仪的引进，可以在系统中同时记录的最大数值一直限制在48。这里我们推出最新的IonWorks Barracuda™ 系统，可以同时连续测试两个LGICs和分别记录VGICs位点。 查看更多
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2018-03-24
泰耳光电有限公司在发布的脑片/组织切片膜片钳记录分析系统供应信息，浏览与脑片/组织切片膜片钳记录分析系统相关的产品或在搜索更多与脑片/组织切片膜片钳记录分析系统相关的内容。 查看更多
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2021-07-21
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商品咨询
【膜片钳】关于膜片钳试验中破膜问题 实验室建设与采购 ...123
ftphttp20123332017-11-09
什么时候这两种方式不能通用，只能选择其中一种对细胞破膜？
穿孔膜片钳记录猪冠状动脉平滑肌细胞K^+电流技术初探.pdf123
yinpeng22242021-07-30
当玻璃微电极压到细胞后，用嘴吸给负压，吸不动，取下玻璃电极，检查整个通路是畅通的，无堵塞。百思不得其解，求膜片钳高手指点！！不甚感谢！！
技术测IPSC或EPSC,细胞膜为什么要在 123
曼珠沙华77u32017-11-09
1．生物体具有共同的物质基础和结构基础。细胞是一切动植物结构的基本单位。病毒没有细胞结构。细胞是生物体的结构和功能的基本单位。
2．新陈代谢是生物体进行一切生命活动的基础，是生物最基本的特征，是生物与非生物的最
本质的区别。
3．生物遗传和变异的特征，使各物种既能基本上保持稳定，又能不断地进化。生物的遗传特
性，使生物物种保持相对稳定。生物的变异特性，使生物物种能够产生新的性状，以致形
成新的物种，向前进化发展。
4．生物体具应激性，因而能适应周围环境。生物体都能适应一定的环境，也能影响环境。
5．组成生物体的化学元素，在无机自然界都可以找到，没有一种化学元素是生物界所特有的，这个事实说明生物界和非生物界具统一性。生物界与非生物界还具有差异性。组成生物体的化学元素和化合物是生物体生命活动的物质基础。
6．糖类是细胞的主要能源物质，葡萄糖是细胞的重要能源物质。淀粉和糖元是植物、动物细胞内的储能物质。蛋白质是一切生命活动的体现者。脂肪是生物体的储能物质。核酸是一切生物的遗传物质。
7．组成生物体的任何一种化合物都不能够单独地完成某一种生命活动，只有这些化合物按照一定的方式有机地组织起来，才能表现出细胞和生物体的生命现象。细胞就是这些物质最基本的结构形式。
8．细胞膜具一定的流动性这一结构特点，具选择透过性这一功能特性。
9．细胞壁对植物细胞有支持和保护作用。线粒体是活细胞进行有氧呼吸的主要场所。叶绿体是绿色植物光合作用的场所。核糖体是细胞内将氨基酸合成为蛋白质的场所。染色质和染色体是细胞中同一种物质在不同时期的两种形态。细胞核是遗传物质储存和复制的场所，是细胞遗传特性和细胞代谢活动的控制中心。
10．构成细胞的各部分结构并不是彼此孤立的，而是互相紧密联系、协调一致的，一个细胞是一个有机的统一整体，细胞只有保持完整性，才能够正常地完成各项生命活动。展开
2．新陈代谢是生物体进行一切生命活动的基础，是生物最基本的特征，是生物与非生物的最
本质的区别。
3．生物遗传和变异的特征，使各物种既能基本上保持稳定，又能不断地进化。生物的遗传特
性，使生物物种保持相对稳定。生物的变异特性，使生物物种能够产生新的性状，以致形
成新的物种，向前进化发展。
4．生物体具应激性，因而能适应周围环境。生物体都能适应一定的环境，也能影响环境。
5．组成生物体的化学元素，在无机自然界都可以找到，没有一种化学元素是生物界所特有的，这个事实说明生物界和非生物界具统一性。生物界与非生物界还具有差异性。组成生物体的化学元素和化合物是生物体生命活动的物质基础。
6．糖类是细胞的主要能源物质，葡萄糖是细胞的重要能源物质。淀粉和糖元是植物、动物细胞内的储能物质。蛋白质是一切生命活动的体现者。脂肪是生物体的储能物质。核酸是一切生物的遗传物质。
7．组成生物体的任何一种化合物都不能够单独地完成某一种生命活动，只有这些化合物按照一定的方式有机地组织起来，才能表现出细胞和生物体的生命现象。细胞就是这些物质最基本的结构形式。
8．细胞膜具一定的流动性这一结构特点，具选择透过性这一功能特性。
9．细胞壁对植物细胞有支持和保护作用。线粒体是活细胞进行有氧呼吸的主要场所。叶绿体是绿色植物光合作用的场所。核糖体是细胞内将氨基酸合成为蛋白质的场所。染色质和染色体是细胞中同一种物质在不同时期的两种形态。细胞核是遗传物质储存和复制的场所，是细胞遗传特性和细胞代谢活动的控制中心。
10．构成细胞的各部分结构并不是彼此孤立的，而是互相紧密联系、协调一致的，一个细胞是一个有机的统一整体，细胞只有保持完整性，才能够正常地完成各项生命活动。展开
人工智能实验室「又名人工智能网」中国人工智能领域的专业媒体...123
152545881852017-11-03
这里的钳是固定的意思
电压钳技术是保持细胞膜两侧电压恒定的技术，使细胞膜两次电压稳定在某一个数值，这样就能够测定在这个电位的水平下细胞膜上离子通道的活动情况。
膜片钳技术是固定一片非常小的细胞膜，测定这片膜上的离子通道开放情况，解决了可以单个离子通道活动的测量问题。
现在的膜片钳技术同时包括了以前的电压签技术。
电压钳技术是保持细胞膜两侧电压恒定的技术，使细胞膜两次电压稳定在某一个数值，这样就能够测定在这个电位的水平下细胞膜上离子通道的活动情况。
膜片钳技术是固定一片非常小的细胞膜，测定这片膜上的离子通道开放情况，解决了可以单个离子通道活动的测量问题。
现在的膜片钳技术同时包括了以前的电压签技术。
九年级化学实验活动5 一定溶质质量分数的氯化钠溶液的配制123
你猜56152017-11-09
那得看你是在记录什么epsc 还是ipsc 还要看你用的内液是什么？
膜片钳数据的处理123
gs20101111902021-08-18
看你想分析什么数据？
有很多软件可用来处理分析，origin，clampfit，mini analysis·····
有很多软件可用来处理分析，origin，clampfit，mini analysis·····
何谓刺激伪迹?有什么意义?_问答详情_蚂蚁淘,【正品极速】生物...123
儍缺粘0012021-07-29
电生理常规技术 电生理常规技术 一．电刺激。 二．生物放大器：正确选择，植物性神经冲动幅度多为50-100μV。不同组织，应采用不同的参 数。如 ECG：振幅0.1-2mV, 灵敏度0.5-1mV，时间常数0.1-1.0s，高频滤波1KHz 植物性神经冲动：振幅50-150μV, 灵敏度25-100μV，时间常数0.01-0.1s，高频滤波3-5KHz 中枢神经元单位放电：振幅100-300μV, 灵敏度50-100μV，时间常数0.01-0.1s，高频滤波5-10KHz 三．玻璃微电极： 常用尖端0.5-5μm，向细胞内插入时，需小于0.5μm（细胞直径的1/10~1/100），且尖端的倾斜度应相当缓和，一般微电极可分为金属微电极和玻璃微电极两类。 金属微电极，现多用镀铂钨丝电极（platinum-plated tungsten electrode），在钨丝上镀铂，可极大改善电极的电学特性，噪声可大大降低，加之机械强度大，适合长期体外记录（paré D， Gaudreau H. Projection cells and interneurons of the lateral and basolateral amygdala: distinct firing patterns and differential relation to the thera and delta rhythms in conscious cats. J Neursci, 1996,16(10):3334-3350 现要也常用镀银碳纤维电极。玻璃微电极记录易受机械位移的影响，加之尖端的电解质会漏出或堵塞，不适合半小时以上的长时间记录，玻璃微电极可分单管和多管微电极。 毛坯管在国外多用Pyrex管，国内多用GG-17和95料玻管。细胞外记录多采用外径1.5-2mm玻璃，细胞内记录则采用外径1mm细玻管，内外径之比约为2：3或5：6，长6-8cm。拉制前必须经过清洁处理。 清洁液：用等量的（250ml）王水（可反复应用）。一般毛坯管捆成把放入清洁液中1-2h，取出自来水冲洗20-30min，再放入无水酒精中洗 涤，再放入盛满蒸馏水烧杯中加热煮沸10min，倒去蒸馏水，再换新蒸馏水反复3次，再放入烤箱中烤干，备用，切不可用市售的洗涤剂，以防降低电极充灌液的表面张力而影响冲灌。 充灌液常用3mol/L KCl，为避免Cl-扩散，也可用2mol/L醋酸钾或柠檬酸钾充灌，也有人用0.5-1mol/L NaCl（低浓度）充灌可降低噪音。细胞外记录时，最后再用3-4mol/L NaCl +2%旁胺天蓝溶液定位。在膜片钳中还常加钙螯合剂，如EGTA。 阻抗与不同组织相关。 四．电生理实验中噪声和干扰的形成和排除。 （一）来源。 1．干扰信号与生物电生理信号的鉴别。准确区分生物电信号与干扰的伪迹是电生理实验的先决条件。 2．来源。主要有三个方面： 其一。物理性干扰。1）静电和电磁的干扰：实验室附近高压电，室内日光灯可产生50Hz的静电干扰，尤其是交流电，尤其是50Hz频率干扰最大（电子设备为50Hz）。其特点是幅度大，波形规则。2）噪声干扰：电子元件本身产生杂乱无章电压和电流称噪声，一般与放大器内部元件的质量与性能有关。 其二。接地不良。1）地线电阻应小。2）仪器故障。产生漏电电流，在地线上形成电位差，产生干扰。3）地线行走过程中打圈，形成线圈，易接受电场和磁场的干扰。4）各仪器设备应采用一点接地的方式，若采用多点接地，形成大地回路，也会引起干扰。5）地线过长与电源线形成交流环路。6）误用市电三孔中性线作为大地线（中性线上有4-5A电流）。 其三。生理性干扰。1）大脑电活动时，眨眼、眼球运动均对脑电具有干扰作用。2）实验中环境温度过低，动物寒战、抖动，引起肌电的发放而干扰记录，或因呼吸运动引起记录部位机械位移引起干扰信号。3）心电干扰，频率与心电一致。 （二）排除。 1．物理性干扰。1）屏蔽法：用于低频电和静电干扰，屏蔽线分布电容较大，线与线之间不可平行排列，更不可为了美观而将多线扎在一起，这会加大分布电容，易偶合高频干扰噪声。2）远离法。3）改变位置法。依电流方向相反，产生反向磁场的原理，改变各个仪器的位置或放大器输入的方位，会使干扰磁场抵消，微电极放大器探头阻抗高，易引入干扰，实验前可反复调整其方向和位置。4）微电极记录时尽量减少微电极本身的阻抗，减少输入阻抗及干扰信号在这个阻抗上形成干扰电压降，微电极到探头的连线<5cm。5）用监听器监听噪声，以便及时排除。 2．仪器质量，尽量改进。 3．接地不良。地线应尽量短粗，不能与电源线平行或打圈，不 要接在电源线的中性线 上，地线单独埋设，埋置处应较潮湿，附近无大型变压电动机，并在坑内加些食盐。 4．检查各仪器 是否漏电。 5．慢生物电变化时用乏极化电极，实验对象宜安静，勿受振动。 （三）刺激伪迹过大及防止。1）尽量减少刺激脉冲的波宽和强度。2）在动物体或标本上，尽量延长刺激部位 的距离，在刺激电极 和引导电极之间加一接地电极，此电极离引导电极愈近，刺激伪迹就越小；采用变换刺激极性，结合叠加处理，可抵消伪迹。 注：微电极中高浓度充灌液易蒸发，造成电极回路的开路，因此常在微电极插入Ag-AgCl丝或铂金丝后，在微电极尾部开口处涂上一层凡士林，防止水分蒸发。 动物麻醉和制动下，体温会下降，故应保温调节，加温维持肛温36-38℃. 记录脊髓背角或腹角神经元将脊柱前后拉直以减小呼吸运动造成的位移。记录脑神经元应在表面用温热石蜡制成一油槽，防止血管博动和呼吸运动的影响。 五．细胞内微电极记录 多用幼年离体标本，其原因：1）幼年动物骨骼骨化不完全，结缔组织少，神经组织易于分离，标本耐缺氧能力强，有的标本可存活数小时至数天，但标本也可能发育不完全，如背根和脑干到脊髓的投射纤维要到三周动物才完全。神经纤维髓鞘化不全，其药理作用与成年动物也不同。从实验角度上讲，脊髓背腹根短，不利于电生理刺激记录。小鼠一般应小于15g，制备标本才 有可能成功，而这样小鼠背腹根神经节不利于电生理实验。最适合的动物是金黄地鼠（hamster），介于大小鼠之间，制备标本活性很好，可能与其冬眠习性有关，而且其脊髓背腹根长达20-25mm，利于电生理记录。动物选择仍依实验而定，同一标本，不同中枢结构对缺氧耐受力也不同。金黄地鼠，若观察脊髓背角神经元活动，可用150-160g体重的鼠均可，但要研究腹角神经元，则体重不宜超过30g。 离体标本的灌流注，如ACSF。其中缓冲液成分有两种，一是重碳酸盐（bicarbonate）：温度低（4℃），配方有利于降低组织兴奋性。二是磷酸盐缓冲液和HEPES缓冲液：其优点是接近于 人体环境。各种缓冲液一般都先配母液，临用前一天，或临用前稀释。
2017届第一轮复习第六章第2讲原电池（老师）123
bellefille2021-07-27
对脑片中的单个细胞做whole cell，需要不断灌流（用蠕动泵，流速2-4ml/min），电极和接地电极（浴液电极）都是用的镀AgCL的银丝，出现这样的现象：接地电极浸入浴液的一段的AgCL很快就消耗光了（肉眼看变白了），引起基线漂移，无法继续记录电流，而接在holder上的那根银丝可以用很久不被消耗。如果将其他不变，但是停止灌流，不会出现这种情况，但是脑片没办法不灌流啊。对了，我压脑片不是用的铂金做的框，是用的包了绝缘膜的钢片，不知道和这个有没有关系，但是已经做了绝缘处理了啊
这个问题出现很久了，一直没得到解决，问了好多实验室都说从来没有遇到这样的情况；问过一个工程师，他说这个不会是灌流引起的，可能是什么地方形成了短路；我以前做单细胞的时候（不用蠕动泵）也没有遇到这样的问题，在网上查了半天看见说可能是形成了原电池，导致AgCL的不断消耗，觉得很疑惑，这个原电池的另一极是什么？怎么形成的原电池？改怎么解决呢？
如果万一不行还想过把两根银丝都换成铂金丝，请问有没有谁是用铂金丝的？是不是和银丝一样用啊？有什么需要注意的？
现在因为这个没有办法做试验，心急如焚啊，请各位战友来帮帮我啊
这个问题出现很久了，一直没得到解决，问了好多实验室都说从来没有遇到这样的情况；问过一个工程师，他说这个不会是灌流引起的，可能是什么地方形成了短路；我以前做单细胞的时候（不用蠕动泵）也没有遇到这样的问题，在网上查了半天看见说可能是形成了原电池，导致AgCL的不断消耗，觉得很疑惑，这个原电池的另一极是什么？怎么形成的原电池？改怎么解决呢？
如果万一不行还想过把两根银丝都换成铂金丝，请问有没有谁是用铂金丝的？是不是和银丝一样用啊？有什么需要注意的？
现在因为这个没有办法做试验，心急如焚啊，请各位战友来帮帮我啊
一书中对膜片钳技术进行了系统论述从此奠定了膜片钳技术发展的里程...123
膞小Q8小乐2021-07-23
玛丽亚·斯克沃多夫斯卡-居里（波兰语：Maria Skodowska-Curie，1867年11月7日－1934年7月4日），常被称为玛丽·居里（法语：Marie Curie）或居里夫人（法语：Madame Curie），波兰裔法国籍女物理学家、放射化学家。
1903年和丈夫皮埃尔·居里及亨利
1903年和丈夫皮埃尔·居里及亨利
用成年鼠分离的心肌细胞做膜片钳怎样能让细胞快速贴壁?123
zxf米修米修2021-08-03
原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型，被广泛应用于心血管研究之中.我们实验室经过长期尝试，摸索出了一些行之有效的方法，并积累了一些经验，现总结如下：
1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力，成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力.因此，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长.大量观测表明，选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.
2消化酶的选择及使用
新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法，前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强，容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，且在新生大鼠心肌组织，以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g?L1,我们使用的为0.8 g?L1.胶原酶最好现用现配.
3消化程度的把握
新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩，细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力;消化不足，细胞聚集成团，无法分清细胞边界，难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r?min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散，使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时，应停止消化.
4接种的细胞密度
心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触，进而影响细胞对肥大刺激的反应，而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言，应根据实验的观测目的决定单位面积上的细胞数量.例如，如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个;若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测，则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.
1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力，成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力.因此，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长.大量观测表明，选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.
2消化酶的选择及使用
新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法，前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强，容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，且在新生大鼠心肌组织，以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g?L1,我们使用的为0.8 g?L1.胶原酶最好现用现配.
3消化程度的把握
新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩，细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力;消化不足，细胞聚集成团，无法分清细胞边界，难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r?min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散，使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时，应停止消化.
4接种的细胞密度
心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触，进而影响细胞对肥大刺激的反应，而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言，应根据实验的观测目的决定单位面积上的细胞数量.例如，如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个;若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测，则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.
【求助】膜片钳实验交流123
袁乐kG2021-08-12
膜片钳技术被称为研究离子通道的“金标准”。是研究离子通道的最重要的技术。目前膜片钳技术已从常规膜片钳技术（Conventional patch clamp technique）发展到全自动膜片钳技术（Automated patch clamp technique）。
膜片钳操作实验 实验方法123
晚安1432017-11-09
电阻是变化的，看导通程度，正是因为电阻是变化的，所以才有可能输出波形啦一般来说集电极发射极电阻，指的是导通后最小的电阻，大功率三级管可能只有1欧姆左右的电阻，小功率的三级管有可能几百欧姆到几时欧姆不等的。
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