异硫氰酸荧光素为什么可以发出荧光

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异硫氰酸荧光素为什么可以发出荧光

2018-01-14

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用来做荧光染料免疫荧光法免疫荧光法的基本原理是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位,检测出抗原或抗体.常用的荧光素有①异硫氰酸荧光素（fluorecein isothiocyante,FITC）,为黄色、橙黄色或褐黄色结晶粉末,有两种异构体,易溶于水和酒精等溶剂.分子量为389,最大吸收光谱为490～495,最大发射光谱为520～530urn,呈现明亮的黄绿色荧光,是最常用的标记抗体的荧光素.②四甲基异氰酸罗达明（tetrametrylrhodarnine isothiocyante,TRITC）是一种紫红色粉末,较稳定,是罗达明（rhodamine）的衍生物.最大吸收光谱550urn,最大发射光谱620urn呈橙红色荧光,与FITC发射的黄绿色荧光对比鲜明,常用于双标记染色. 按照抗原抗体反应的结合步聚,免疫荧光法可分为以下三种. 1．直接法用荧光素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合,以检查出相应的抗原成分. 2．间接法先用特异性抗体与相应的抗原结合,洗去未结合的抗体,再用荧光素标记的抗特异性抗体（间接荧光抗体）与特异性抗体相结合,形成抗原一特异性抗体一间接荧光抗体的复合物.在此复合物上带有比直接法更多的荧光抗体,所以,此法较直接法灵敏. 3．补体法用特异性的抗体和补体的混合液与标本上的抗原反应,补体就结合在抗原抗体复合物上,再用抗补体的荧光抗体与之相结合,就形成了抗原一抗体一补体一抗补体荧光抗体的复合物.荧光显微镜下所见到的发出荧光的部分即是抗原所在的部位.补体法具有敏感性强的优势,同时适用于各种不同种属来源的特异性抗体的标记显示,在各种不同种属动物抗体的检测上为最常用的技术方法

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