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Diagenode
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Western Blot内参抗体选择原则 内参抗体 种类很多,比如beta-actin、beta-tubunlin、GAPDH、α-tubunlin等,那么针对自己的实验 查看更多>
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2021-08-02
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βActin 和GAPDH简介 123
张凯6962021-07-25
β-Actin是PCR常用的内参,β-Actin抗体是Western Blot很好的内参指数。内参即是内部参照(Internal Control),对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)等。因此β-Actin抗体、β-Tubulin抗体以及GAPDH抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体。
β-Actin作为内参是得到了公认的,这是针对大多数组织和细胞来说的,它广泛分布于细胞浆内,表达量非常丰富。Beta-actin由375个氨基酸组成,分子量大小为42-43kDa左右。
β-actin的蛋白水平通常不会发生改变,因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照,也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构。在用作Western的参照时,Actin抗体和Tubulin抗体的主要不同之处在于两者所识别蛋白的分子量不同,这样可以选择合适的参照在同一块胶同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。向左转|向右转
最近准备做WB,但是对抗体选择还是很困惑,作为生手我担心用单克隆抗体做不出条带(看网上写的多克隆的效价高),但是发现要买的一抗abcam 只有单克隆,那我的内参GAPDH 也要买单克隆抗体么? 谢谢!如果买单克隆的内参抗体国内的杭州至贤的产品 有用过的么? 谢谢!
最近做western越来越讨厌手上的这支内参gapdh。效价低不说,还最多只能用两次!条带也不够亮,还有背景。看到坛子里有人用1:10000还能回收好多次,不禁心生羡慕。故求助下哪家的内参抗体比较好?原装分装国产进口都可以。谢谢!~
内参一般都会用β-actin, GAPDH
当然跟物种有关。
客户订错了该产品,有需要得PM我。
检测蛋白和内参分子量接近最好的办法就是更换内参
因为内参有好几种,分子量差别也比较大,更换分子量与检测蛋白差距更大的内参就可以避免这个问题
另外也可以先用一抗孵育显色和检测,再用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体,重新进行内参的抗体孵育显色检测。这样也可以将检测蛋白和内参显色在同一张膜上
Western Blot内参抗体选择原则 实验方法123
他曾像风一样自由2021-07-30
请问westernblot什么时候加内参的抗体呀?有内参的一抗二抗吗?
跑电泳后就要把胶切开吗?(把目和蛋白条带和内参条带分开)还是等转膜完成后,再将目的蛋白条带和内参跳海分开呢?
我用过他们的抗体,他们主要做些信号转导方面的抗体和修饰性抗体,好像还帮人做抗体的定制,有些磷酸化的,其他的还有点,我没有注意,我以前做过ERK通路介导细胞凋亡的,买过他们的P-ERK和ERK一对,效果挺好的
测的是某种特定蛋白的量。或者是说测定某种蛋白是否存在于样品中,因为WB只能做半定量。
因为这个实验用到了抗体,抗体是特异识别某一种蛋白的,所以只要能检测到信号,说明样品中有该蛋白存在,如果有相应的对照,也能半定量说明该蛋白的量如何。
内个,个人觉得比较价格还是很有说服力的,一分价钱一分货。
虽然没有具体用过检测这个抗原的抗体,但是如果希望抗体特异性好点,能检测丰度低的蛋白,还是选Abcam吧,Santa有时候全凭人品了,内参抗体什么的还能凑活,其他的比较勉强。
内个,个人觉得比较价格还是很有说服力的,一分价钱一分货。
虽然没有具体用过检测这个抗原的抗体,但是如果希望抗体特异性好点,能检测丰度低的蛋白,还是选Abcam吧,Santa有时候全凭人品了,内参抗体什么的还能凑活,其他的比较勉强。
常用的actin,GAPDH内参抗体都是与人,动物有关。怎么没有微生物方面的内参抗体啊?
我要做酵母膜蛋白的westernblot,不知道选用何种内参抗体,有人作过吗?如能解惑,不甚感激。谢谢!
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