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蚂蚁淘/Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒/50T/A6079M
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蚂蚁淘/Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒/50T/A6079M
品牌 / 
ebiomall
货号 / 
A6079M
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产品概述:

产品内容

组分

A6079S (10T)

A6079M (50T)

A6079L (100T)

A. 1×Annexin V 结合缓冲液

10 mL

50 mL

50 mL×2

B.Annexin V-PE

50 μL

250 μL

500 μL

C. RedNucleus II

100 μL

500 μL

1 mL

储存条件4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。Annexin V-PE 储存于50 mM Tris, 100 mM NaCl, 1% BSA, 0.02% NaN3,pH 7.4 的溶液中。光谱特性Annexin V-PE:Ex/Em=488/578 nmRedNucleus II:Ex/Em=635/695 nm产品介绍

Annexin V是一类广泛分布于真核细胞胞浆的钙离子依赖性的磷脂结合蛋白。Annexin V则选择性的结合磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS),PS在细胞正常状态下是分布于细胞磷脂层内侧,即靠近细胞质,当细胞处于早期凋亡阶段,PS会从细胞内侧翻转至细胞外侧,此时Annexin V可以与PS结合,被红色荧光染料PE标记的Annexin V作为探针则会在一定波长激发的情况下检测出处于早期凋亡状态的细胞。对于坏死细胞,由于细胞完整性已经被破坏,Annexin V-PE则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的PS结合,从而也使坏死细胞呈现红色荧光。
本试剂盒中提供的RedNucleus II是一种远红光染料,属于蒽醌类化合物,不能透过活细胞和早期凋亡细胞完整的细胞膜,是非渗透性的,但是可以快速染色死亡和透化细胞中的细胞核/dsDNA。RedNucleus II是一种理想的碘化丙啶( PI )和7-AAD的替代物,与PE联用,无需补偿调节,具有更好的光谱特性:不受紫外线的激发,也不与PE/PE同系物重叠发射,故可以和FITC,PE及紫色荧光染料结合用于多色分析。与Annexin V-PE联用时,RedNucleus II被排除在活细胞和早期凋亡细胞外,而晚期凋亡细胞和死细胞则同时被Annexin V-PE和RedNucleus II结合染色呈现双阳性。AnnexinV-PE/RedNucleus II细胞凋亡检测试剂盒可用流式细胞仪及或其他荧光检测设备进行检测。
说明书:UE-A6079S/A6079M/A6079L
MSDS:MSDS A6079 Annexin V-PE and RedNucleus Ⅱ Apoptosis Kit
常见问题解答:◆为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。◆实验结果使用什么仪器观察?实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。◆流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。◆这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)◆各象限代表的细胞状态问题?Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

◆假阳性问题?

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。◆荧光染料选择的问题?1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。◆圈门问题?1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:◆免疫染色与凋亡染色顺序问题?Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。◆这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)◆固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的◆组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。◆Annexin V可以用在植物和细菌中吗?Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。
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关键词:Jurkat Jurkat细胞 细胞株产品简介:我公司主要经营ELISA试剂盒、细胞、抗体、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗、其产品吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高,代做ELISA实验,全国范围内免费快递运输,如出现运输质量问题,我们可以包退换货。请放心购买产品详情:Jurkat Jurkat细胞 细胞株规格:96T/48T保存条件:2-8℃厂商:上海通善生物科技用 途:用于定量检测血清、血浆及相关液体样本中人28S 查看更多>
2021-07-15
原代细胞株的培养实验实验目的和要求:掌握无菌操作技术。了解小鼠解剖操作技术。了解原代细胞培养的一般方法与步骤了解培养细胞的消化分散。了解细胞计数方法。了解倒置显微镜的使用。实验原理: 原代细胞株的培养实验是将机体内的某组织取出,分散成单细胞,在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制、以及细胞的衰老,死亡等生命现象。实验内容:动物的选择:选择大约一半足孕时间的胚胎,10-13天龄 查看更多>
关键词:NCI-N87 NCI-N87细胞 细胞株产品简介:我公司主要经营ELISA试剂盒、细胞、抗体、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗、其产品吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高,代做ELISA实验,全国范围内免费快递运输,如出现运输质量问题,我们可以包退换货。请放心购买产品详情:NCI-N87 NCI-N87细胞 细胞株规格:96T/48T保存条件:2-8℃厂商:上海通善生物科技用 途:用于定量检测血清、血浆及相关液体样本中 查看更多>
7月11日,Cell旗下的《Stem Cell Reports》杂志作为推荐文章正式刊发仁济医院神经外科和美国加州大学戴维斯分校(University of California Davis)合作的一项研究成果"Electrical Guidance of Human Stem Cells in the Rat Brain". 查看更多>
For amplification of cognate sequences from different organisms, or for "evolutionary PCR", one may increase the chances of getting product by designing 查看更多>
乙醇-醋酸铵缓冲液(pH3.7) 取5mol/L醋酸溶液15.0ml,加乙醇60ml和水20ml,用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7,用水稀释至1000ml,即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0) 取三羟甲基氨基甲烷12.14g,加水800ml,搅拌溶解,并稀释至1000ml,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1) 取氯化钙0.294g,加0.2mol/L三羟甲基... 查看更多>
上海乔羽生物科技有限公司在发布的Western转移缓冲液(5×)供应信息,浏览与Western转移缓冲液(5×)相关的产品或在搜索更多与Western转移缓冲液(5×)相关的内容。 查看更多>
DNA荧光染色法: 1.原理:利用荧光染剂(bisbenzimide, Hoechst 33258)侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域,因为支原体之DNA中A-T含量占多数(55~80%),所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后,在细胞核外 查看更多>
1.Transwell肿瘤细胞迁移实验过程与Transwell侵袭实验基本一致,不同的只是不需要铺Matrigel。个人认为,由于没有基质胶的阻挡,细胞穿过膜的速度较侵袭实验明显加快,所以细胞量要更大。我做侵袭实验的细胞密度是1×105,而迁移实验的密度是1×106。另外,下层培养液的FBS浓度也可适当下调,我做侵袭 查看更多>
#1840人脑干星形胶质细胞-ScienCell原代细胞是由北京裕恒丰科技有限公司代理或销售的ScienCell品牌的试剂,产品来源于美国ScienCell。北京裕恒丰科技有限公司是中国最权威的#1840人脑干星形胶质细胞-ScienCell原代细胞试剂销售服务商之一,在北京丰台区等地方销售#1840人脑干星形胶质细胞-ScienCell原代细胞试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业#1840人脑干星形胶质细胞-ScienCell原代细胞仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的#1840人脑干星形胶质细 查看更多>
关键词:F9 F9细胞 细胞株产品简介:我公司主要经营ELISA试剂盒、细胞、抗体、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗、其产品吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高,代做ELISA实验,全国范围内免费快递运输,如出现运输质量问题,我们可以包退换货。请放心购买产品详情:F9 F9细胞 细胞株规格:96T/48T保存条件:2-8℃厂商:上海通善生物科技用 途:用于定量检测血清、血浆及相关液体样本中人28S抗核糖体抗体(28S rRNP) 查看更多>
Preparation of cell lysates from E. coli by sonicationMaterialsLysis buffer50 mM Tris-HCl pH 7.5 50-200 mM NaCl*5 mM DTT1 mM PMSF*The NaCl concentration used i 查看更多>
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看了一篇文献说,某某干预对SV40转染的人成纤维细胞有细胞毒性。不明白他想说明什么。#细胞生物学#
企业如何进口细胞株
各位,最近几个月一直在帮着公司进口细胞株,我是新手,从来没有接触过这样的业务,摸着石头过河,遇到了很多问题,也得到了很多教训和经验,不敢独享,觉得还是分享一下吧,给有需要的指指道,希望能少走弯路。
先不多说,正文如下:
大家看好了,我写的是企业进口细胞株,不是针对高校或者别的什么科研机构,因为到目前为止国家还没有一个正式的文件去指导企业进口细胞株,只有一个过渡性文件,因此各地操作时也有些不同,除了北京、上海、广东等一些发达的地方有操作程序,其他地方由于企业进口细胞株的案例很少,因此很麻烦的(比如黑龙江,我们最后都找到省卫生厅厅长了)。
首先,你们公司如果选择购买一个国外的细胞株,最先考虑的是付款问题,你得找一家进出口代理公司,帮你操作,这个都是比较常规的,另外你最好再找一家在北京或者上海的公司帮助清关。这里有涉及到“进口代理协议”和“供货合同,我们当时是签了一个三方合同”,这里一定要注意和国外沟通好,需要进口的细胞株的名称、数量、价值等等,后期发货的时候千万不要不一致。
因为细胞株是特殊物品,需要从省卫生厅那里拿到一个“医用特殊物品准出入境证明”,这个东西很难搞的(高校或科研机构容易一些,基本上都有程序),尤其是一些没有先例的省份(领导不敢批,怕担事),我们公司就是黑龙江的先例,这个东西不知道怎么办的到时候可以找我私聊。搞这个东西的正常周期是2-3周,请注意,一定要把准出入境的有效时间尽量写长一点,还有就是主送单位一定要你所清关的口岸的检疫局,例如北京口岸入境,就写北京出入境检验检疫局。当时没人提醒我,这两个我都搞错过,结果多跑了几次,我们的国家服务人员态度一次比一次差,快气死了,不过后来还是搞到了。
拿到“医用特殊物品准出入境证明”以后,预付款也打了,国外准备要发货了,这之前还要一个“特殊物品入境审批单”,这个需要到你所清关的口岸的检疫局搞,下面以北京出入境检验检疫局为例,这个东西要是你是外地的(非清关所在口岸)是搞不到的,你得先去北京出入境检验检疫局备案(就是公司证照原件,情况说明,单位说明等等,比较好办),然后在你细胞株进口之前2-3周申请(1周能批,有效期3个月)。我当时是委托北京一家公司办的,因为你自己办是不方便的,到时候审批单还要亲自去取,外地的很麻烦。
箱单、发票就不说了
接下来是运输,细胞株一般都用干冰运输,当然也可以选择液氮,不过价钱不一样,液氮要比干冰贵40%左右。要计算好运输过程中干冰损失量,量要足够,最好放一个温度记录仪,如果你没有把握,在货物到港清关之前,也可以加干冰的,就比较贵,单次1000元左右。发货之前一定和发货方、运输公司沟通好,标签和数量一定要准入证明和审批单一致,要不然清关很麻烦的,我再次犯了一个错误。
最后就是清关了,这里一定要注意,你找的清关公司的清关能力一定强,一定是做过冷链清关的。
总结一下:
程序是:签合同,找进口代理和清关公司,办理相关证明文件,选择冷了运输公司,运输,清关。
文件:合同、代理协议、医用特殊物品准出入境证明、特殊物品入境审批单、发票、箱单等。
另外,这里面还有不少细节,我就不一一说了,如果真有这方面运输的,可以找我。
版主horizon801留言:
谢谢分享
有人有用过吉凯的GV248慢病毒吗,关于胃癌方面的,小弟在构建LncRNA干扰的稳转胃癌细胞SGC-7901株,转想请问这种细胞株嘌呤霉素的筛选浓度是多少,如何进行筛选?
怎样才能在实验中提高原代细胞培养的成功率啊???
1.培养基最好是培养原代细胞专门的培养基或说是配套的培养基; 2.关键还是生长因子等的浓度; 3.如果需要的话,需要明胶包被.
小弟养脂肪干细胞,不知道那一步出问题长出的毛骨悚然的东西,求各位大神鉴定一下,给予一些指导。不甚感激
缓冲液的时候颜色总是红色,没有变蓝,而且缓冲液加到孔里后总是往上跑,电级没有反。
是sds-page实验用的
各位大神,刚开始学习细胞培养,实验室也没有人做这方面的,希望有前辈做过毛囊干细胞的多多赐教!
TBS缓冲液 123
弘贝方弘2017-10-02
索莱宝的TBS缓冲液怎么样
选择缓冲溶液的原则:
1、 缓冲溶液对反应物的测定没有干扰
2、缓冲组分的浓度为1:1
3、有足够的缓冲容量
4、缓冲溶液的PH应在所需范围内
5、组成缓冲溶液的弱碱PKB和弱酸PKA应接近或等于所需的POH值或PH值(PH+POH=14)
配制
只要知道缓冲对的PH值,和要配制的缓冲液的pH值(及要求的缓冲液总浓度),就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算,较麻烦,前人为减少后人的计算麻烦,已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要我们知道要配制的缓冲液的pH,经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。
经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升,而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升,而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
计算好后,按计算结果准确称好固态化学成分,放于烧杯中,加少量蒸馏水溶解,转移入50ml容量瓶,加蒸馏水至刻度,摇匀,就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制,均按表格按比例混合,某些试剂,必须标定配成准确浓度才能进行,如醋酸、氢氧化钠等。另外,所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。
肝细胞的分离123
blue66612017-08-17

最近分离肝脏原代细胞,发现分出来的都是细胞碎片,请问最可能的问题出在哪里呢?求指教