如何选购超声波清洗器
| 实验方法原理 | 目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocynate，FITC）或罗达明（LissaminerhodamineB200，RB200）。在碱性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或兰紫光激发下产生黄绿色荧光，通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。 | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 抗体 试剂、试剂盒 | FITCPBSDMSO碳酸盐缓冲液 仪器、耗材 | 搅拌器紫外分光光度计 实验步骤 | 1. 将纯化的IgG抗体对PH9～9.5碳酸盐缓冲液透析过夜，透析后抗体液移入小烧杯中 2. 称取适量IFTC，加入二甲亚砜（DMSO）（FITC～1mg/1mlDMSO），使终浓度为1mgFITC/1mlDMSO FITC/IgG比例 如IgG浓度为1mg/ml，FITC/IgG比例约为50μgFITC/mgIgG； 如IgG为5～10mg/ml，则比例为25μgFITC/mlIgG 在10ml小烧杯中先放入抗体 3. 按上述比例将FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗体溶液中 4. 将标记物用PBS加至2.5ml，磁力搅拌器室温下避光搅拌2h，用PD10柱（SephadexG25柱）除去游离荧光素，先用25mlPBS淋洗G25柱。收集PBS洗脱第一个荧光素结合蛋白峰，测定F/P比值。第二个荧光素峰为游离荧光素。 计算： 2.87×A495 F/P＝──────── A280-0.35×A495 合适的F/P值为2～4。 注意事项 | 1. FITC保存于4℃暗处，使用前待试剂瓶升至室温时开盖称取，以避免潮解。 2. FITC-DMSO液要临用时配制。 3. 碳酸盐缓冲液要新鲜配制。 |
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2019-07-24
阅读（134）
▍
相关分类
▍
相关文章
聚乙二醇 (PEG) 浓缩法及超过滤法纯化病毒实验_实验⽅法_
COBigelow 毕格罗 铂尔曼酒店 洗发水 沐浴露 护发素 润肤乳 ...
温德姆奖赏计划 | 在全球各地获取积分 Wyndham Hotels ...
底物化学发光
慢性牙周炎治療效果在基質金屬蛋白酶(MMP 9)之評估
DNA复制时辨认复制起始点主要靠 A.拓扑异构酶B.解螺旋酶C.引物酶D...
如何选购超声波清洗器
常用的化学发光剂有哪几种呢？
双荧光素酶报告基因载体构建促销活动
【求助】请教牛人如何处理TEM图片_透射电镜(TEM)仪器社区论...
polyurethane是什么面料_
Testolactone是什么意思_
▍
相关问答
