Human CD32 exists in at least six isoforms originating from three different genes (Fc gamma RII A, B, and C) . The CD32 molecule is a low affinity receptor for immune complexed IgG and has signal-transducing capabilities involved with humoral and cell-mediated immune responses.
Isotype: Murine IgG1k
Immunogen: Human K562 tumor cells and L cells transfected with human Fc gamma RII
Specificity: Antibody 7.3 reacts with a domain 2 epitope of all CD32 isoforms (1). It exhibits preferential binding to Fc gRIIb (inhibitory) isoform transfectants(2, 5).
Functional Application: Intact and F(ab‘)2 7.3 antibody blocks immune complex binding (4). Incubation with anti-CD32 F(ab‘)2 inhibits Fibrocyte differentiation(6), and inhibits pro inflammatory cytokine secretion by SLE patient derived monocytes (7).
References:
1. Leukocyte Typing V (S.F. Schlossman, et al, eds.) Oxford University Press, Oxford (1995) p. 823-836.
2. Liu Y, L Pricop, et al. (2005) J Leukocyte Biol 77: 767-776 PMID:15703199
3. S. von Gunten, H.U. Simon, et al. (2006) Blood 108(13): 4255-425
4. Laborde EA, M Vulcano, et al. (2007) J Immunol 179(1): 673-681.
5. Ierino FL, P M Hogarth, et al. (1993) JImmunol 150(5):1794-1803.
6. Pilling D, NM Tucker, RH Gomer (2006) J Leuk Biol 79(6): 1242-1251.
7. Thanei S, M Trendelenburg (2016) J Immunology 196: 2063–2074. PMID: 26829984
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这些常用免疫组织化学方法的原理如下:
1. 免疫荧光细胞化学技术
将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量.
2. 免疫酶细胞化学技术
是目前免疫组织化学研究中最常用的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究.
3. 免疫胶体金技术
就是用胶体金标记一抗,二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性,定位或定量研究.由于胶体金的电子密度高,多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究.向左转|向右转
二抗可以耦联有几种不同的标记,可以是酶,荧光素,或生物素。
免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。
2.放射免疫检测放射免疫检测技术是目前灵敏度最高的检测技术,利用放射性同素标记抗原(或抗体),与相应抗体(或抗原)结合后,通过测定抗原抗体结合物的放射性检测结果.放射性同位素具有pg级的灵敏度,且利用反复曝光的方法可对痕量物质进行定量检测.但放射性同位素对人体的损伤也限制了该方法的使用.
3.酶联免疫吸附试验(ELISA)酶联免疫检测是目前应用最广泛的免疫检测方法.该方法是将二抗标记上酶,抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的作用结合起来,根据酶作用底物后的显色颜色变化来判断试验结果,其敏感度可达ng水平.常见用于标记的酶有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)等.由于酶联免疫法无需特殊的仪器,检测简单,因此被广泛应用于疾病检测.常用的方法有间接法、夹心法以及BAS-ELISA.间接法是先将待测的蛋白抱被在孔板内,然后依次加入一抗、标记了酶的二抗和底物显色,通过仪器(例如酶标仪)定量检测抗原.这种方法操作简单但由于高背景而特异性较差.目前已逐渐被夹心法取代.夹心法利用二种一抗对目标抗原进行捕获和固定,在确保灵敏度的同时大大提高了反应的特异性.近年来,抗原的定量检测技术也不断推陈出新.近年来,在夹心法ELISA的基础上,开发了多抗原检测试剂盒,能同时检测微量液相样本中多个抗原含量.这项技术的应用大大缩短了诊断的时间,提高诊断的可靠性和及时性.
4.免疫金胶体技术胶体金技术经过30多年的发展到现在已日趋成熟,该方法是将二抗标记上胶体金颗粒,利用抗原抗体间的特异性反应,最终将胶体金标记的二抗吸附于渗滤膜上,此方法简单,快速,广泛应用于临床筛查.
标记免疫技术主要类型:放射免疫技术、酶免疫技术、荧光免疫技术、化学发光免疫技术 基本原理:利用化学或生物发光系统作为抗原抗体反应的指示系统,借以定量检测抗原或抗体的方法,发光物质可直接作为抗原抗体的标记物,也可以游离形式用于催化剂(酶)和辅助剂标记的抗原或抗体的发光反应中。向左转|向右转
CD133抗原为5次跨膜( 5_transmembrane, 5_TM )糖蛋白。
CD133抗原可被3种CD133抗体识别:克隆AC133、293C3和AC141。AC133直接与CD133/1糖基化抗原表位结合,可用于从外周血、骨髓、脐带血及其它组织中分析和分选CD133+细胞。
多数情况下CD133/1和CD133/2识别同种细胞,只是有表达强度的差别,但是在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)和某些急性髓性白血病中发现CD133/1和CD133/2表达不同,或者正常表达强度紊乱。

