Probetex公司是一家成立于1997年的生命科学与合同研究机构（CRO），公司列举了6个专业领域，包括：1）成*人和胚胎肾细胞系的细胞库;2）产生和销售绵羊肾毒性抗体以诱导抗肾小球基底膜（抗GBM）肾小球肾炎，膜性（抗-Fx1A）肾病和系膜增殖性（抗-Thy1）肾小球肾炎。3）来自肾病模型的组织产品;4）提供常规组织学，免疫组织化学，电子显微镜和图像分析的组织病理学服务;5）专门从事上述模型的定制合同研究，以及其他20多种急，慢性实验性肾病，心血管肝，肺疾病模型; Probetex还协助评估和开发罕见疾病模型 Probetex提供独特的肾毒性抗血清来源（抗GBM，抗Fx1A和抗Thy-1），以诱导肾脏疾病的经典免疫模型。免疫介导的新月体性肾小球肾炎，被动膜性（Heymann肾炎，MesangioproliferativeGN Anti-GBM，Anti-Fx1A，Anti-Thy- 1,25毫升瓶.........630.00ea。 大量可用足够的抗血清诱导至少25只大鼠的疾病。 用于学术界和制药业的质量抗血清！用于未经Probetex验证的小鼠，但已被该物种的多名研究人员成功使用 PTX-001AGBM：绵羊抗大鼠分离的肾小球基底膜（抗GBM）血清用于诱导免疫介导的肾小球肾炎。 系膜增生 炎性细胞血管炎 肾小球硬化 肾纤维化注意：该产品取代了以前的PTX-001S绵羊抗全鼠肾小球。两种产品均针对大鼠GBM并产生相同的疾病模型。未经过验证或推荐用于老鼠。PTX-002S：绵羊抗大鼠Fx1A血清（Heymann肾炎）诱导膜性肾小球肾炎亚上皮免疫复合疾病Podocytopathy蛋白尿PTX-003S：绵羊抗大鼠胸腺细胞（抗Thy-1）血清诱导系膜增生性肾小球肾炎系膜迁移与扩散矩阵扩展炎症细胞浸润 PTX-000S：绵羊非免疫精华液，25毫升.....130.00美元。 用于对照或其他免疫学要求的正常血清。批量可用。
ProbetexProbetex产品介绍：Probetex由上海生物科技有限公司特价销售Probetex，产品涉及分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞、临床应用等领域。为你的科研项目、实验研究提供重要的材料基础，是各高校及研究所的细胞学、病理学、生物医学、临床医学等实验室常备细胞。免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应，所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料，如抗原抗体，酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体，而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种*使用的测定方法也不断出现。标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。包括：化学计量标准品、药检标准品，中药标准品，sigma标准品，USP标准品，化学标准品，进口标准品。对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质.生物不仅提供高科技实验仪器，还拥有*的实验室技术团队，技术操作专员会给购买的实验仪器设备的实验室操作人员应进行必要的技术培训，熟悉仪器设备的使用说明书，了解工作性能、附件的作用及用法，严格按操作规程操作，掌握好扎实的仪器分析理论知识，在购买Probetex后，切记结合说明书与相关技术指导，正确使用，合理保存。这些对于实验具有很好的实践帮助，能够让你得到更加可靠准确的实验数据。您的需求，就是我们的工作要求，我们会全心为您服务。公司有*的团队，实验室相关*技术员会为每一个购买产品的科研人士提供详细的说明书。通过分析测量结果，公正、科学地反映各单位对X、γ辐射剂量当量（率）测量能力，考察各单位对外测量工作的可靠性；检查参比单位的相关检测项目测量结果不确定度是否保持在合理的置信度；考查各参比单位检测人员实际测量的技术水平和数据处理能力；发现并解决测量及量值传递过程中存在的问题；规范工作计量器具的溯源方法， 之后，又进行技术改进，独创百余项技术，25项国内外，综合利用先的科技成果，创造了远大VII型直燃机，达到先水平，并成为上大的直燃式空调生产厂家。第五，国产化要从市场需求出发，以整体经济效益为目标。国产化不仅是要扩大国应能力，更重要的是应市场需求；国产化的效益不仅体现在供应方的收益，还在为相关配套产业带来的效益，以及国产化产品用户的效益。 ”公司始终坚定“质量、品质、与时俱进，追求*”的市场信念，在公司员工的不懈努力下，公司发展经历了市场的磨练与考验，得到了各界朋友的鼎立支持，公司迅速发展壮大，获得了客户的一致好评，奠定了中庭的品牌基础。Probetex 技术支持ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已*地应用于多种病原微生物所引起的传染病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于*之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。本试剂仅限于实验室科学研究用，不适用于临床诊断。注意事项：显色显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说，显色时间过短，结果偏低;显色时间过长，空白或者非特异性显色增加。洗板固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异性。洗板对于ELISA测定来说，也是极其关键的一步。洗液尽量不要溢出孔外;加洗液后要静置1分钟，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干;及时更换吸水纸，尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去，否则可能影响试验结果。 优势：原装进口抗体----、灵敏、特异,规范包被操作----吸附均匀，吸附性好，空白值低，孔底透明度高,*的优化方案----重复性高，可靠性强 1、应用于常规病理检测与疾病诊断等领域以及细胞识别、脂类研究、神经生物学和微生物学等方面的抗体类研究。 2、应用于细胞生物学和分子生物学等领域的细胞因子类产品。 3、应用于分子生物学领域的Hyperphage、引物系列和表达载体。 4、应用于腺相关病毒滴定、脂肪酶活性测定、C3a 测定和细胞活素多元分析的试剂和用于产品开发的微球体。 5、应用于基因表达、功能基因分析和RNA沉默等的传统重组病毒。 Probetex范围内免费快递运输，如出现运输质量问题，我们可以包退换货。各地均可发货，统一价格，本公司出售的所有产品仅供科研使用。您的需求，就是我们的工作要求，我们会全心为您服务。*的技术支撑的体现。我公司有*的细胞培养员和Probetex复旦细胞库，目前库容有各类细胞，有各类细胞、耐药细胞株、原代细胞株等。可以进行常规的细胞实验，MTT、PI染色、AnnexinV、细胞迁移、细胞转染等检测。 公司主营产品：细胞株和菌株、标准品与对照品、生化试剂、ELISA试剂盒、抗体和抗原、细胞因子、技术服务、实验耗材和消耗品、仪器设备、Probetex等等。还有更多相关品牌，实验产品，标准品，细胞株和实验技术服务，仪器设备等等前期后续服务，具体内容可以咨询详细了解Probetex。
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在单克隆抗体制备中，首先进行的就是抗原的设计与合成，这是制备单抗成功与否的关键。因为产生抗体的特异性与亲合性是与抗原密切相关的，合成的抗原如果可以将所需要的抗原决定簇充分暴露出来，那么机体更容易识别抗原决定簇，从而免疫的动物所产生的抗体自然会在特异性和亲合力上最大程度的与抗原决定簇拟合。所以，在制备单抗的过程中，设计并合成抗原尤为重要。
对于小分子药物抗原的设计与合成，园子里已经有很多战友进行了讨论和交流，下面，我再将自己所了解的结合战友们的经验，作以下总结，由于能力有限，有总结的不到位的地方，还请战友们指出来，不足的地方，大家一起讨论补充。
一、完全抗原的设计
大家都知道，完全抗原的合成主要是在半抗原的基础上连接上蛋白质形成的，主要原因在于，半抗原属于小分子药物，只有反应原性，但不具有免疫原性，只有与载体（通常为蛋白质，也有多肽）偶连后形成完全抗原，才具有免疫原性，进入动物体内后才会产生抗体。对于半抗原而言（大多数为小分子药物），不同种类药物有不同的空间结构，究竟如何设计合成完全抗原呢？
1、分析药物结构。以磺胺对甲氧嘧啶（SMD）为例，磺胺药物的母体为对氨基苯磺酰胺，大部分的磺胺药是在N1端连接了取代基，N4端为氨基。也就是说各种药物由于N1端取代基的不同从而具有不同的活性，那么对于制备抗SMD的抗体而言，其抗原的合成就可以选择在N4端连接蛋白，将N1端的对甲嘧啶环暴露出来，这样免疫后就可以使机体产生针对SMD的抗体。如果是在N1端连接，那么半抗原突出的是磺胺类药物共有的对氨基磺酸母核，这样制备出的抗体其交叉性就会较大，更易识别磺胺类的其他药物了。
所以，在设计之前应该认真分析需要合成的抗原结构，找出起抗原活性的位置及其抗原决定簇的位置。
2、设计合成的原则：免疫半抗原设计的基本原则是免疫半抗原与载体连接后在结合抗原中能最大程度保持和突出待测物的特征结构，特别是立体结构。
3、“间隔臂”。免疫半抗原一般有几结构组成：待测物特征结构、用于连接特征结构和载体的间隔分子和末端的活性基团。间隔分子又称为”间隔臂“。免疫系统对位于载体远端的半抗原部分识别能力最强，所以间隔臂的位置选择十分重要。间隔臂的位置结构最能体现一种免疫半抗原的设计意图。一般我们可以直接利用待测物中非特征的结构部分作为间隔臂或自行构建间隔臂。通常间隔臂为非极性，除供偶连合成的基团外不应含有其他高免疫活性的结构，如苯环、杂环、饱和链烃等。
有的人认为，引入间隔臂对抗体的产生反而有干扰，假若间隔臂较长，或立体结构较特征性，则很容易产生针对间隔臂的“桥抗体“，在单抗的筛选过程中会产生干扰。但是，有的药物由于分子量小、空间结构简单，很难通过单纯的连接蛋白产生高效特异的抗体，所以，引入间隔臂会有利于抗体的产生。
二、完全抗原的合成：
常用的载体蛋白中，供连接的主要基团为游离氨基、游离羧基、酚基、半胱氨酸的巯基、组氨酸的咪唑基、色氨酸的吲哚基、精氨酸的胍基等。但由于蛋白质载体参与反应的基团差不多相同，所以连接方法主要取决于半抗原活性基团种类。
1、含羧基的半抗原：主要有混合酸酐法、碳二亚胺法、N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法（NHS）。该法的优点在于不含有间隔臂，可以排除“桥抗体“的产生。
2、含氨基的半抗原：有戊二醛法（含有戊二醛，容易产生“桥抗体“）、重氮法（不含间隔臂）。
3、含羟基的半抗原：主要有琥珀酸酐法、卤代羧酸法。
此外，还有含巯基、醛基或酮基、硝基的半抗原，其偶连方法这里不再赘述，大家可以参考洪孝庄的《蛋白质连接技术》。、
三、完全抗原合成的鉴定：
可以采用紫外分光光度法、红外光谱法和免疫实验的方法来进行鉴定偶连反应是否成功。
半抗原结合比的计算：即指半抗原与载体的连接比。一般认为，半抗原结合比过高或过低均影响抗体生成，以5-15为宜。但，有些研究者的实验结果表明，半抗原结合比的大小对诱导抗体产生无决定性的影响。可以通过反应原料中蛋白质与半抗原的摩尔比和溶液的PH来控制结合比。
半抗原结合比=（ε结合物-ε载体）/ε半抗原
（ε为某波长的摩尔吸光系数，取载体、半抗原和结合物均有较强吸收时的波长；ε载体、ε半抗原可预先用纯品检测得到）
以下整理了园子里一些小分子药物抗原设计与合成方法的帖子，大家可以参考：
【求助】关于莱克多巴胺的人工抗原合成。特急！(戊二醛法)
[交流]单抗讨论小组话题三：小分子抗原的单抗制备策略
（请教）人工抗原怎么制备
【讨论】为什么小分子一般连接BSA免疫偶不是连其他蛋白啊
【求助】l氯霉素半抗原的合成
【讨论】氯霉素人工抗原偶联率的计算
【求助】氯霉素人工抗原制备过程中的问题
Re:【求助】请教:戊二醛法合成完全抗原时遇到的问题(合成SMM)
Re:【交流】小分子药物的蛋白质连接技术(精华帖)
（请教）如何产生较高效价抗青霉素抗体
Re:【求助】重氮法制备人工抗原遇到的问题
大家好，最近在做单抗，里面有些问题一直想不通，我想请大神帮忙一下，想问一下饲养细胞加少了是大概多少，我一直6周龄的balb/C，刚拿回来就取饲养细胞了，然后取了3毫升，注射到60毫升的HAT中铺了六块板子，这个量多么，么有细胞计数，至今细胞计数不是很会，去想问你们第二天去看板子是时候，底下会有雾一样的细胞么，细胞多的地方你们的液体上清会有点变色么，要一点不变色的是好的，还是细胞上清稍微变色是正常的呢谢谢大神指导
◆ 治疗:每公斤体重0.5ml,腹股沟内侧肌肉注射,连用3天；严重者酌情加倍.
◆ 预防:体重10公斤以下犬,每只肌肉注射1-3ml；体重10-25公斤犬,每只肌肉注射3-5 ml；体重25公斤以上犬,每只肌肉注射5-10ml；可保护犬一周内免受犬细小病毒的感染。
(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。
(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。
(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。
(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。
2．单克隆抗体的局限性
(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。
(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。
(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。向左转|向右转
（1）鼠源单克隆抗体的生产应用的动物细胞工程技术有动物细胞培养、动物细胞融合等．
（2）据图可知，免疫原性的产生主要与抗体的 C区有关．
（3）基因嵌合表达载兼具有淋巴细胞和体细胞的特点，体转染成功的细胞应该具有的特点是：分泌抗体和无限增殖能力．
（4）嵌合抗体的生产属于蛋白质工程范畴．图示中的嵌合抗体具有特异性，能比较有效的治疗肿瘤．
免疫原分为可溶性抗原和颗粒性（细胞）抗原，用无菌盐水稀释并与佐剂混合，腹腔注射抗原与佐剂彻底混匀后形成的稳定乳状液，在免疫原提供持续的免疫应答基础上进行加强免疫
周期第1天 采血0.2ml（获得0.1ml免疫前血清）
第一次免疫（抗原加弗氏完全佐剂）
第14天 第二次免疫（抗原加弗氏不完全佐剂）
第21天 采血和ELISA检测
第35天 第三次免疫（抗原加弗氏不完全佐剂）
第42天 采血和ELISA检测
第56天 第四次免疫（抗原溶于PBS或盐水）
第61天 细胞融合向左转|向右转
随着基因技术的蓬勃发展，单克隆抗体以其高特异性、有效型和安全性正在成为国际药品市场上的一大类新型诊断和治疗药物，在肿瘤和其他治疗领域中成为了市场的新宠。由于抗体药物在市场上的卓越表现，在这些抗体药物专利过期后催生了一类生物药物-Biosimilar（也称为Biobetter或Follow-onBIOLOGics），此类药物是在原创生物药物产品的专利保护过期以后，生产的区别于原创生物产品的类似物。[1]这种原创生物产品的类似物称为生物仿制药，生物仿制药是一种与原研药具有相同的活性成分，在剂量、剂型、给药途径、安全性、有效性、质量、治疗作用以及适应症上没有显著差异的一种仿制品。
生物仿制药是生物制剂的仿制品，相比化学小分子的仿制药而言，生物仿制药的制造工艺难度更大，要求的生物技术也更多。从国内的注册申报的政策来看，即便是生物仿制药也需要经过三期200例临床试验，达到不低于原研药的药效时，才能批准上市，因此具有一定的仿制难度。同样，对于单克隆抗体的生物原研药厂家，通过注册申报政策和有效的专利布局，适当延长原研药品的专利保护期并不是一件困难的工作，具体应该如何进行呢，下面作者将进行逐一分析。
新药研发过程时间较长，根据美国食品药品监督管理局（FDA）统计，一种新药从研发到最后投入市场平均需要12年，其中实验室研究需要占用5年时间。[2]
通常单克隆抗体药物的研发单位都是在设计出人源化的单克隆抗体，并证明该人源化单克隆抗体具有预计的体内体外实验效果后，就将该人源化的单克隆抗体结构申请专利保护。为了使得抗体专利获得较大的保护范围，有经验的专利代理人在撰写的时候，首先是通过限定轻链CDR区的序列，再限定重链CDR区的序列，然后限定FC区的序列这样层层限定的得到一个合理的抗体的保护范围，这样不仅保护了自己的产品，只要与自己产品相同CDR区的抗体也落入了本发明的专利范围内。然而，当申请人碰到没有经验的专利代理人，这时专利申请的权利要求仅仅保护了自己产品中的抗体序列。尽管这样，只要本专利申请能够顺利得到授权，就达到了完全保护自己产品的目的。说到这里，可能与我们通常理解的专利不大一样了，一个没有排它性的专利能够保护自己吗？如果仿制药厂家在抗体的FC段稍作改动，专利不是就不侵权了吗？
虽然专利不侵权，但是如果有其他企业为了避免专利的侵权，稍微改动抗体的序列，根据《药品注册管理办法》（局令第17号）附件三：生物制品注册分类及临床申报资料要求，对于与已上市销售制品结构不完全相同且国内外均未上市销售的制品（包括氨基酸位点突变、缺失，因表达系统不同而产生、消除或者改变翻译后修饰，对产物进行化学修饰等），这类药物属于注册分类中的新药，需要按照新药进行临床试验，也就是临床Ⅰ期的20例、临床Ⅱ期的100例以及临床Ⅲ期的300例试验都要完成。此外，对于这类的生物制品也是依然要完成临床前的毒理实验、药理实验和药效学实验，这样算下来，临床前和临床阶段要做的试验数目一点也不比原研单位的实验数目少，因为临床Ⅲ期是以原研药作为对照，只有不差于原研的药效才可获批，所以面临的失败风险也很高，假设成功的话，需要的研发时间也要12年。
单克隆抗体结构的专利申请工作通常也是在临床前就已经申请了专利，距离真正的药品上市还有将近十年的时间，那么对于20年的专利保护期而言，药品上市后能够获得保护的时间只有10年甚至更短的时间了，接下来，对于新药研发单位而言，还能够申请哪些专利来有效地保护抗体新药呢？
另外，与化学药品制备方法不同的是，生物药品在制备中需要的原料是宿主细胞株，也要通过专利将宿主细胞株保护起来，而且作为与抗体结构同等重要的地位进行保护。这主要源于《药品注册管理办法》（局令第17号）附件三：生物制品注册分类及申报要求，对于与已上市销售制品制备方法不同的制品（例如不同的表达体系、宿主细胞等），即注册分类中的第10类生物制品在临床上按照新药进行临床试验，也就是说，临床Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期实验一个都不能少，临床前在药理毒理方面的试验能够比原研生物药少一点，其他的药学实验也是一样的。
在生物制品宿主细胞株的这类专利中，通常会涉及到生物抗体的表达方法，也是我们所说的药品制备方法。生物药品的制备方法通常在药品申报临床前形成。有时，由于药品进入临床，生物药品需要扩大生产，原有的制备方法有时需要重新调整，形成了新的制备方法。这时，对于专利申请来说，如果在临床前就将制备方法申请了专利，后续再申请改进工艺的专利申请时，往往会出现在先申请影响再后申请的专利创造性，导致扩大生产后的制备方法难以获得专利授权。
为了避免以上情况的发生，建议在先的制备方法通过公司机密的方式进行保护。等到在后的制备方法确定下来，将在先和在后的两种制备方法同时申请专利。由于在后制备方法的形成时间已经是药品的临床试验期了，所以通过制备方法专利还能够起到通过专利延长药品保护时间的目的。
原研生物制药单位在做这类专利申请的时候，建议把制备抗体专利申请安排在临床I期试验结束或者临床Ⅱ期试验中，大约在抗体结构专利申请之后的5-7年之间。为什么选择在这个时间点呢？根据药品研发经验，临床Ⅱ期和临床Ⅲ期通常的研发周期在五年左右，这时也正好是方法专利从提交到授权的周期。一方面刚好在临床Ⅲ期试验结束后，产品拿到新药证书，专利也正好获得授权；另一方面，如果在临床Ⅲ期实验结果非常好，原研单位对外公开产品信息的时候，重要的专利还在审查期间，那么该专利申请会面临很多的公众意见的情况，这些都会影响此类专利申请的授权。
在做生物药品宿主细胞株、制备方法这类专利申请的时候，还需要考虑未来药品的质量标准。原研单位也是以后该药品的质量标准制定者，仿制药厂家如果无法达到该标准，仿制药品也无法得到批准。因此，能够实现未来上市药品质量标准的制备方案都要在该专利中保护起来。举个例子，对于实现原研药品中“杂质含量控制在某一范围内”是该药品以后的行业标准，那么有将“该杂质含量控制在某个范围内”的药品制备方案都要在该专利申请的权利要求中保护起来。
即便有的企业为了绕开过以上药品宿主细胞株的专利，另辟其他制备方法的工艺路线，也相当于一个新药的研发周期。
此外，对于原研的生物制药单位而言，以上的宿主细胞株、制备方法专利申请在撰写时要结合向国家药监局正式申报材料中的记录来撰写，比如与申报材料相同的宿主细胞株、载体的构建方法、表达方式等都要通过该专利申请的权利要求保护起来。另外，宿主细胞株要记得去保藏。[3]
说完抗体结构专利和宿主细胞株专利申请，那么接下来说一下抗体制剂的专利了。生物药品与化学药品不同，可选择的制药辅料很少，尽管如此，有的生物药品为了克服粘度过大、稳定性差等缺陷，还是会在制药辅料上做一些研究，从而得到一个稳定性好，使用效率高的制剂。这时的制剂在申请专利时，因为有了以上这些与现有技术不同的地方，专利申请具有创造性，也能得到授权。建议这类制剂专利申请作为整个生物药品专利布局中的一部分进行申请。从产品的研发流程来看，制剂技术在临床前就已经完成了，但是为了通过制剂专利起到延长药品专利保护期的目的，建议制剂的相关专利申请在临床Ⅱ期结束或者临床Ⅲ前提交，尽量保证在产品获得新药证书前，得到专利授权。
制剂专利申请撰写时的要求类似于宿主细胞株专利申请，需要考虑未来药品的质量标准。首先向国家药监局提交正式申报材料中的抗体制剂的技术方案必须包括在该制剂的权利要求中。此外，为了扩大保护范围，申请人还可以写一些自己没有用到的，但是能够达到同样质量标准制剂的技术方案写入专利申请的权利要求中。比如说：为了实现与原研药品生物利用度的相同标准，需要的其他技术方案也要进行专利保护。可以用一篇专利申请保护，也可以用多个外围专利申请把这些技术方案保护进去。
仿制药企业为了规避专利，必然要在制剂上进行绕道，绕道形成的新制剂在《药品注册管理办法》中的分类分到了13类，按照《药品注册管理办法》，注册分类13的制品也是需进行Ⅲ期临床试验，临床试验例数不少于200例。
对于抗体的原研单位而言，因为自己的产品是第一个进入市场的，所以，相关的行业标准也都是自己制定的。如果抗体制剂的专利保护方案能够和自己制定的行业标准捆绑在一起，那么对于仿制药企业而言，冲破原研药企在整个制剂专利布局上的技术壁垒，再经过200例临床试验，需要达到不差于原研药品的临床效果难度非常大。因此，作为整个单克隆抗体药物专利布局最后的一个制剂专利，又一次地将药品的专利保护时间得以延长。
总结
单克隆抗体药物由于制备生产难度大，在《药品注册管理办法》中对于仿制药和新药在临床和临床试验前进行了严格的规定，因此，对于原研单克隆抗体制药企业，做好在抗体结构、宿主细胞株、抗体制剂三个方面的专利布局，就能够将自己的药品得到有效地专利保护，并通过专利将自己产品的专利保护期有效延长。（作者：托娅）
注释：
[1]《单克隆抗体药物与研发趋势》GE单克隆抗体手册。
[2]王友同，吴梧桐，吴文俊我国生物制药产业的过去、现在和将来药物生物技术2010,17（1）：1-14
[3]《用于专利程序的微生物保藏办法公告》中国专利局公告（第8号）
转自中国知识产权网，http://www.cnipr.com/yysw/zscqzlygl/201611/t20161125_199955.htm（原文责任编辑：ShanYuqiu）
①抗CD20单抗，利妥西单抗；
②抗表皮生长因子受体（EGFR)单抗，西妥昔单抗、帕尼单抗（Panitumab);
③抗Her-2单抗，曲妥珠单抗；
④抗VEGF单抗，贝伐珠单抗（Avastin)等。
一、前言
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤。
虽然单抗技术已经非常成熟，但是由于其经济价值，仍然有很多人在从事这项研究，而且其中也会遇到很多这样那样大问题。我本人就是其中一个，由于是第一次做单抗，所以过程中遇到了很多困难，终于在前几天得到了几株阳性克隆。
鉴于此，我将单克隆抗体制备的整个过程贴出来，同时搜索了园子里面一些战友的求助帖以及一些经典的应助帖，希望能对将要或是正在从事这项研究的战友们有些帮助。
1．材料
(1) 细胞：取对数生长期的细胞。
(2) 10％二甲基亚砜保护液（二甲基亚砜能损坏滤器，而又被高压所破坏，所以不能过滤或高压消毒。其本身就是毒品，无菌）：含10％二甲基亚砜、20％灭活胎牛血清，70％RPMI—1640液。
(3) 20％FCS—1640培养液：含青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml。
(4) 灭菌的2ml安瓶等
2．操作方法
(1) 去掉细胞培养瓶中的旧的培养液，加入10％FCS—1640液，使细胞悬浮。
(3) 1 000r/min离心10min，去上清。细胞沉淀用10％二甲基亚砜保护液制成悬液，使成1.0×107细胞／ml。
(3) 取样，台盼兰染色，计数活细胞，应在95％以上。
(4) 用器将细胞分装安瓶，每瓶0.5ml～1.0ml，熔封安瓶。
(5) 放4℃ 2h。
(6) 放液氮罐气态部分（-70℃）15h。
(7) 转入液氮部分。
复苏
1．从液氮罐中取出安瓶立即放37℃水浴中速溶。
2．无菌操作打开安瓶，取出细胞悬液，转入组织培养瓶。
3．逐滴缓慢加入20％FCS－1640培养液3.5ml，这个过程延续3min。
4．5％CO2饱和湿度，37℃培养。
5．4h后弃去培养液上清，加入新鲜的20％FCS－1640培养液。
6．继续培养，换液，以至形成单层。
