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有没有朋友使用碧云天的细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒做过细胞衰老，本人小白，求相关细胞处理的过程及数据分析方法。贴壁细胞六孔板需要接种多少，染色后怎样计数进行数据处理。谢谢啦！
石蜡切片组织茜素红钙染色试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
石蜡切片组织茜素红（ALIZARINREDS）钙染色试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和鳌和技术，使钙离子和茜素红S产生复合物，来分析存档中的石蜡包埋的组织切片中橘红色钙沉积现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋组织切片的钙沉积和钙化结节检测。广泛用于骨细胞或组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
茜素红（ALIZARINREDS）是一种蒽醌（anthraquinone）衍生物：9,10-二氢-3,4-二羟基-9,10-二氧代-2-蒽磺酸单钠盐（9,10-Dihydro-3,4-dihydroxy-9,10-dioxo-2-anthracenesulfonicacidsodiumsalt），又称媒介红3（MordantRed3）或茜素磺酸钠（Sodiumalizarinesulfonate）。其分子式为C14H7NaO7S，分子量为342.25。茜素红和钙离子以鳌和方式形成复合物，用以识别组织细胞的钙盐成分。钙盐变化是骨细胞增殖分化和骨组织成骨潜能的标志之一。通过茜素红染色，产生桔红色沉积，但会受到其它金属元素的干扰。
产品内容
脱蜡液（ReagentA）自备
补水液A（ReagentB）100毫升
补水液B（ReagentC）100毫升
补水液C（ReagentD）100毫升
补水液D（ReagentE）100毫升
清理液（ReagentF）30毫升
染色液（ReagentG）10毫升
产品说明书1份
保存方式
保存在4℃冰箱里；染色液（ReagentG），避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全。有效保证3月
用户自备
小型染色缸：用于石蜡切片的脱蜡操作
光学显微镜：用于组织细胞染色后观察分析
实验步骤
一、脱蜡处理
1．取出10片待测的石蜡包埋的组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）
2．（选择步骤）放进80℃烘箱，孵育30分钟
3．（选择步骤）室温下静置15分钟
4．按下表依次放进小染色缸里孵育
染色缸
孵育时间
50毫升脱蜡液（ReagentA）
15分钟
50毫升脱蜡液（ReagentA）
15分钟
50毫升脱蜡液（ReagentA）
15分钟
50毫升补水液A（ReagentB）
3分钟
50毫升补水液B（ReagentC）
3分钟
50毫升补水液C（ReagentD）
3分钟
50毫升补水液D（ReagentE）
3分钟
5．小心移去切片上的补水液D（ReagentE）
6．小心加上200微升清理液（ReagentF）在切片上，铺满整个切片样品表面
7．室温下孵育5分钟
8．小心移去切片上的清理液（ReagentF）
二、样本染色处理
1．小心加上200微升染色液（ReagentG），铺满整个切片样品表面
2．室温下孵育2分钟（注意：可以延长至20分钟）；或直至可见桔红色
3．小心移去切片上的染色液（ReagentG）
4．空气中晾干
三、样本澄清处理
1．小心加上200微升补水液B（ReagentC）在切片上，铺满整个切片样品表面
2．小心移去切片上的补水液B（ReagentC）
3．重复实验步骤1和2二次
4．小心加上200微升补水液A（ReagentB）在切片上，铺满整个切片样品表面
5．小心移去切片上的补水液A（ReagentB）
6．重复实验步骤4和5二次
7．小心加上200微升脱蜡液（ReagentA）在切片上，铺满整个切片样品表面
8．小心移去切片上的脱蜡液（ReagentA）
9．重复实验步骤7和8一次
10．放上盖玻片或封片
11．即刻在一般光学显微镜下观察：钙沉积阳性细胞呈现桔红色
注意事项
1．本产品为50次操作
2．操作时，须带手套
3．试剂具有腐蚀性，注意操作安全
4．石蜡包埋前，组织样品须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，否则造成样品支离破碎
5．所有操作在室温下进行
6．试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
7．样品染色避免过度，肉眼可见桔红色即可终止染色
8．组织细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
9．本公司提供系列组织细胞金属元素染色试剂产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定显色清晰
免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜的现像和放大作用，在细胞，亚细胞水平检测各种抗原物质，并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。免疫组织化学技术现已有：免疫荧光组织（细胞）化学技术、免疫酶组织（细胞）化学技术、亲和组织化学技术、免疫金银及铁标记免疫组织化学技术等。免疫荧光组织（细胞）化学技术是采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），形成的抗原抗体复合物上带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原（或抗体）的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量。以达到对抗原物质定位、定性、定量测定的目的。
Bone Mesenchymal Stem Cells 作为一个细胞群体，还没有发现有特定细胞表面marker. 对于那些可以代表自我更新和分化的marker, 也不清楚到底要发现哪一个的表达才能确定该细胞就是BMSC。
目前常用的方法，就是采用培养，colony-forming unit-fibroblasts (CFU-F)这个方法。一般BMSC可以24-48小时贴壁。
流式细胞计数，比如STRO-1，但是一般认为STRO-1阳性的细胞更趋向于造血干细胞，和BMSC简单区别还不是很清楚。
这里有个培养分化的产品
http://www.rndsystems.com/pdf/SC020.pdf
