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Ancell/anti-CD18/100 g/167-580
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Ancell/anti-CD18/100 g/167-580
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167-580
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Human CD18 (beta integrin) forms a heterodimer with either alpha L, alpha M, or alpha X integrins (CD11a, b or c). CD11/CD18 heterodimeric molecules are involved with cell/cell and cell/extracellular adhesion in immune and inflammatory responses.

Isotype: Murine IgG2a

Immunogen: Human peripheral blood monocytes

Specificity: Antibody IB4 recognizes the beta 2 integrin subunit (CD18) adhesion molecule of about 95 kd (1, 6).

Functional Application: Antibody IB4 blocks binding of ICAM-1 and ICAM-3 to LFA-1 (2, 5).

References:

1. S.D. Wright, et al, (1983) Proc Natl Acad Sci USA 80: 5699-5703.

2. R.C. Landis, et al, (1994) J Cell Biol 126: 529-537.

3. M. Kaneko, et al, (1995) J Immunol 155: 2631-2641.

4. A. Mazzone & G. Ricevuti, (1995) Haematologica 80: 161-175.

5. M.E. Berman, et al, (1996) J Immunol 156: 1515-1524.

6. K Welzenbach, G Weitz-Scmidt, et al (2002) J Biol Chem 277(12): 10590 - 10598. PMID: 11781316

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内参是内在参照,在各组织和细胞中表达相对恒定,在检测某些功能蛋白的表达水平变化时用它做参照物,可以校正蛋白定量、上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。 查看更多>
Western Blot内参抗体选择原则 内参抗体 种类很多,比如beta-actin、beta-tubunlin、GAPDH、α-tubunlin等,那么针对自己的实验 查看更多>
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product information Background Actin is a highly conserved protein and an essential component of cell cytoskeleton and plays an important role in cytoplasmic streaming, cell shape determination, cell divisi 查看更多>
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本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。嘿嘿。可以这么说吧。比如什么内参之类的,或者是表达丰度高的蛋白其实。具体到目的蛋白了就各见春秋了。
内个,个人觉得比较价格还是很有说服力的,一分价钱一分货。
虽然没有具体用过检测这个抗原的抗体,但是如果希望抗体特异性好点,能检测丰度低的蛋白,还是选Abcam吧,Santa有时候全凭人品了,内参抗体什么的还能凑活,其他的比较勉强。
最近准备做WB,但是对抗体选择还是很困惑,作为生手我担心用单克隆抗体做不出条带(看网上写的多克隆的效价高),但是发现要买的一抗abcam 只有单克隆,那我的内参GAPDH 也要买单克隆抗体么? 谢谢!如果买单克隆的内参抗体国内的杭州至贤的产品 有用过的么? 谢谢!
客户订错了该产品,有需要得PM我。
科研思路和方法作业123
若情初心2021-08-06
请教大鼠MCAO模型检测ZO-1免疫组化所用抗体,内参以及引物设计?
如何选择内参抗体? 123
五味子1012021-08-11
我要做两个指标,检测这两个指标分别在大鼠和人肝癌细胞中的表达。
其中一个指标的一抗来源于兔,另一个一抗来源于鼠。前几天跟试剂公司联系购买内参抗体时,他们说内参抗体是根据目的蛋白的一抗来定的,要我买两个内参抗体和相应的二抗,这让我感到很纳闷。我想知道内参的选择是根据什么原则?
我觉得内参只是一个参照,内参抗体跟目的蛋白的一抗有直接联系吗?有没有可以通用于人肝癌细胞和大鼠肝癌细胞的内参抗体,能否帮忙推荐一个,谢谢.
在图书馆也没有找到这方面很详细和确切的论述,急切期盼您的指导!!!谢谢!!!
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【新手福利】初识 外泌体 七 123
科研大人xiu2021-08-05
有用过Abbkine抗体帮忙回答一下哦

小鼠肝脏组织内参用小鼠来源的一抗二抗可以用山羊抗大鼠抗体吗?

如果是大鼠肝脏组织,可以用小鼠来源的一抗吗?

大鼠小鼠抗原抗体有区别吗?

求教,谢谢!

很正常。内参有证明蛋白样品没问题。没有目的带原因很多。1.目的蛋白是否表达量很低,因为内参表达是很高的。2.抗体的选择是否有问题,有没有阳性对照?? 是一点都没有?还是能看到一点点?
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RT-PCRWestern blotELISA三者区别 PCR转录水平检测目基,非蛋白,转录翻译复杂程,基表达量与蛋白表达量定相关. WB能半定量,检测细胞膜蛋白,点ELISA做 ELISA用定量检测蛋白,说观察同浓度刺激物目蛋白影响 基翻译蛋白质, PCR检测基表达量绝定量相定量基翻译表达蛋白质复杂程能现基量蛋白质少或者相反甚至其情况所PCR基层面DNA或mRNA进行检测 Western Blot目前种结合内参蛋白质进行半定量Elisa定量检测某些蛋白、激素等 、目 虽两者都通抗原抗体反应蛋白质进行检测WB主要定性Elisa定性定量 WB所检测般抗原Elisa抗原抗体都检测 WB所检测抗原知道其量或否聚体、降解产物等句WB确定所用抗体与种蛋白起作用;Elisa能力锅端 二、模式 WB(抗原-抗体-二抗酶)模式进行检测;Elisa模式种(抗原-抗体-二抗酶)、(抗原-抗体-抗原酶)、(抗抗体-抗体-抗原酶)、(抗体-抗原-抗体酶)、(抗抗体-抗体-抗原-抗体酶)等等 三、抗体适用性 WB所适用抗般线性位点ELISA线性或构象型抗体都使用另意义讲WB做抗体线性位点构象型位点补充判定Elisa行 四、灵敏度 般Elisa灵敏度要远高于WB般酶标记物使用浓度或待检品稀释度看 五、操作性 WB处理量块胶版10-20品Elisa块96孔板处理96本设置复孔、照、梯度等提高检测信度 WB操作见非特异性条带膜本底差显色等等缺点Elisa表现要 六、商品化度 WB管都要自先做电泳Elisa熟商品化试剂盒要怕花钱检测要便快展开
Western Blot为什么必须要用内参 123
舆论小雪95筧2017-11-05
Western Blot为什么必须要用内参

要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。因为WesternBlot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然,顺利的时候WesternBlot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子,抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确,而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物,确实是有一定的不确定性的。所以,严谨的WesternBlot实验设计中要求有良好的参照体系,对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时,借助参照体系很容易就可以查出问题所在,而不必抓耳挠腮怨天尤人。良好的参照体系通常包括分子量Marker(用来确定蛋白条带对应的分子量大小),空白载体对照(如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照),已知量标准产物的正对照;另外还有内参。可是由于经费限制或者偷懒的原因,国内的不少人做Western Blot往往省略参照,导致结果出现问题时无法分析结果――即便有结果也可能影响结果的分析。

内参是最容易被忽略的一项。我们知道,要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础。特别表达量不高时,上样量的差别就很可能影响结果的分析。所以你需要内参。

内参即是内部参照(InternalControl),对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(HousekeepingProteins),它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting 实验中,除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外,还需要进行内参的检测,以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。

在国外发表的文章中,Western Blotting实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是,国内仍有不少科研人员在WesternBlotting实验中忽略了内参的使用,将蛋白浓度测定作为规范需相互比较的各种样品间上样量等同的唯一方法。然而各种蛋白质浓度定量方法,都存在局限性,不能完全准确的确定各种样品的准确蛋白浓度。如UV法直接定量,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质,相对于比色法来说,操作简单,但是容易受到平行物质的干扰,如DNA的干扰;且敏感度低,要求蛋白的浓度较高。比色法测定蛋白浓度一般有BCA,Bradford,Lowry等几种方法。BCA法与Lowry法都容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。Bradford 法敏感度最高,且与一系列干扰Lowry,BCA反应的还原剂(如DTT,巯基乙醇)相容。但是对于去污剂依然是敏感的,其最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大,无可比性。另外,蛋白质定量以后进行电泳时需要等量上样,此步骤也存在操作误差。在Western blotting实验时使用内参,即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。

在WesternBlotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参,这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达,由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定,借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差,这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照,检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。

实验结果分析其实很简单:如果样品蛋白量有限,只够进行一次电泳转膜实验时,分别检测样品的内参量和目的蛋白量。将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量,得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量,再用此数值进行样品间的比较和分析,得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果。如果样品量充分,可以先检测内参,观测样品间内参显色条带是否一致,根据差异大小调整各样品的上样量重新进行Western Blotting实验,至内参量一致为止;若内参一致,即可进行不同样品间目的蛋白表达变化分析。这样虽然麻烦一点,但是可以保证结果更有说服力,更可信。毕竟我们的实验是一种严谨的工作。

附:在Western Blotting实验过程中使用内参的方法有:

一、 超级简便的标记内参使用法:只要在二抗孵育时加入HRP标记内参抗体,按照正常操作即可。

二、普通内参:当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量相差不大时,可以先进行目的蛋白的抗体温育显色和检测。然后使用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体,重新进行内参蛋白的抗体温育、显色检测。

三、当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量大小相差比较明显情况下,可以在转膜后预染,根据蛋白质Marker的大小将膜剪为大分子量和小分子量两部分,使内参蛋白与目的蛋白分开。然后两块膜分别与内参蛋白抗体以及目的蛋白抗体进行温育,二抗温育以及显色。

【摘自网络】展开
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