Applications:
Lens culinaris agglutinin (LCA) has a molecular weight of approximately 49 kDa and is composed of four subunits - two of about 17kDa and two of 8 kDa. The isoelectric point of LCA is approximately pH 8.5. LCA recognizes sequences containing a-linked mannose residues. Like other mannose specific lectins, divalent cations such as calcium and manganese are required for sugar binding activity.
LCA has been employed to separate lymphocyte populations, as a potent T-cell mitogen, and as one of the most effective agents in preventing skin allograft rejection in model systems. LCA is also used to purify numerous glycoproteins (including immunoglobulins, histocompatibility antigens, α2-macroglobulin, etc.) as well as to fractionate glycopeptides from a variety of glycoproteins.
Lens Culinaris Agglutinin isolated from Lens culinaris (lentil) seeds is coupled to heat stable, cross-linked 4% agarose beads with a molecular weight exclusion limit of about 2 x 107 used as the solid-phase matrix to which the lectin is covalently bound. The attachment of the lectin to the solid phase is carefully controlled in order to preserve the activity of the lectin as well as to minimize conformational changes of the bound lectin.
Technical Specifications
- Ligand: Lens culinaris agglutinin (LCA)
- Matrix: 4B-CL (crosslinked agarose, 4%)
- Particle size range: 52 – 165 µm
- Exclusion limit: Approximately 2 x 107
- Matrix activation: Cyanogen bromide
- Matrix attachment: Amino
- Ligand density: 2 – 4 mg LCA / ml drained gel
- Binding Capacity: 3 mg Mannosyl glycoprotein/ml drained gel
- Inhibiting/Eluting Sugar: a-Methylglucoside + a-Methylmannoside
- Carbohydrate for Elution: 0.1M α-Methyl Mannopyranoside or 0.1M D-Mannose in Buffer
- Blood Group Specificity: Not available
- Form: 50:50 Liquid Suspension, PBS (1x) pH 7.4 w/ 0.01% Thimerosal
- pH stability: 4 – 9
Additional Information
| Product # | L-2637 |
|---|---|
| Appearance | Liquid Suspension |
| Storage Temp | 4°C |
Additional Information
AGScientific,Inc.成立于1997年，专注于创新生化制剂以及用于诊断测试开发的定制原材料，以推进临床前研究药物开发。产品涉及抗生素，生物洗涤剂，缓冲液，诊断，酶，医疗设备试剂，蛋白酶K，还原剂，RNaseA等。
CHAPS是一种两性离子洗涤剂，广泛应用于蛋白质纯化过程。作为这类洗涤剂的一部分，CHAPS含有一个正电荷和一个负电荷，但没有一个净的总电荷。CHAPS的生物膜亲和力相对较低，但在特定的浓度范围内可以有效地诱导溶血和蛋白溶解。CHAPS被归类为一种临界胶束浓度为6-10mM的非变性表面活性剂。
CHAPS的应用：在实验室中，CHAPS和其他两性离子洗涤剂可用于在分离蛋白之前诱导细胞裂解。它也可以用作二维凝胶电泳过程中的缓冲液，在某些情况下，它比SDS等阴离子洗涤剂更受欢迎。在蛋白质分析之前，可以通过透析从溶液中去除CHAPS。另一种技术利用专门的树脂和旋转柱也可以用来有效地去除皲裂用于监测化学反应或蛋白质结合的紫外/可见光谱学•用于离子交换色谱和等电色谱•用于细胞的膜渗透•以酶特性作为变性缓冲液的成分
嘌呤霉素盐酸盐是从阿氏链霉菌中分离得到的氨基糖苷类抗生素。嘌呤霉素是一种蛋白质合成抑制剂，它将自己整合到一个正在生长的多肽链中，导致其提前终止。嘌呤霉素的主要应用是作为基因选择抗生素，在CRISPR/Cas9基因编辑中发挥重要作用。这种以盐酸盐形式存在的嘌呤霉素试剂具有抗肿瘤、抗锥虫和抗菌的特性。重要的是要将嘌呤霉素盐酸盐储存在一个密闭的容器中，并置于通风干燥的地方。
盐酸贝斯他汀是氨基肽酶，氨基肽酶B，氨基肽酶M(CD13)，和链霉菌来源的亮氨酸氨基肽酶(LAP3)的一种金属蛋白酶抑制剂。这些蛋白的抑制作用是由于肿瘤细胞的凋亡诱导。Bestatin在抗癌化疗、免疫调节、镇痛等方面表现出良好的疗效。
蛋白酶K(又称内肽酶K)是一种从真菌Tritirachiumalbumlimber培养滤液中分离出的胞外内肽酶。这种独特的真菌可以降解角蛋白(因此蛋白酶“K”)，并可以利用其副产品作为碳和氮的唯一来源来生长。该酶在较宽的温度和pH范围内是稳定的，在55-65℃和pH8.0时是最佳活性。它在高盐浓度下也很稳定，在强洗涤剂如SDS的存在下也很活跃。其分子量为28.5kDa，对其多肽靶点的特异性较低。
AG蛋白酶K应用于下一代测序(NGS)和微阵列技术•核酸纯化，当从酵母、细菌、哺乳动物细胞和植物细胞裂解物中提取DNA和RNA时，通过灭活核酸酶来纯化核酸•提高PCR产物的克隆效率•使用加速器质谱法对DNA加合物水平进行定量的样品准备•核糖核酸酶保护试验中鸡尾酒酶的失活•添加到提取程序，以优化微阵列研究的原始乳腺肿瘤的RNA产量应用于蛋白质•检测具有独特抗蛋白降解能力的牛海绵状脑病蛋白。•组织消解作为另一种样品制备方法，用于液相色谱-串联质谱定量分析•特异性修饰细胞表面蛋白，分析膜结构进行蛋白定位•生成用于功能研究表征的蛋白片段
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注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。 电泳洗脱法
低熔点琼脂糖凝胶电泳挖块法
冻融回收法
玻璃奶回收法
柱回收法 将电泳槽用ddH2O反复清洗干净，倒入新鲜配制的灭菌电泳缓冲液；
根据点样量制备合适厚度的琼脂糖凝胶板；
切胶时尽可能切掉不含DNA片段的凝胶；
要尽量减少DNA在紫外下的照射时间以减少对DNA的损伤；
熔胶要完全。向左转|向右转
琼脂糖凝胶电泳是常用的分离和检测方法，琼脂是最常用的载体支持物，核酸分子具有电荷效应和分子筛效应，利用此特性可达到分离检测的目的。
一、琼脂糖凝胶的特点
天然琼脂(agar)是一种多聚糖，主要由琼脂糖(agarose，约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下。
1. 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。
2. 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大(约占98%~99%)，近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。
3. 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。
4. 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。
目前，常用琼脂糖作为电泳支持物，分离蛋白质和同工酶。将琼脂糖电泳与免疫化学相结合，发展成免疫电泳技术，能鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系，由于建立了超微量技术，0.1ug蛋白质就可检出。
琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这种方法操作方便，设备简单，需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。
二、DNA的琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。
1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系
① DNA分子的大小 在凝胶中，DNA片段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。
② 琼脂脂糖的浓度 如下表所示，不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
表 琼脂糖浓度与DNA分离范围琼脂糖浓度/%0.30.60.70.91.21.52.0线状DNA大小/kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.1
2、核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系
不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA(covalently closed circular，cccDNA)>直线DNA>开环的双链环状DNA。当琼脂糖浓度太高时，环状DNA(一般为球形)不能进入胶中，相对迁移率为0(Rm=0)，而同等大小的直线双链DNA(刚性棒状)则可以长轴方向前进(Rm>0)，由此可见，这三种构型的相对迁移率主要取决于凝胶浓度，但同时，也受到电流强度、缓冲液离子强度等的影响。
3、电泳方法
① 凝胶类型
用于分离核酸的琼脂糖凝胶电泳可分为垂直型及水平型(平板型)。水平型电泳时，凝胶板完全浸泡在电极缓冲液下1-2mm，故又称为潜水式。目前更多用的是后者，因为它制胶和加样比较方便，电泳槽简单，易于制作，又可以根据需要制备不同规格的凝胶板，节约凝胶，因而较受欢迎。
② 缓冲液系统
缺少离子时，电流太小，DNA迁移慢;相反，高离子强度的缓冲液由于电流太大会大量产热，严重时，会造成胶熔化和DNA的变性。
常用的电泳缓冲液有EDTA(pH8.0)和Tris-乙酸(TEA)，Tris-硼酸(TBE)或Tris-磷酸(TPE)等，浓度约为50mmol/L(pH7.5~7.8)。电泳缓冲液一般都配制成浓的贮备液，临用时稀释到所需倍数。
TAE缓冲能力较低，后两者有足够高的缓冲能力，因此更常用。TBE浓溶液长期贮存会出现沉淀，为避免此缺点，室温下贮存5×溶液，用时稀释10倍0.5×工作溶液即能提供足够缓冲能力。
③ 凝胶的制备
以稀释的电极缓冲液为溶剂，用沸水浴或微波炉配制一定浓度的溶胶，灌入水平胶框或垂直胶膜，插入梳子，自然冷却。
④ 样品配制与加样
DNA样品用适量Tris-EDTA缓冲液溶解，缓冲液内含有0.25%溴酚蓝或其他指示染料，含有10%-15%蔗糖或5%~10%甘油，以增加其比重，使样品集中。为避免蔗糖或甘油可能使电泳结果产生U形条带，可改用2.5%Ficoll(聚蔗糖)代替蔗糖或甘油。
⑤ 电泳
琼脂糖凝胶分离大分子DNA实验条件的研究结果表明，在低浓度、低电压下，分离效果较好。在低电压条件下，线性DNA分子的电泳迁移率与所用的电压呈正比。但是，在电场强度增加时，较大的DNA片段迁移率的增加相对较小。因此随着电压的增高，电泳分辨率反而下降，为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率，电场强度不宜高于5V/cm。
电泳系统的温度对于DNA在琼脂糖凝胶中的电泳行为没有显著的影响。通常在室温下进行电泳，只有当凝胶浓度低于0.5%时，为增加凝胶硬度，可在4℃进行电泳。
⑥ 染色和拍照
常用荧光染料溴乙锭(EB)染色，在紫外光下观察DNA条带，用紫外分析仪拍照，或用凝胶成像系统输出照片，并进行有关的数据分析。
注意事项：电泳中所使用的染料EB是致癌物质，一定要小心，避免其接触皮肤等，进行电泳操作的时候一定要带手套，手套要及时更换，现在也除了一些EB的替代物，如Goldview等。
交联琼脂糖凝胶是生物分离中常用的色谱基质,利用不同的功能基对其表面的羟基进行修饰,进而制备出疏水色谱、离子交换色谱和亲和色谱等商业填料,这些填料在生物大分子的分离纯化中得到了广泛应用。对于修饰凝胶的分离性能,很多研究者都给予了广泛的关注,但凝胶本身的性状如耐压能力以及其微观结构的改变并未受到应有的重视。而这些性状的改变必然影响修饰后材料的应用范围且与其分离性能存在内在的联系,因此本文以羰基二咪唑(CDI)这种常见的羟基活化剂活化交联琼脂糖凝胶,键合不同功能基,考察修饰后凝胶其耐压能力和微观结构的变化,寻找其中的规律,为以交联琼脂糖凝胶为基质的色谱填料的应用提供参考。
