Human CD152 (CTLA-4) is a cell surface glycoprotein expressed at low levels on activated T cells (1). CD152 is a high affinity receptor for the costimulatory molecules CD80 (B7-1) and CD86 (B7-2) and appears to function as a negative regulator of T cell activation (2, 3).
Isotype: Murine IgG1kappa
Immunogen: Stimulated human PBL’s and human CD152 Ig fusion protein
Specificity: Antibody ANC152.2/8H5 reacts with an extracellular epitope of human CTLA-4 expressed on activated T cells. It has been reported to cross react with dog (11, 12), pig, cow and cat CD152.
Functional Application: ANC152.2 blocks binding of CD152 (CTLA-4) Ig fusion protein to its CD80/CD86 receptor, and has been reported to modulate suppressive function of human T Regulatory Cells in Vitro (4). ANC152.2 can bind to intracellular CD152 in fixed permeabolized cells. Purified and F(ab‘)2 forms of this clone have been used to block proliferation and/or IL-10 production by activated T cells in various models (5, 6, 7, 8, 9) .
References:
1) T.L. Walunas, et al, (1994) Immunity 1:405-413.
2) N.J. Karandikar, et al, (1996) J Exp Med 184: 783-788.
3) A. Kitani, et al, (2000) J Immunol 165: 691-702.
4) Y. Zheng, D.M. Sansom, et al, (2004)
5) S Vendetti, M.T. DeMagistris, et al. (2008) Immunology Letters 115(1):59-69.
6) F J Ward, R N Barker, et al. (2002) Blood 1004529-4536.
7) F J Ward, R N Barker, et al. (2008) Blood 111: 680-687.
8) Wenwei Tu, D BLewis, et al. (2008) Blood 112: 2554-2562.
9. I Bellinghausen, J Saloga, et al (2003) J Allergy Clin Immunol 111(4): 862-868. PMID: 12704370
10.Yang, N., Li, J., Yang, Q. et al. Arch Virol (2018). https://doi.org/10.1007/s00705-018-3735-8
11. Tagawa M, S Takagi, et al. (Feb 2016) PLoS One 11(2): e0150030.https://doi.org/10.1371/journal.pone.0150030
12. Tagawa M, K Miyahara, et al. (July 2018) PLoS ONE 13(7): e0201222.https://doi.org/10.1371/journal. pone.0201222.
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当然跟物种有关。
β-Actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。Beta-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。
β-actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构。在用作Western的参照时，Actin抗体和Tubulin抗体的主要不同之处在于两者所识别蛋白的分子量不同，这样可以选择合适的参照在同一块胶同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。向左转|向右转
虽然没有具体用过检测这个抗原的抗体，但是如果希望抗体特异性好点，能检测丰度低的蛋白，还是选Abcam吧，Santa有时候全凭人品了，内参抗体什么的还能凑活，其他的比较勉强。
因为这个实验用到了抗体，抗体是特异识别某一种蛋白的，所以只要能检测到信号，说明样品中有该蛋白存在，如果有相应的对照，也能半定量说明该蛋白的量如何。
所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。
western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。
western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化
我觉得封闭这一步时间长短多少并不能减少背景…背景过深多半还是抗体浓度过大…不管一抗还是二抗过大都会使背景加深…一抗的浓度不一定是条带清晰就是最佳了…联系进一步优化一下
这个主要还是抗体的问题，WB最主要的还是要选择一个特异性较好的抗体，抗体是整个实验的重中之重
