Datasheet
| Product Description | Monoclonal Anti-Human Ferritin |
| Catalog Number | MF011 |
| Clone ID | 4C11B10 |
| Size | 1 mg |
| Reactivity | Human |
| Specificity | This antibody reacts with human ferritin. |
| Application | Ferritin quantitative assays by EIA |
| Host Animal | Hybridization of P3x63-Ag 9.653 myeloma cells with spleen cells from Balb/c mouse |
| Source | Mouse ascites |
| Isotype | IgG1 |
| Immunogen | Human liver ferritin |
| Format | Purified, liquid |
| Buffer | 0.015 M potassium phosphate buffer, 0.85% NaCl, 0.05% NaN3 pH=7.2 |
| Purification | DEAE chromatography |
| Purity | >95% by HPLC and SDS-PAGE |
| Concentration | Lot: D3111; Concentration: 4.90 mg/mL |
| Matched Pair Antibody | MF012, MF013, MF014, MF015,MF016 |
| Storage Condition | 2-8°C for one year; -20°C for long term |
美国FullMoonBioSystems公司成立于2001年，专注于蛋白组研究的创新研究，其特色的蛋白芯片产品的所有抗体都通过专利的3-D聚合材料固定在高质量的玻片表面，从而确保抗体芯片产品高度的有效性和特异性。芯片上包含经过验证的抗体、阳性参照、阴性参照等。为了增大数据的可信度，每个抗体都进行了六次重复.产品及服务特点适用于高通量蛋白表达研究 高度优质的原料抗体专利的3-D聚合材料芯片片基高度特异性，信号强，低背景噪音蛋白的标记、检测方便可行，常用的芯片扫描仪样品用量少：每个检测只需要5μg蛋白真实样品和比例：组织细胞全部的直接裂解物，无需提纯，非变性：真实比例，天然构象聚焦信号通路：每个芯片集中特定信号传导通路，采用精选的优质抗体六次重复，保证数据的稳定性标准规格的芯片：方便实验和扫描适用普通芯片扫描仪应用范围 高质量的蛋白质表达谱分析检测蛋白表达水平的变化(正常vs.病理、正常vs.药物处理）识别候选标志物大多数芯片同时适用于人、大鼠、小鼠
蛋白质作为生物功能的直接执行者，其表达水平的改变能直接地影响着生命体生物功能的发挥。因此，找到关键实验样本中表达水平发生变化的关键蛋白是科学研究的重要切入点。 蛋白表达抗体芯片——充分结合了生物芯片技术高通量优点和抗原/抗体反应敏感性和特异性原理，实现了蛋白质表达水平的精确高通量筛选。相比传统的Western Blot、ELISA、IHC等研究手段，抗体芯片可以一次性对上千种蛋白质的表达量进行定性定量地检测，在提高工作效率的同时，更能节省宝贵的样品。 相比蛋白质谱技术，抗体芯片的抗原/抗体反应原理与WesternBlot等技术更加接近，因此，抗体芯片检测出的差异蛋白重现性比蛋白质谱更高。同时，针对细胞因子等分泌型蛋白，抗体芯片的灵敏度更高。对于血清/血浆样品的检测，抗体的特异性很大程度地避免了高丰度蛋白的影响，检测精度较蛋白质谱要更高。 苏州蚂蚁淘生物医药科技有限公司提供种类丰富的蛋白表达抗体芯片产品及技术服务，既包括蛋白质广谱筛选抗体芯片，也包括特定类型蛋白的表达检测抗体芯片，如：细胞因子抗体芯片、趋化因子抗体芯片、炎症因子抗体芯片、生长因子抗体芯片、血管生成因子抗体芯片、基质金属蛋白酶抗体芯片、脂联因子抗体芯片等。
抗体芯片种类：抗体芯片特点： 50uL的液质样本、200ug的总蛋白量即可完成多指标检测；适用于血清/浆、培养上清及细胞、组织裂解液等多种生物样本；可以有效避免采用传统方法所引入的批次间实验误差；扩大单个样本的信息量并可做不同分析物间的交互分析。 抗体芯片原理： 抗体芯片文献：Izzotti A, et al. Relationships between pulmonary microRNA and proteome profiles, systemic cytogenetic damage and lung tumors in cigarette smoke-exposed mice treated with chemopreventive agents. Carcinogenesis, 2013, 34(10): 2322-2329.Straussman R, et al. Tumour microenvironment elicits innate resistance to RAF inhibitors through HGF secretion. Nature, 2012, 487(7408): 500-504.Bagnis A, et al. Aqueous humor oxidative stress proteomic levels in primary open angle glaucoma. Exp Eye Res, 2012, 103: 55-62.Moon K M, et al. The effect of secretory factors of ADIpose-derived stem cells on human keratinocytes. Int J Mol Sci, 2012, 13(1): 1239-1257.Saccà S C, et al. New proteins as vascular bioMarkers in primary open angle glaucomatous aqueous humor. Invest Ophth Vis Sci, 2012, 53(7): 4242-4253.Yalcin A, et al. Nuclear targeting of 6-phosphofructo-2-kinase (PFKFB3) increases proliferation via cyclindependent kinases. J Bio Chem,2009, 284(36): 24223-24232.Tang Y L, et al. Hypoxic preconditioning enhances the benefit of cardiac Progenitor cell therapy for treatment of myocardial infarction by inducing CXCR4 expression. Circ Res, 2009, 104(10): 1209-1216.
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因为内参有好几种，分子量差别也比较大，更换分子量与检测蛋白差距更大的内参就可以避免这个问题
另外也可以先用一抗孵育显色和检测，再用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体，重新进行内参的抗体孵育显色检测。这样也可以将检测蛋白和内参显色在同一张膜上
【GAPDH】或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ）的英文缩写。GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，且GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的。
【Western Blot】蛋白质印迹法（免疫印迹试验）。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
因为这个实验用到了抗体，抗体是特异识别某一种蛋白的，所以只要能检测到信号，说明样品中有该蛋白存在，如果有相应的对照，也能半定量说明该蛋白的量如何。
一般可与大鼠、小鼠、人、兔均有交叉反应，即可作为上述任一来源蛋白的内参。
Actin分子量为42kD，为肌动蛋白
GAPDH分子量为36kD，为磷酸脱氢酶
要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为WesternBlot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候WesternBlot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定性的。所以，严谨的WesternBlot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时，借助参照体系很容易就可以查出问题所在，而不必抓耳挠腮怨天尤人。良好的参照体系通常包括分子量Marker（用来确定蛋白条带对应的分子量大小），空白载体对照（如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照），已知量标准产物的正对照；另外还有内参。可是由于经费限制或者偷懒的原因，国内的不少人做Western Blot往往省略参照，导致结果出现问题时无法分析结果――即便有结果也可能影响结果的分析。
内参是最容易被忽略的一项。我们知道，要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。所以你需要内参。
内参即是内部参照（InternalControl），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(HousekeepingProteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting 实验中，除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外，还需要进行内参的检测，以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
在国外发表的文章中，Western Blotting实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是，国内仍有不少科研人员在WesternBlotting实验中忽略了内参的使用，将蛋白浓度测定作为规范需相互比较的各种样品间上样量等同的唯一方法。然而各种蛋白质浓度定量方法，都存在局限性，不能完全准确的确定各种样品的准确蛋白浓度。如UV法直接定量，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质，相对于比色法来说，操作简单，但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；且敏感度低，要求蛋白的浓度较高。比色法测定蛋白浓度一般有BCA，Bradford，Lowry等几种方法。BCA法与Lowry法都容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。Bradford 法敏感度最高，且与一系列干扰Lowry，BCA反应的还原剂（如DTT，巯基乙醇）相容。但是对于去污剂依然是敏感的，其最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比性。另外，蛋白质定量以后进行电泳时需要等量上样，此步骤也存在操作误差。在Western blotting实验时使用内参，即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。
在WesternBlotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。
实验结果分析其实很简单：如果样品蛋白量有限，只够进行一次电泳转膜实验时，分别检测样品的内参量和目的蛋白量。将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量，得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量，再用此数值进行样品间的比较和分析，得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果。如果样品量充分，可以先检测内参，观测样品间内参显色条带是否一致，根据差异大小调整各样品的上样量重新进行Western Blotting实验，至内参量一致为止；若内参一致，即可进行不同样品间目的蛋白表达变化分析。这样虽然麻烦一点，但是可以保证结果更有说服力，更可信。毕竟我们的实验是一种严谨的工作。
附：在Western Blotting实验过程中使用内参的方法有：
一、 超级简便的标记内参使用法：只要在二抗孵育时加入HRP标记内参抗体，按照正常操作即可。
二、普通内参：当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量相差不大时，可以先进行目的蛋白的抗体温育显色和检测。然后使用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体，重新进行内参蛋白的抗体温育、显色检测。
三、当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量大小相差比较明显情况下，可以在转膜后预染，根据蛋白质Marker的大小将膜剪为大分子量和小分子量两部分，使内参蛋白与目的蛋白分开。然后两块膜分别与内参蛋白抗体以及目的蛋白抗体进行温育，二抗温育以及显色。
【摘自网络】展开
β-Actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。Beta-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。
β-actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构。在用作Western的参照时，Actin抗体和Tubulin抗体的主要不同之处在于两者所识别蛋白的分子量不同，这样可以选择合适的参照在同一块胶同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。向左转|向右转
