PTEN (Phospho-Ser370) AntibodyPDF
Catalog Number:
E011062-2Amount:
100μg/100μlForm of Antibody:
Rabbit IgG in phosphate buffered saline (without Mg2+ and Ca2+), pH 7.4, 150mM NaCl, 0.02% sodium azide and 50% glycerol.Storage/Stability:
Store at -20℃/1 yearImmunogen:
The antiserum was produced against synthesized phosphopeptide derived from human PTEN around the phosphorylation site of serine 370 (D-V-SP-D-N).Purification:
The antibody was affinity-purified from rabbit antiserum by affinity-chromatography using epitope-specific phosphopeptide. The antibody against non-phosphopeptide was removed by chromatogramphy using non-phosphopeptide corresponding to the phosphorylation site.Specificity/Sensitivity:
PTEN (phospho-Ser370) antibody detects endogenous levels of PTEN only when phosphorylated at serine 370.Reactivity:
Human, Mouse, RatApplications:
WB: 1:500~1:1000 IHC: 1:50~1:100Swiss-Prot No.:
P60484References:
Al-Khouri AM, et al. (2005). J Biol Chem.280 (42):35195-35202.Miller SJ, et al. (2002). FEBS Lett. 528(1-3): 145-153.Torres J, et al. (2001). J Biol Chem.276 (2): 993-998.Vazquez F, et al. (2000). Mol Cell Biol.20 (14): 5010-5018.
P-Peptide - +Immunohistochemical analysis of paraffin- embedded human breast carcinoma tissue using PTEN (phospho-Ser370) antibody (E011062).

Western blot analysis of extracts from HeLa cells using PTEN (phospho-Ser370) antibody (E011062).
Price:
225$Research Area:
Autophagy antibody Cancer Cardiovascular Cell Biology Epigenetics & Nuclear Signaling Developmental Biologys Immunology Drug Discovery Products Metabolism Neuroscience Signal Transduction Stem Cells

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因为这个实验用到了抗体,抗体是特异识别某一种蛋白的,所以只要能检测到信号,说明样品中有该蛋白存在,如果有相应的对照,也能半定量说明该蛋白的量如何。
一般可与大鼠、小鼠、人、兔均有交叉反应,即可作为上述任一来源蛋白的内参。
Actin分子量为42kD,为肌动蛋白
GAPDH分子量为36kD,为磷酸脱氢酶
【GAPDH】或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶( glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase )的英文缩写。GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,且GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的。
【Western Blot】蛋白质印迹法(免疫印迹试验)。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
以上信息来自。
一.样本种属来源:
首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。
1、哺乳动物的组织或者细胞样本,通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,K atpase等。
2、植物来源实验样本,则可以选择plantactin、Rubisco等。
3、其他来源样本研究较少,所以就应该参照文献报导,选择合适的蛋白作为内参。
二.目的蛋白分子量:
选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。比如目的蛋白分子量为45KD,此时不适宜选择β-actin作为内参,可以考虑选择GAPDH或者β-tubulin作为内参。
三.目的蛋白表达部位:
就一般的蛋白检测来说,β-actin、β-Tubulin抗体等就可以了,而针对于核蛋白的定量,特别是样本蛋白就是核蛋白时,选择恰当的核蛋白内参则更能体现内部参照的价值。常用的核内参抗体有Lamin A、Lamin B、Histone H3,除此之外,其它常见的核蛋白内参还有PCNA、K70、K80等,在一些文献报道中,Erk2、TATA binding protein(TBP)以及c-Jun、c-Fos等都有使用。而对于膜蛋白检测,常用的内参抗体为Na,K ATPase。对于线粒体蛋白的检测,常用VDAC1和COX IV作为内参抗体。
以上几条原则只是针对通常情况,但是需要注意的问题是——内参的选择需要考虑实际的试验环境,比如某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,不适合做内参。比如在涉及细胞增殖相关试验中,c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参;而在凋亡实验时,TBP、Lamin等也不适合作为内参。因此设计实验方案的时候应该考虑这些因素并查询相应文献,在实验过程中也应该注意如果内参表达出现异常,应考虑这方面因素。

