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RayBiotech/Phosphatase Inhibitor Cocktail Set II/AA-PHI-II
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RayBiotech/Phosphatase Inhibitor Cocktail Set II/AA-PHI-II
品牌 / 
RayBiotech
货号 / 
AA-PHI-II
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Product Specifications

Size:
1 vial (4 arrays)

Phosphatase Inhibitor Cocktail Set II

Appearance
1 vial of lyophilized powder.
Preparation Instructions
Reconstitute in 180 µl 1X lysis buffer for 25X stock solution (enough for making 4.5 ml, which is sufficient for 4 membrane arrays.)
Storage
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这四个不是一码事,HRP和AP是酶,二抗上挂了酶,要给相应的底物才能显色,显色方式可以通过发荧光也可以不发荧光(例如给予ECL底物,其中的H2O2和鲁米诺在HRP的作用下,能在黑暗中发出荧光;也可以给予双氧水和DAB,反应产生棕色不溶于水的物质);FITC为异硫氰酸荧光素,本身就是黄绿色荧光,二抗结合后可直接在荧光显微镜下观察;生物素一般也是挂在二抗上的,利用卵白素分别连接生物素标记的第二抗体和生物标记的酶,由酶催化底物,生成终产物,这个终产物也是不溶于水的.
1、冰冻切片制备:建议用新鲜组织,否则组织细胞内部结构破坏,易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等,防止裂片和脱片严重。2、组织切片固定:切好片风干后立即用冰丙酮等固定液进行固定5-10min,尤其要较长时间保存的白片,一定要及时固定和适当保存。3、血清封闭:为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合,需要在一抗孵育前先用血清(与二抗来源一致)封闭,减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调整的,一般10-30min。4、一抗孵育条件:在免疫组化反应中最重要,包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种:4℃、室温、37℃,其中4℃效果最佳;孵育时间:这与温度、抗体浓度有关,一般37℃1-2h,而4℃过宿和从冰箱拿出后37℃复温45min。具体条件还要摸索。5、二抗孵育条件:二抗一般室温或37℃立即观察,若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃30min-1h,具体时间需要摸索,而浓度一般有工作液,若是浓缩液还要摸索浓度,切记要避光反应。但在免疫荧光中我们一般先把二抗浓度和孵育时间先定下,然后去摸索一抗浓度和孵育时间。最后,荧光素标记的二抗随着保存时间的延长,可能后有大量的游离荧光素残留,需要注意配制时小包装和并进行适当的离心。6、复染:目的是形成细胞轮廓,从而更好地对目标蛋白进行定位。一般常用DAPI复染。7、封片:为了长期保存,我们一般用缓冲甘油等封片,此外还有专门的抗荧光萃灭封片液。避免产生气泡,方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液,然后一手拿住盖片某一拐角,而另一手拿对面的那个拐角,接近封片液近端的拐角先降低,直至接触到液体时为止;当发现液体接触面在不断弥散时,则可以缓慢降低另一拐角,这样一般不会产生气泡。8、切片清洗:为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色,所以适当地加强清洗(延长时间和增多次数)尤为重要,我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次,而一抗孵育后的清洗均为5次*5min。注意:单独冲洗,防止交叉反应造成污染。温柔冲洗,防止切片的脱落。我喜欢用浸洗方式;冲洗的时间要足够,才能彻底洗去结合的物质。PBS的pH和离子强度的使用和要求。这方面我有惨痛教训,当时我买的抗体稀释液偏酸,结果背景一片黄(未见特异性染色),建议pH在7.4-7.6浓度是0.01M。(中性及弱碱性条件(pH7-8)有利于免疫复合物的形成,而酸性条件则有利于分解;低离子强度有利于免疫复合物的形成,而高离子强度则有利于分解)9、拍照:有条件的话最好立即拍照,若不能及时拍照,也要封好片和用指甲油封固,保持避光和湿度。使用荧光显微镜注意严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作,不要随意改变程序;应在暗室中进行检查;防止紫外线对眼睛的损害,在调整光源时应戴上防护眼镜;检查时间每次以1~2h为宜,超过90min,超高压汞灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标本受紫外线照射3~5min后,荧光也明显减弱或褪色;激发光长时间的照射,会发生荧光的衰减和淬灭现象;所以最多不得超过2~3h;荧光显微镜光源寿命有限,标本应集中检查,以节省时间,保护光源。天热时,应加电扇散热降温,新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再启用时,须待灯光充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。关闭汞灯至少在开启15-30分钟后;标本染色后立即观察,因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,可延缓荧光减弱时间,防止封裱剂蒸发;使用的玻片等载体,都必须厚度均匀,无明显的自发荧光,如果使用油镜,还必须保证镜油为无荧光镜油;电源最好装稳压器,否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命,也会影响镜检的效果。
免疫组化,是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)与相应抗体(或抗原)以化学的方法结合,将荧光标记抗体(或抗原)与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体- 抗原复合物,用荧光显微镜观察。在镜下见到有荧光存在即推断有抗原抗体复合物的存在,根据已 知的抗体(或抗原)即可推知另一个未知抗原(或抗体)的存在。直接免疫荧光法 直接免疫荧光法是利用荧光色素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合,以鉴定未知抗原。本法具有操作简单、时程短、特异性高的优点,但也 存在缺点如不能检查抗体,敏感性较差。(1)在标本上滴加荧光素标记抗体,放入湿盒中。37℃温育30min。 (2)PBS 冲洗后,再用PBS分三缸浸泡,每缸3min。(3)PBS浸泡1~2min,风干。(4)缓冲甘油封片。在荧光显微镜下观察。进行直接免疫荧光法时应注意:①温育时一定要将玻片放在湿盒中,以防液体蒸发。②用PBS浸泡时应不断振荡。2. 间接免疫荧光法 间接免疫荧光法以荧光素标记抗球蛋白抗体,抗体与相应抗原结合后,荧光标记的抗球蛋白抗体与已结合的抗体发生作用,从而推知抗原或抗体的 存在。间接荧光技术可以用已知的抗原检测未知的抗体,也可用已知的抗体测出未知抗原。现以检测流行性热病毒抗体(IgM)为例介绍如下:(1)将待测病人血清加至抗原片(流行性热病毒感染的Vero-E6细胞片)上,每个稀释 度加2孔,最后2孔加PBS做对照。将玻片放置湿盒中,37℃温育 60min。取出玻片,弃去反应液,用PBS洗涤5min,风干。(2)加入1∶40稀释的FITC标记的羊抗人IgM,37℃温育60min。取出玻片,按步骤2洗涤,风干。(3)PBS甘油封片,荧光显微镜下观察。阳性结果:在细胞膜及细胞质中可见颗粒状荧光颗粒,细胞核 呈红色。注意事项:温育时将玻片放在湿盒中,以防液体蒸发。选择低温、干燥、洁净的环境风干。
本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。以下是几种常用的免疫学技术:1.免疫荧光技术免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体(或抗原)检测组织、细胞或血清中的相应抗原(或抗体)的方法.由于荧光抗体具有安全、灵敏的特点,因此已广泛应用在免疫荧光检测和流式细胞计数领域.根据荧光素标记的方式不同,可分为直标荧光抗体和间标荧光抗体.间标荧光抗体中一抗并不直接连接荧光素,而是先将一抗结合到蛋白,然后带有荧光素的二抗再结合至一抗.通过二抗的结合,能将信号进行放大,因此能在一定程度上提高检测的灵敏度,但是随之带来的高背景也降低了检测的特异性.近年来,随着荧光素和荧光检测技术的不断进步,荧光检测的灵敏度已经接近同位素检测的水平,直接标记的荧光抗体逐渐取代间接标记抗体.这些标记了荧光素的抗体直接结合至抗原,大大提高了检测的特异性,使检测的结果更加准确可靠.荧光检测技术的发展,使得免疫荧光技术在传染病诊断上有广泛的用途,如在细菌、病毒、螺旋体感染的疾病,检查IgM抗体,做为近期接触抗原的标志.利用单克隆荧光直接标记抗体鉴定淋巴细胞的亚类.通过流式细胞仪,针对细胞表面不同抗原,可以同时使用多种不同的荧光抗体,对同一细胞进行多标记染色.
2.放射免疫检测放射免疫检测技术是目前灵敏度最高的检测技术,利用放射性同素标记抗原(或抗体),与相应抗体(或抗原)结合后,通过测定抗原抗体结合物的放射性检测结果.放射性同位素具有pg级的灵敏度,且利用反复曝光的方法可对痕量物质进行定量检测.但放射性同位素对人体的损伤也限制了该方法的使用.
3.酶联免疫吸附试验(ELISA)酶联免疫检测是目前应用最广泛的免疫检测方法.该方法是将二抗标记上酶,抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的作用结合起来,根据酶作用底物后的显色颜色变化来判断试验结果,其敏感度可达ng水平.常见用于标记的酶有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)等.由于酶联免疫法无需特殊的仪器,检测简单,因此被广泛应用于疾病检测.常用的方法有间接法、夹心法以及BAS-ELISA.间接法是先将待测的蛋白抱被在孔板内,然后依次加入一抗、标记了酶的二抗和底物显色,通过仪器(例如酶标仪)定量检测抗原.这种方法操作简单但由于高背景而特异性较差.目前已逐渐被夹心法取代.夹心法利用二种一抗对目标抗原进行捕获和固定,在确保灵敏度的同时大大提高了反应的特异性.近年来,抗原的定量检测技术也不断推陈出新.近年来,在夹心法ELISA的基础上,开发了多抗原检测试剂盒,能同时检测微量液相样本中多个抗原含量.这项技术的应用大大缩短了诊断的时间,提高诊断的可靠性和及时性.
4.免疫金胶体技术胶体金技术经过30多年的发展到现在已日趋成熟,该方法是将二抗标记上胶体金颗粒,利用抗原抗体间的特异性反应,最终将胶体金标记的二抗吸附于渗滤膜上,此方法简单,快速,广泛应用于临床筛查.
荧光素本品为诊断用药,是一种染料,对正常角膜等上皮不能染色,但能对损伤的角膜上皮染成绿色,从而可显示出角膜损伤、溃疡等病变。本品流经小血管时,能在紫外线或蓝色光激发下透过较薄的血管壁和黏膜呈现绿色荧光,从而显示小血管行经和形态等,据此可供眼底血管造影和循环时间测定。本品几乎不能透过血脑屏障,但在结核性脑膜炎时脑脊液内含量有所增加,肌内注射后测定脑脊液内本品含量有助于对结核性脑膜炎的诊断和鉴别诊断。供诊断眼角膜损伤、溃疡和异物,眼底血管造影和循环时间测定。也用于术中显示胆囊和胆管,以及结核性脑膜炎的辅助诊断等。"一滴8块钱!还要交检查费!"这是医院的价格规定的。不过说来也是比较贵,只要身体健康,钱财乃身外物。
免疫组化LCA+,S100+,Mela_有问必答_123
腐姐控百合4582021-08-07
病情分析:免疫组化,是应用免疫学基本原理――抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术
意见建议:
是免疫组化。
免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。
什么是荧光标记法
主要荧光素一览表123
稻子8YJ492021-08-02
常用的荧光素主要有哪些
荧光素是具有光致荧光特性的染料,荧光染料种类很多。目前常用于标记抗体的荧光素有以下几种:异硫氰酸荧光素,四乙基罗丹明,四甲基异硫氰酸罗丹明,酶作用后产生荧光的物质。
荧光素标记在抗人ig抗体对不对你自己看吧!免疫荧光检测t细胞cd4抗原,荧光素为什么要加在cd4单克隆抗体上
CD4细胞是人体免疫系统中的一种重要免疫细胞,CD4 主要表达于辅助T(Th)细胞,是Th细胞TCR识别抗原的供受体,与MHCⅡ类分子的非多肽区结合,参与Th细胞TCR识别抗原的信号转导,CD4也是HIV的受体,由于艾滋病病毒攻击对象是CD4细胞,所以其检测结。
T细胞分化抗原测定
【中文名称】
T细胞分化抗原测定
【概述】
T细胞膜表面有100多种特异性抗原,现已制备了多种单克隆抗体,WHO(1986)统称为白细胞分化抗原(cluster differentiation,CD)。例如CD3代表总T细胞,CD4代表T辅助细胞(TH),CD8代表T细胞毒性细胞(TC)等。应用这些细胞的单克隆抗体与T细胞表面抗原结合后,再与荧光标记二抗(兔或羊抗鼠IgG)反应,在荧光显微镜下或流式细胞仪中计数CD的百分率。
【临床意义】
①CD3降低:见于自身免疫性疾病,如SLE、类风湿关节炎等。
②CD4降低:见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、应用免疫抑制剂者。
③CD8减低:见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病。
④CD4/CD8比值增高:见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、病毒性感染、变态反应等;CD4/CD8比值减低:见于艾滋病(常<0.5)。
⑤监测器官移植排斥反应时CD4/CD8比值增高预示可能发生排斥反应。⑥CD3、CD4、CD8较高且有CD1、CD2、CD5、CD7增高则可能为T细胞型急性淋巴细胞白血病。本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。
荧光抗体技术 123
柯嘀552021-07-28
荧光抗体技术荧光素操作过程为何要避光
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