UE-J6004S/J6004L无论您使用哪种染料,四甲基罗丹明甲酯(TMRM)还是MitoTracker Red FM,未处理的细胞都会发出荧光。只要细胞线粒体膜电位降低就会导致荧光信号降低,最重要的是变化的程度。当线粒体膜电位发生改变时,JC-1染料不仅强度改变,还有激发和发射比例光谱的改变。设置未处理的对照和用线粒体膜电位去稳定剂(如CCCP或FCCP)处理的阳性对照是非常重要的。这些染料仅用于活细胞,在固定处理的细胞中无法保留相同程度的信号。◆用PFA固定是否可行(现场成像后,用于储存)?或者这会干扰染料信号吗?如果您想保持JC-1染料和固定后检测到的线粒体膜电位之间的关系,这是不可能的,这是因为JC-1依赖于线粒体膜电位,而线粒体膜电位将被固定所消除。◆请问做JC-1培养板该如何选择?比如用酶标仪检测吸光度的话是否一定需要在避光培养板中做?普通的透明板可以吗?如果用荧光显微镜观察拍照的话又应该用什么板呢?荧光酶标仪检测的话要选用黑色的酶标板,荧光显微镜拍照的话可以用透明的板子◆请问,对于从动物组织中用线粒体提取试剂盒提取出来的线粒体,用CCCP设置阳性对照组时,应该用什么浓度处理多长时间,不同组织中提纯出来的线粒体,处理方式是否不同?纯化的线粒体不适合用于CCCP做阳性对照◆可以用来组织切片染色吗,如果可以需要注意什么呢?适用于组织的流式检测吗?需要新鲜组织,先提取纯化线粒体再检测,可能不太适合做流式◆请问CCCP对细胞膜电位的抑制作用可以有多长,我想测试长时间的48h?之后再染JC-1,有什么建议吗?对于大多数细胞,通常10µM CCCP处理20分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料确定◆你好,请问染完色后,用抗淬灭剂封片后免疫荧光显微镜观察,镜下观察细胞会移动,拍出来的照片是模糊的,请问出现这种情况一般考虑什么问题?怎么解决呢?可能是细胞没固定的原因,一般可以在孔板里染色后直接用倒置显微镜在孔板里观察,不用封片◆请问用纯化的线粒体比直接用细胞测流式有什么优势吗?是孵育的时间比较短吗?直接用细胞做的,趋势不明显,如果提取线粒体后去测会不会得到更明显的结果?提取的纯化线粒体是细胞器一般建议用荧光酶标仪检测相应的红绿荧光值,纯化的线粒体染色更好染一些,相对于细胞来说可能会更好检测一些
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各位,最近几个月一直在帮着公司进口细胞株,我是新手,从来没有接触过这样的业务,摸着石头过河,遇到了很多问题,也得到了很多教训和经验,不敢独享,觉得还是分享一下吧,给有需要的指指道,希望能少走弯路。
先不多说,正文如下:
大家看好了,我写的是企业进口细胞株,不是针对高校或者别的什么科研机构,因为到目前为止国家还没有一个正式的文件去指导企业进口细胞株,只有一个过渡性文件,因此各地操作时也有些不同,除了北京、上海、广东等一些发达的地方有操作程序,其他地方由于企业进口细胞株的案例很少,因此很麻烦的(比如黑龙江,我们最后都找到省卫生厅厅长了)。
首先,你们公司如果选择购买一个国外的细胞株,最先考虑的是付款问题,你得找一家进出口代理公司,帮你操作,这个都是比较常规的,另外你最好再找一家在北京或者上海的公司帮助清关。这里有涉及到“进口代理协议”和“供货合同,我们当时是签了一个三方合同”,这里一定要注意和国外沟通好,需要进口的细胞株的名称、数量、价值等等,后期发货的时候千万不要不一致。
因为细胞株是特殊物品,需要从省卫生厅那里拿到一个“医用特殊物品准出入境证明”,这个东西很难搞的(高校或科研机构容易一些,基本上都有程序),尤其是一些没有先例的省份(领导不敢批,怕担事),我们公司就是黑龙江的先例,这个东西不知道怎么办的到时候可以找我私聊。搞这个东西的正常周期是2-3周,请注意,一定要把准出入境的有效时间尽量写长一点,还有就是主送单位一定要你所清关的口岸的检疫局,例如北京口岸入境,就写北京出入境检验检疫局。当时没人提醒我,这两个我都搞错过,结果多跑了几次,我们的国家服务人员态度一次比一次差,快气死了,不过后来还是搞到了。
拿到“医用特殊物品准出入境证明”以后,预付款也打了,国外准备要发货了,这之前还要一个“特殊物品入境审批单”,这个需要到你所清关的口岸的检疫局搞,下面以北京出入境检验检疫局为例,这个东西要是你是外地的(非清关所在口岸)是搞不到的,你得先去北京出入境检验检疫局备案(就是公司证照原件,情况说明,单位说明等等,比较好办),然后在你细胞株进口之前2-3周申请(1周能批,有效期3个月)。我当时是委托北京一家公司办的,因为你自己办是不方便的,到时候审批单还要亲自去取,外地的很麻烦。
箱单、发票就不说了
接下来是运输,细胞株一般都用干冰运输,当然也可以选择液氮,不过价钱不一样,液氮要比干冰贵40%左右。要计算好运输过程中干冰损失量,量要足够,最好放一个温度记录仪,如果你没有把握,在货物到港清关之前,也可以加干冰的,就比较贵,单次1000元左右。发货之前一定和发货方、运输公司沟通好,标签和数量一定要准入证明和审批单一致,要不然清关很麻烦的,我再次犯了一个错误。
最后就是清关了,这里一定要注意,你找的清关公司的清关能力一定强,一定是做过冷链清关的。
总结一下:
程序是:签合同,找进口代理和清关公司,办理相关证明文件,选择冷了运输公司,运输,清关。
文件:合同、代理协议、医用特殊物品准出入境证明、特殊物品入境审批单、发票、箱单等。
另外,这里面还有不少细节,我就不一一说了,如果真有这方面运输的,可以找我。
版主horizon801留言:
谢谢分享
1.培养基最好是培养原代细胞专门的培养基或说是配套的培养基; 2.关键还是生长因子等的浓度; 3.如果需要的话,需要明胶包被.
1、 缓冲溶液对反应物的测定没有干扰
2、缓冲组分的浓度为1:1
3、有足够的缓冲容量
4、缓冲溶液的PH应在所需范围内
5、组成缓冲溶液的弱碱PKB和弱酸PKA应接近或等于所需的POH值或PH值(PH+POH=14)
配制
只要知道缓冲对的PH值,和要配制的缓冲液的pH值(及要求的缓冲液总浓度),就能按公式计算[盐]和[酸]的量。这个算法涉及对数换算,较麻烦,前人为减少后人的计算麻烦,已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要我们知道要配制的缓冲液的pH,经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。
经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升,而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升,而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
计算好后,按计算结果准确称好固态化学成分,放于烧杯中,加少量蒸馏水溶解,转移入50ml容量瓶,加蒸馏水至刻度,摇匀,就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制,均按表格按比例混合,某些试剂,必须标定配成准确浓度才能进行,如醋酸、氢氧化钠等。另外,所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。

