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TheNativeAntigenCompany/Dengue Virus IgM ELISA/ELS61237
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DENGUE VIRUS IgM ELISA

This dengue virus IgM ELISA kit has been designed for the detection and the qualitative determination of specific IgM antibodies against dengue virus in human serum or plasma.

Microplates are coated with specific antigens to bind corresponding antibodies of the sample. After washing the wells to remove all unbound sample material a horseradish peroxidase (HRP) labelled conjugate is added. This conjugate binds to the captured antibodies. In a second washing step unbound conjugate is removed. The immune complex formed by the bound conjugate is visualized by adding Tetramethylbenzidine (TMB) substrate which gives a blue reaction product. The intensity of this product is proportional to the amount of specific antibodies in the sample. Sulphuric acid is added to stop the reaction. This produces a yellow endpoint colour. Absorbance at 450/620 nm is read using an ELISA microwell plate reader.

PRODUCT DETAILS

  • High sensitivity – 91.84%.
  • High specificity – 96.59%.
  • Short assay time – <3 hours.
  • 1 x 96 tests.

BACKGROUND

Dengue virus is a single-stranded RNA virus of about 50 nm in diameter belonging to the genus Flavivirus. Dengue and dengue hemorrhagic fever are caused by one of four closely related, but antigenically distinct, virus serotypes (DENV-1, DENV-2, DENV-3, and DENV-4). Infection with one of these serotypes does not provide cross-protective immunity, so persons living in a dengue-endemicarea can have four dengue infections during their lifetimes. The viruses are transmitted by Aedes aegypti, a domestic, day-biting mosquito that prefers to feed on humans. Infection with dengue viruses produces a spectrum of clinical illness ranging from a nonspecific viral syndrome to severe and fatal hemorrhagic disease. It is primarily a disease of the tropics; its global distribution is comparable to that of malaria, and an estimated 2.5 billion people live in areas at risk for epidemic transmission. Globally, there are an estimated 50 to 100 million cases of dengue fever and several hundred thousand cases of dengue hemorrhagic fever. The case-fatality rate of DHF in most countries is about 5%; most fatal cases are among children and young adults. Important risk factors for DHF include the strain and serotype of the infecting virus, as well as the age, immune status, and genetic predisposition of the patient.

THIS ELISA ASSAY IS FOR RESEARCH USE ONLY. IT IS NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.

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二抗:二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体,上面通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛,如western blot(通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质),ELISA(以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质,尤其是相应的抗原或抗体),免疫组织化学(检测组织中的特异性抗原),免疫细胞化学(通过免疫学方法检测细胞的抗原组成),流式细胞术(通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞)及免疫沉淀(通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原)。二抗针对某一特定物种(如小鼠)的所有抗体均具有特异性,因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记,大大节省了时间和费用;此外,一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子,从而使信号大大增强,提高了实验灵敏度。
二抗可以耦联有几种不同的标记,可以是酶,荧光素,或生物素。
这四个不是一码事,HRP和AP是酶,二抗上挂了酶,要给相应的底物才能显色,显色方式可以通过发荧光也可以不发荧光(例如给予ECL底物,其中的H2O2和鲁米诺在HRP的作用下,能在黑暗中发出荧光;也可以给予双氧水和DAB,反应产生棕色不溶于水的物质);FITC为异硫氰酸荧光素,本身就是黄绿色荧光,二抗结合后可直接在荧光显微镜下观察;生物素一般也是挂在二抗上的,利用卵白素分别连接生物素标记的第二抗体和生物标记的酶,由酶催化底物,生成终产物,这个终产物也是不溶于水的.
免疫组化,是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。以下是几种常用的免疫学技术:1.免疫荧光技术免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体(或抗原)检测组织、细胞或血清中的相应抗原(或抗体)的方法.由于荧光抗体具有安全、灵敏的特点,因此已广泛应用在免疫荧光检测和流式细胞计数领域.根据荧光素标记的方式不同,可分为直标荧光抗体和间标荧光抗体.间标荧光抗体中一抗并不直接连接荧光素,而是先将一抗结合到蛋白,然后带有荧光素的二抗再结合至一抗.通过二抗的结合,能将信号进行放大,因此能在一定程度上提高检测的灵敏度,但是随之带来的高背景也降低了检测的特异性.近年来,随着荧光素和荧光检测技术的不断进步,荧光检测的灵敏度已经接近同位素检测的水平,直接标记的荧光抗体逐渐取代间接标记抗体.这些标记了荧光素的抗体直接结合至抗原,大大提高了检测的特异性,使检测的结果更加准确可靠.荧光检测技术的发展,使得免疫荧光技术在传染病诊断上有广泛的用途,如在细菌、病毒、螺旋体感染的疾病,检查IgM抗体,做为近期接触抗原的标志.利用单克隆荧光直接标记抗体鉴定淋巴细胞的亚类.通过流式细胞仪,针对细胞表面不同抗原,可以同时使用多种不同的荧光抗体,对同一细胞进行多标记染色.
2.放射免疫检测放射免疫检测技术是目前灵敏度最高的检测技术,利用放射性同素标记抗原(或抗体),与相应抗体(或抗原)结合后,通过测定抗原抗体结合物的放射性检测结果.放射性同位素具有pg级的灵敏度,且利用反复曝光的方法可对痕量物质进行定量检测.但放射性同位素对人体的损伤也限制了该方法的使用.
3.酶联免疫吸附试验(ELISA)酶联免疫检测是目前应用最广泛的免疫检测方法.该方法是将二抗标记上酶,抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的作用结合起来,根据酶作用底物后的显色颜色变化来判断试验结果,其敏感度可达ng水平.常见用于标记的酶有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)等.由于酶联免疫法无需特殊的仪器,检测简单,因此被广泛应用于疾病检测.常用的方法有间接法、夹心法以及BAS-ELISA.间接法是先将待测的蛋白抱被在孔板内,然后依次加入一抗、标记了酶的二抗和底物显色,通过仪器(例如酶标仪)定量检测抗原.这种方法操作简单但由于高背景而特异性较差.目前已逐渐被夹心法取代.夹心法利用二种一抗对目标抗原进行捕获和固定,在确保灵敏度的同时大大提高了反应的特异性.近年来,抗原的定量检测技术也不断推陈出新.近年来,在夹心法ELISA的基础上,开发了多抗原检测试剂盒,能同时检测微量液相样本中多个抗原含量.这项技术的应用大大缩短了诊断的时间,提高诊断的可靠性和及时性.
4.免疫金胶体技术胶体金技术经过30多年的发展到现在已日趋成熟,该方法是将二抗标记上胶体金颗粒,利用抗原抗体间的特异性反应,最终将胶体金标记的二抗吸附于渗滤膜上,此方法简单,快速,广泛应用于临床筛查.
荧光素的性质里分为吸收波长和发射波长,在这两种波长下荧光素的颜色是否不同?
做荧光抗体试验时,定量测定荧光素的含量用到的是哪个波长?
你是想偶联荧光素到抗体上吧,你查询一下荧光素偶联抗体的步骤,说明书上有的,纯化的时候该用分子筛分离。
主要荧光素一览表123
稻子8YJ492021-08-02
常用的荧光素主要有哪些
荧光素是具有光致荧光特性的染料,荧光染料种类很多。目前常用于标记抗体的荧光素有以下几种:异硫氰酸荧光素,四乙基罗丹明,四甲基异硫氰酸罗丹明,酶作用后产生荧光的物质。
在检查软组织肿瘤的时候需要做免疫组化,来确定病因。免疫组化介绍:免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。基本原理:抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先把组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法把抗原抗体结合的部位显示出来,以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性,定位或定量的研究。分类:这些常用免疫组织化学方法的原理如下:
1. 免疫荧光细胞化学技术把已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量。2. 免疫酶细胞化学技术是目前免疫组织化学研究中最常用的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究。3.免疫胶体金技术就是用胶体金标记一抗,二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性,定位或定量研究.由于胶体金的电子密度高,多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究。
荧光素基因有多少bp?急用,希望知道的大神可以告诉我,谢谢
免疫组化是什么?是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
荧光抗体技术 123
柯嘀552021-07-28
荧光抗体技术荧光素操作过程为何要避光
免疫组化分类组合123
众神拜大婶7772021-08-01
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。
这些常用免疫组织化学方法的原理如下:
1. 免疫荧光细胞化学技术
将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量.
2. 免疫酶细胞化学技术
是目前免疫组织化学研究中最常用的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究.
3. 免疫胶体金技术
就是用胶体金标记一抗,二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性,定位或定量研究.由于胶体金的电子密度高,多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究.向左转|向右转
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