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英 [ˈfɔ:mæt]美 [ˈfɔ:rmæt]
n. (出版物的)版式;[自](数据安排的)形式;电视节目的总安排(或计划)
vt. 使格式化;安排…的格局;设计…的版面
vi. 设计一个版式
anti-mouse TCR γ/δ Antibody
anti-human TCR γ/δ Antibody
单克隆抗体结构相似且均一,有高度特异性
先说骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合,共有3种情况,B淋巴和B淋巴融合,B淋巴和骨髓瘤细胞融合,骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合
第一次筛选是为了筛选出能无限增殖的细胞,这只有两种情况:
1、经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞
2、骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞
第二次是为了筛选出能产生单克隆抗体的细胞
那么只可能是,经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞。
所以有两次筛选
(2)6 X His tag 序列:CAT CAT CAC CAT CAC CAT
(3)GST标签序列:
1ATGTCCCCTATACTAGGTTATTGGAAAATTAAGGGCCTTGTGC
301 AACCCACTCGACTTCTTTTGGAATATCTTGAAGAAAAATATGAAGAGCAT
351 TTGTATGAGCGCGATGAAGGTGATAAATGGCGAAACAAAAAGTTTGAATT
401 GGGTTTGGAGTTTCCCAATCTTCCTTATTATATTGATGGTGATGTTAAAT
451 TAACACAGTCTATGGCCATCATACGTTATATAGCTGACAAGCACAACATG
501 TTGGGTGGTTGTCCAAAAGAGCGTGCAGAGATTTCAATGCTTGAAGGAGC
551 GGTTTTGGATATTAGATACGGTGTTTCGAGAATTGCATATAGTAAAGACT
601 TTGAAACTCTCAAAGTTGATTTTCTTAGCAAGCTACCTGAAATGCTGAAA
651 ATGTTCGAAGATCGTTTATGTCATAAAACATATTTAAATGGTGATCATGT
701 AACCCATCCTGACTTCATGTTGTATGACGCTCTTGATGTTGTTTTATACA
751 TGGACCCAATGTGCCTGGATGCGTTCCCAAAATTAGTTTGTTTTAAAAAA
801 CGTATTGAAGCTATCCCACAAATTGATAAGTACTTGAAATCCAGCAAGTA
851 TATAGCATGGCCTTTGCAGGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTGGTGGCGACC
901 ATCCTCCAAAATCGGATCTGGTTCCGCGTGGATCCCCGGAATTCCCGGGT
951 CGACTCGAGCGGCCGCATCGTGACTGA
血清内含有抗体,封闭的时候,选用同物种的血清,比如,使用小鼠单抗的话,就选用小鼠血清来进行封闭。这样,如果细胞表面有可以非特异性结合小鼠抗体的部位都会事先被结合,就不会再结合荧光标记的特异性抗体了。
有什么不明白的请追问
一.样本种属来源:
首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。
1、哺乳动物的组织或者细胞样本,通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,K atpase等。
2、植物来源实验样本,则可以选择plantactin、Rubisco等。
3、其他来源样本研究较少,所以就应该参照文献报导,选择合适的蛋白作为内参。
二.目的蛋白分子量:
选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。比如目的蛋白分子量为45KD,此时不适宜选择β-actin作为内参,可以考虑选择GAPDH或者β-tubulin作为内参。
三.目的蛋白表达部位:
就一般的蛋白检测来说,β-actin、β-Tubulin抗体等就可以了,而针对于核蛋白的定量,特别是样本蛋白就是核蛋白时,选择恰当的核蛋白内参则更能体现内部参照的价值。常用的核内参抗体有Lamin A、Lamin B、Histone H3,除此之外,其它常见的核蛋白内参还有PCNA、K70、K80等,在一些文献报道中,Erk2、TATA binding protein(TBP)以及c-Jun、c-Fos等都有使用。而对于膜蛋白检测,常用的内参抗体为Na,K ATPase。对于线粒体蛋白的检测,常用VDAC1和COX IV作为内参抗体。
以上几条原则只是针对通常情况,但是需要注意的问题是——内参的选择需要考虑实际的试验环境,比如某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,不适合做内参。比如在涉及细胞增殖相关试验中,c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参;而在凋亡实验时,TBP、Lamin等也不适合作为内参。因此设计实验方案的时候应该考虑这些因素并查询相应文献,在实验过程中也应该注意如果内参表达出现异常,应考虑这方面因素。



