细胞周期检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Kit)是一种采用经典的碘化丙啶染色(Propidium staining,即PI staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。碘化丙啶(Propidium,简称PI)是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,然后根据DNA含量的分布情况,可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。碘化丙啶染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失,因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染,即荧光强度小于1,在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰,即凋亡细胞峰。细胞发生凋亡时,由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂,产生凋亡小体,使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期,细胞对前向角光散射的能力显著降低,对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期,前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测,则必须把组织消化成单细胞状态,才可以进行检测。注意事项:1. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。2. 碘化丙啶对人体有刺激性,请注意适当防护。3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
UE-C6031S/C6031L参考文献:1.An Experimental Analysis of the Molecular Effects of Trastuzumab (Herceptin) and Fulvestrant (Falsodex), as Single Agents or in Combination, on Human HR+/HER2+ Breast Cancer Cell Lines and Mouse Tumor Xenografts应用方向:周期检测:乳腺癌细胞系ZR-75-1 和 BT-474
2.Wnt/β-catenin signaling pathway inhibits the proliferation and apoptosis of U87 glioma cells via different mechanisms.应用方向:周期检测:U87胶质瘤细胞
3.Treatment with a selenium-platinum compound induced T-cell acute lymphoblastic leukemia/lymphoma cells apoptosis through the mitochondrial signaling pathway应用方向:周期检测:Jurkat和Molt-4细胞
4.Human cytomegalovirus miR-US5-1 inhibits viral replication by targeting Geminin mRNA应用方向:周期检测:U373细胞
5.shRNA-Mediated EMMPRIN Silencing Inhibits Human Leukemic Monocyte Lymphoma U937 Cell Proliferation and Increases Chemosensitivity to Adriamycin.应用方向:周期检测:U937细胞
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各位,最近几个月一直在帮着公司进口细胞株,我是新手,从来没有接触过这样的业务,摸着石头过河,遇到了很多问题,也得到了很多教训和经验,不敢独享,觉得还是分享一下吧,给有需要的指指道,希望能少走弯路。
先不多说,正文如下:
大家看好了,我写的是企业进口细胞株,不是针对高校或者别的什么科研机构,因为到目前为止国家还没有一个正式的文件去指导企业进口细胞株,只有一个过渡性文件,因此各地操作时也有些不同,除了北京、上海、广东等一些发达的地方有操作程序,其他地方由于企业进口细胞株的案例很少,因此很麻烦的(比如黑龙江,我们最后都找到省卫生厅厅长了)。
首先,你们公司如果选择购买一个国外的细胞株,最先考虑的是付款问题,你得找一家进出口代理公司,帮你操作,这个都是比较常规的,另外你最好再找一家在北京或者上海的公司帮助清关。这里有涉及到“进口代理协议”和“供货合同,我们当时是签了一个三方合同”,这里一定要注意和国外沟通好,需要进口的细胞株的名称、数量、价值等等,后期发货的时候千万不要不一致。
因为细胞株是特殊物品,需要从省卫生厅那里拿到一个“医用特殊物品准出入境证明”,这个东西很难搞的(高校或科研机构容易一些,基本上都有程序),尤其是一些没有先例的省份(领导不敢批,怕担事),我们公司就是黑龙江的先例,这个东西不知道怎么办的到时候可以找我私聊。搞这个东西的正常周期是2-3周,请注意,一定要把准出入境的有效时间尽量写长一点,还有就是主送单位一定要你所清关的口岸的检疫局,例如北京口岸入境,就写北京出入境检验检疫局。当时没人提醒我,这两个我都搞错过,结果多跑了几次,我们的国家服务人员态度一次比一次差,快气死了,不过后来还是搞到了。
拿到“医用特殊物品准出入境证明”以后,预付款也打了,国外准备要发货了,这之前还要一个“特殊物品入境审批单”,这个需要到你所清关的口岸的检疫局搞,下面以北京出入境检验检疫局为例,这个东西要是你是外地的(非清关所在口岸)是搞不到的,你得先去北京出入境检验检疫局备案(就是公司证照原件,情况说明,单位说明等等,比较好办),然后在你细胞株进口之前2-3周申请(1周能批,有效期3个月)。我当时是委托北京一家公司办的,因为你自己办是不方便的,到时候审批单还要亲自去取,外地的很麻烦。
箱单、发票就不说了
接下来是运输,细胞株一般都用干冰运输,当然也可以选择液氮,不过价钱不一样,液氮要比干冰贵40%左右。要计算好运输过程中干冰损失量,量要足够,最好放一个温度记录仪,如果你没有把握,在货物到港清关之前,也可以加干冰的,就比较贵,单次1000元左右。发货之前一定和发货方、运输公司沟通好,标签和数量一定要准入证明和审批单一致,要不然清关很麻烦的,我再次犯了一个错误。
最后就是清关了,这里一定要注意,你找的清关公司的清关能力一定强,一定是做过冷链清关的。
总结一下:
程序是:签合同,找进口代理和清关公司,办理相关证明文件,选择冷了运输公司,运输,清关。
文件:合同、代理协议、医用特殊物品准出入境证明、特殊物品入境审批单、发票、箱单等。
另外,这里面还有不少细节,我就不一一说了,如果真有这方面运输的,可以找我。
版主horizon801留言:
谢谢分享
1.培养基最好是培养原代细胞专门的培养基或说是配套的培养基; 2.关键还是生长因子等的浓度; 3.如果需要的话,需要明胶包被.
1、 缓冲溶液对反应物的测定没有干扰
2、缓冲组分的浓度为1:1
3、有足够的缓冲容量
4、缓冲溶液的PH应在所需范围内
5、组成缓冲溶液的弱碱PKB和弱酸PKA应接近或等于所需的POH值或PH值(PH+POH=14)
配制
只要知道缓冲对的PH值,和要配制的缓冲液的pH值(及要求的缓冲液总浓度),就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算,较麻烦,前人为减少后人的计算麻烦,已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要我们知道要配制的缓冲液的pH,经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。
经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升,而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升,而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
计算好后,按计算结果准确称好固态化学成分,放于烧杯中,加少量蒸馏水溶解,转移入50ml容量瓶,加蒸馏水至刻度,摇匀,就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制,均按表格按比例混合,某些试剂,必须标定配成准确浓度才能进行,如醋酸、氢氧化钠等。另外,所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。

