- IHC
- IHC - Paraffin (20 µg/ml)
- Western blot (1:500 - 1:3000)
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LifespanBiosciences公司是分子病理学行业的领头军，销售抗体、免疫组化服务以及蛋白质定位数据库。1995年创立的LifeSpanBiosciences已开发了针对药物标靶主要种类的专有抗体，用以研究这些蛋白质在人正常和患病组织中的表达。LifeSpanBiosciences在高通量成像和癌症鉴别软件产品中也处于领先地位，正在开发用于在在临诊前期毒理学和癌症诊断方面进行病理学解读的仪器和软件。
关于LifeSpanBioSciences，Inc.（LSBIo）LifeSpanBioSciences为全球研究人员提供高质量的抗体，蛋白质，生化试剂，ELISA和化验试剂盒，免疫组化数据和服务。由Drs。于1995年创立。约瑟夫·布朗和格兰纳·伯默（LSG）成立于LSBio，是一家分子病理学公司，致力于IHC在人体疾病组织中的蛋白质定位。通过执行数千项IHC研究以及生成和测试成千上万种抗体获得的经验，LSBio已成为抗体行业的世界领导者，并以卓越的声誉而著称。 LSBio拥有针对20,000个靶标的550,000单克隆和多克隆抗体目录。抗体可用于大多数物种和所有主要研究应用，例如免疫印迹，IHC，免疫荧光和荧光激活的细胞分选。通过广泛的正在进行的内部测试，这些抗体中的14,000多种也被鉴定为特殊的IHC试剂，并获得了IHC-plus™品牌。 LSBio还提供30,000种高质量的免疫测定，包括夹心ELISA（酶联免疫吸附测定）试剂盒，竞争性EIA（酶免疫测定）试剂盒以及基于细胞和DNA结合的试剂盒。 LSBio还提供45,000种天然蛋白提取物以及经过工程改造的重组蛋白，其形式为细胞裂解液或高度纯化的试剂。 最近，LSBio发布了他们不断增长的化验试剂盒和生化试剂系列，旨在补充研究社区的其他产品线。 十多年来，研究人员一直依靠LSBio的专业知识来满足其分子病理学外包需求。LSBio的服务包括：抗体生产和鉴定，定制的IHC研究（由庞大的档案人类组织库支持）以及组织交叉反应性筛选。 LSBio坚持其产品和服务的质量，并提供无与伦比的客户服务和支持。在未来的几年中，LSBio计划继续扩大其高质量蛋白质组学产品的目录，为客户提供出色的试剂，服务和支持，以加速他们的研究。
免疫组织化学服务与LifeSpan合作设计定制的免疫组织化学，以解决您的特定生物学问题。将整个定位过程外包，而不必担心寻找和表征靶标特异性抗体，寻找和鉴定难以发现的组织，并具有解释与复杂的人类病理学有关的免疫染色的能力。TCR筛选服务在免疫组织化学中针对大量正常的冷冻人类组织类型测试您的治疗性抗体，以确定潜在的意外结合。我们的非GLPTCR服务是根据FDA的建议设计的，该建议在其“用于人类的单克隆抗体产品的生产和测试要考虑的要点”中概述。免疫组织化学验证抗体的领导者新冠肺炎LSBio提供了许多与冠状病毒有关的产品，包括抗体，蛋白质，检测试剂盒和可表达的ORF克隆。SARS-CoV-2/COVID-19冠状病毒检测冠状病毒和COVID-19抑制剂冠状病毒蛋白质组学细胞因子释放综合征一般冠状病毒信息抗体我们收集了针对大多数靶蛋白的565,268单克隆和多克隆抗体。它们涵盖了所有主要的研究物种，应用，并且有多种共轭形式。我们的IHC-plus™抗体非常适合用于FFPE人体组织免疫组织化学。所有抗体Path- Plus ™癌症病理抗体Path- Plus ™神经抗体原发性抗体Path- Plus ™癌症抗体二抗IHC- Plus ™抗体同型对照ELISA和测定试剂盒我们的传统三明治，竞争性EIA和直接ELISA试剂盒提供了一种定量测量数千个目标靶标的方法，而我们的基于细胞和DNA结合的ELISA试剂盒是进行体外研究和转录因子分析的理想选择。化学发光CLIA试剂盒可对低拷贝靶标进行高灵敏度检测，我们的开发试剂盒使研究人员能够经济高效地进行大量测定。我们不断增加的化验试剂盒集合为研究人员提供了监测多种生物过程的方法，例如细胞凋亡，细胞增殖，新陈代谢等。所有套件检测试剂盒传统ELISA试剂盒基于细胞的ELISA试剂盒磷酸特异性ELISA试剂盒DNA结合ELISA试剂盒ELISA开发试剂盒化学发光CLIA试剂盒蛋白质类蛋白质可用于各种各样的应用中，例如用于功能测定的开发，小分子筛选，原位受体活化或仅用作WesternBlot的对照。我们提供提取的天然蛋白和重组蛋白，其形式为细胞裂解物，或者从细菌或哺乳动物表达系统中纯化。许多蛋白质具有生物活性并经过认证的低内毒素。所有蛋白质重组蛋白天然蛋白质过表达裂解物生物活性蛋白无动物蛋白合成肽细胞和组织产品LSBio提供广泛的细胞和组织产品，包括FFPE组织切片，面板和阵列，第一链CDNA，基因组DNA，总RNA，细胞和组织裂解物，以及各种相关的测定试剂盒。所有细胞和组织产品组织切片和阵列细胞和组织裂解液RNA和DNA提取物分子生物学LSBio提供了超过13,000个cDNA的广泛选择，每个cDNA均可在克隆载体或十四种不同的即用型表达载体之一中获得。cDNA/ORF克隆是研究蛋白质功能和基因表达的基础。经过验证的表达就绪ORF克隆为研究人员提供了直接启动蛋白质分析和表达研究的选择，而无需花费宝贵的时间进行RNA分离，cDNA合成，框内克隆和测序。所有分子生物学产品cDNA克隆表达就绪的ORF克隆免疫组化试剂LSBio提供设计和执行定制免疫组织化学实验所需的所有组件，从抗原回收到盖玻片。用于AP或HRP底物开发的高质量，值得信赖的品牌封闭剂，检测柱和Avidin-Biotin系统。使用我们的鼠标鼠标和多路检测系统，轻松完成具有挑战性的项目。所有IHC试剂抗原提取封闭剂检测聚合物ABC检测试剂盒基材特别/柜台污渍安装介质免疫组织化学数据和服务在过去的20年中，我们进行了1000项自定义IHC研究。我们的病理学家团队在设计有效的IHC研究和解释与正常和疾病过程相关的结果方面经验丰富。这些服务得到了我们庞大的组织库的支持，该组织库几乎包含每种组织类型和疾病。定制免疫组织化学研究组织交叉反应筛选免疫组织化学报告IHC-plus™抗体关于我们的组织银行生化产品特色产品类别包括激动剂，拮抗剂，抑制剂和调节剂，可满足您的生物医学研究需求。高质量的产品可用于癌症研究，心血管疾病，细胞生物学，脂质研究，免疫学，新陈代谢，神经科学，氧化损伤和毒理学。所有生化试剂
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因为内参有好几种，分子量差别也比较大，更换分子量与检测蛋白差距更大的内参就可以避免这个问题
另外也可以先用一抗孵育显色和检测，再用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体，重新进行内参的抗体孵育显色检测。这样也可以将检测蛋白和内参显色在同一张膜上
【GAPDH】或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ）的英文缩写。GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，且GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的。
【Western Blot】蛋白质印迹法（免疫印迹试验）。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
因为这个实验用到了抗体，抗体是特异识别某一种蛋白的，所以只要能检测到信号，说明样品中有该蛋白存在，如果有相应的对照，也能半定量说明该蛋白的量如何。
一般可与大鼠、小鼠、人、兔均有交叉反应，即可作为上述任一来源蛋白的内参。
Actin分子量为42kD，为肌动蛋白
GAPDH分子量为36kD，为磷酸脱氢酶
要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为WesternBlot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候WesternBlot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定性的。所以，严谨的WesternBlot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时，借助参照体系很容易就可以查出问题所在，而不必抓耳挠腮怨天尤人。良好的参照体系通常包括分子量Marker（用来确定蛋白条带对应的分子量大小），空白载体对照（如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照），已知量标准产物的正对照；另外还有内参。可是由于经费限制或者偷懒的原因，国内的不少人做Western Blot往往省略参照，导致结果出现问题时无法分析结果――即便有结果也可能影响结果的分析。
内参是最容易被忽略的一项。我们知道，要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。所以你需要内参。
内参即是内部参照（InternalControl），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(HousekeepingProteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting 实验中，除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外，还需要进行内参的检测，以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
在国外发表的文章中，Western Blotting实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是，国内仍有不少科研人员在WesternBlotting实验中忽略了内参的使用，将蛋白浓度测定作为规范需相互比较的各种样品间上样量等同的唯一方法。然而各种蛋白质浓度定量方法，都存在局限性，不能完全准确的确定各种样品的准确蛋白浓度。如UV法直接定量，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质，相对于比色法来说，操作简单，但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；且敏感度低，要求蛋白的浓度较高。比色法测定蛋白浓度一般有BCA，Bradford，Lowry等几种方法。BCA法与Lowry法都容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。Bradford 法敏感度最高，且与一系列干扰Lowry，BCA反应的还原剂（如DTT，巯基乙醇）相容。但是对于去污剂依然是敏感的，其最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比性。另外，蛋白质定量以后进行电泳时需要等量上样，此步骤也存在操作误差。在Western blotting实验时使用内参，即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。
在WesternBlotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。
实验结果分析其实很简单：如果样品蛋白量有限，只够进行一次电泳转膜实验时，分别检测样品的内参量和目的蛋白量。将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量，得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量，再用此数值进行样品间的比较和分析，得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果。如果样品量充分，可以先检测内参，观测样品间内参显色条带是否一致，根据差异大小调整各样品的上样量重新进行Western Blotting实验，至内参量一致为止；若内参一致，即可进行不同样品间目的蛋白表达变化分析。这样虽然麻烦一点，但是可以保证结果更有说服力，更可信。毕竟我们的实验是一种严谨的工作。
附：在Western Blotting实验过程中使用内参的方法有：
一、 超级简便的标记内参使用法：只要在二抗孵育时加入HRP标记内参抗体，按照正常操作即可。
二、普通内参：当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量相差不大时，可以先进行目的蛋白的抗体温育显色和检测。然后使用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体，重新进行内参蛋白的抗体温育、显色检测。
三、当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量大小相差比较明显情况下，可以在转膜后预染，根据蛋白质Marker的大小将膜剪为大分子量和小分子量两部分，使内参蛋白与目的蛋白分开。然后两块膜分别与内参蛋白抗体以及目的蛋白抗体进行温育，二抗温育以及显色。
【摘自网络】展开
β-Actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。Beta-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。
β-actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构。在用作Western的参照时，Actin抗体和Tubulin抗体的主要不同之处在于两者所识别蛋白的分子量不同，这样可以选择合适的参照在同一块胶同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。向左转|向右转
