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제품특징
□ 특징
● SMART 기술을 사용하여 yeast에서 직접 library 제작
● 어려운 cloning이나 library 증폭 과정 불필요
● Yeast two-hybrid screening을 수백회 할 수 있을 만큼 충분한 시약으로 구성됨
□ Mate & Plate 장점
전형적인 방법으로 yeast two-hybrid용 library를 제작하고 screening 하는 것은 노동 집약적인 과정이다. 하지만, Mate & Plate Library는 미리 library로 형질 전환된 yeast strain (MATα)으로 새 bait 단백질을 발현하는 reporter strain (MATα)과 함께 하룻밤 배양하여 적절한 selective/minimal 배지에 도말하면 되므로, 아주 쉽게 상호작용을 탐색할 수 있다. Clontech은 library screening에 적용 가능한 다양한 형태의 tissue-specific library, normalized library 및 universal library를 제공하고 있다.
Figure 1. Library generation using in vivo homologous recombination in yeast. Mate & Plate Libraries are created via recombination between your SMART-generated cDNA and the Matchmaker prey vector, pGADT7-Rec. Transformed yeast colonies are pooled, mixed, and aliquoted into multiplevials. Each single 1 ml vial can be used for a two-hybrid screen.
□ 간단하고 빠르게 만들 수 있는 자신만의 Library
Clontech의 Mate & Plate Library에서 자신의 목적에 적합한 Library를 찾을 수 없다면, Make Your Own Mate & Plate Library System을 사용하는 것도 좋다. 본 system을 사용하면 수 백회의 yeast two-hybrid screening을 할 수 있을 만큼 충분한 양의 library를 일주일 안에 제작할 수 있다. Library 제작은 yeast 자체의 homologous recombination 현상을 사용하여 Y187 library yeast strain에서 직접 이루어진다 (Figure 1). 일반적인 library 제작 과정에 필요한 수고 (예: library cloning, 증폭, 정제 등)를 피할 수 있다.
□ 경제적인 SMART cDNA 합성 기술
본 system은 Clontech의 SMART cDNA 합성 기술을 사용하여 total RNA 100 ng 정도의 적은 양으로 어떠한 조직의 cDNA library도 제작할 수 있다. SMART 기술은 Moloney murine leukemia virus 역전사효소의 terminal transferase와 template switching activity를 이용하여 첫 번째로 합성되는 cDNA 양 말단에 서열을 알고 있는 primer binding site가 생성되도록 한다.따라서 SMART 기술로 합성된 cDNA는 바로 PCR 주형으로 사용이 가능하다. 또한, 이렇게 증폭된 cDNA는 homologous recombination을 이용하여 Matchmaker Gold prey plasmid인 pGADT7-Rec으로 cloning할 수 있다. 이러한 특성으로 인하여 ng 수준의 RNA (microdissected tissues, lasercaptured cells, biopsy samples 등)로부터 cDNA를 합성하여 pGADT7-Rec vector와 함께 yeast strain Y187로 co-transformation하여 직접적으로 library를 제작할 수 있다.
□ Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.
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② 应取pH8.0，这样可使核苷酸带较多负电荷，利于吸附于阴离子交换树脂柱。虽然pH 11.4时核苷酸带有更多的负电荷，但pH过高对分离不利。
③ 当不考虑树脂的非极性吸附时，根据核苷酸负电荷的多少来决定洗脱速度，则洗脱顺序为CMP>AMP> GMP > UMP，但实际上核苷酸和聚苯乙烯阴离子交换树脂之间存在着非极性吸附，嘌呤碱基的非极性吸附是嘧啶碱基的3倍。静电吸附与非极性吸附共同作用的结果使洗脱顺序为：CMP> AMP > UMP >GMP。
1. Buffer中离子浓度过大，甘氨酸或者Tris碱有可能疏忽多加了
2.没有加相应浓度的SDS
3.电泳周围温度高，也是一个原因
我使用的是1%琼脂糖凝胶，电泳缓冲液为0.5×TBE。
请问各位大虾，在不影响实验结果的前提下，这样的含EB的电泳缓冲液可以反复使用多少次？
谢谢^_^
500ml
2。阴极缓冲液 ( 10 × ) ：将 60.55g Tris ,89.58g Tricine 及 5g SDS 溶于400ml 蒸馏水中，加水至终体积为500ml
使用时稀释至1×的缓冲液，电泳槽内槽加入阴极电泳缓冲液，外槽加入阳极电泳缓冲液。形成Trcine-SDS-PAGE电泳系统。
如果你是制胶或者做电泳缓冲液的话，不用灭菌。
Tris-Glycine/SDS;
MOPS/SDS;
Bis-Glycine/SDS等不同的缓冲液、预混液等。
不知道这几种缓冲液有什么异同呢？
比如如果是Invitrogen的预制胶-预混液电泳系统，每种预制胶有适配缓冲液，但是如果用其他的缓冲液似乎也可以得到不错的结果，那么是否说明电泳缓冲液只要满足了缓冲ph范围，其他的不是特别重要呢？
此外，附加提问是，PVDF膜在转膜的时候，转膜缓冲液中不需要加入甲醇，那么是加入甲醇转膜效果好还是不加好呢？
谢谢！
