【求助】急急急急急!求高手相助,关于使用His标签蛋白纯化抗体!
2021-08-05
问题描述:
楼主新手,最近在做一个蛋白的抗体,表达了目的蛋白的GST融合蛋白送去免疫兔子,现在收到了返回的抗体,想用His标签的融合蛋白对抗体进行纯化,我只知道Ni柱纯化His标签蛋白的方法,最终是要用咪唑洗下融合蛋白,但是现在想把His标签与Ni柱之间的结合固定,从而纯化洗脱抗体,但是不知道His标签与Ni柱固定的的方法...!!!老板发飙了,小女子**大神指点啊55555
*请输入10-500个字符
已帮助
0人
0人
蜜兜
用户
求好心人指点 啊!!!!!!!!55555555555
已帮助
0人
0人
蜜兜
用户
TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
已帮助
0人
0人
loud2008
用户
展开引用蜜兜楼主新手,最近在做一个蛋白的抗体,表达了目的蛋白的GST融合蛋白送去免疫兔子,现在收到了返回的抗体,想用His标签的融合蛋白对抗体进行纯化,我只知道Ni柱纯化His标签蛋白的方法,最终是要用咪唑洗下融合蛋白,但是现在想把His标签与Ni柱之间的结合固定,从而纯化洗脱抗体,但是不知道His标签与Ni柱固定的的方法...!!!老板发飙了,小女子**大神指点啊55555......好复杂啊,我硬是没看明白!!GST-Ag免疫,得到的多抗是兔抗-GST-Ag,然后HIS-Ag去纯化兔抗-GST-Ag,你想把HIS-Ag挂到Ni柱上,再挂兔抗-GST-Ag,得到兔抗--Ag,排除兔抗-GST,对吗?何必这样设计实验呢?而且行不通啊
已帮助
0人
0人
蜜兜
用户
展开引用loud2008好复杂啊,我硬是没看明白!!GST-Ag免疫,得到的多抗是兔抗-GST-Ag,然后HIS-Ag去纯化兔抗-GST-Ag,你想把HIS-Ag挂到Ni柱上,再挂兔抗-GST-Ag,得到兔抗--Ag,排除兔抗-GST,对吗?何必这样设计实验呢?而且行不通啊......是的是的,就是这个意思,我的确没做过抗体相关的东西,在实验室前辈指导下做的,大体的意思就是您说的那个可以直接出去抗GST,因为用GST标签纯化的话要先把抗体过一遍GST蛋白,去掉抗-GST,再拿这个流穿过GST-抗原融合蛋白.....不知道您是怎么做的啊,而且这个为什么不可能啊?是Ni没法和His交联吗?
已帮助
0人
0人
reyesa
用户
蜜兜是的是的,就是这个意思,我的确没做过抗体相关的东西,在实验室前辈指导下做的,大体的意思就是您说的那个可以直接出去抗GST,因为用GST标签纯化的话要先把抗体过一遍GST蛋白,去掉抗-GST,再拿这个流穿过GST-抗原融合蛋白.....不知道您是怎么做的啊,而且这个为什么不可能啊?是Ni没法和His交联吗?纯化抗体常用的是用溴化氢活化的柱子和你的蛋白交联再用来纯化抗体。
已帮助
0人
0人
蜜兜
用户
reyesa纯化抗体常用的是用溴化氢活化的柱子和你的蛋白交联再用来纯化抗体。真是非常感谢你,还想请教这个柱子是固定蛋白的原理是什么啊?跟His标签有关系吗?
已帮助
0人
0人
reyesa
用户
蜜兜真是非常感谢你,还想请教这个柱子是固定蛋白的原理是什么啊?跟His标签有关系吗?你想做的是经典的抗原亲和纯化。就是用溴化氢的活化柱直接和你的蛋白化学交联。跟his没有关系的
已帮助
0人
0人
蜜兜
用户
reyesa你想做的是经典的抗原亲和纯化。就是用溴化氢的活化柱直接和你的蛋白化学交联。跟his没有关系的明白了,reyesa,谢谢你的耐心解释,非常感激:)
已帮助
0人
0人
loud2008
用户
溴化氢的活化Sephrose4B连接HIS-Ag,与你得到的多抗结合,再洗脱,得到目的抗体。或者溴化氢的活化Sephrose4B连接GST,与你的多抗结合,收集流穿,得到目的抗体。这样的话,实验很难,为什么不在第一步,免疫的时候直接去掉GST啊?或者验证一下,你得到的多抗不跟GST反应,不就可以了?最好,做单克隆抗体!!老板发飙不应该啊,得补课啊
已帮助
0人
0人
蜜兜
用户
展开引用loud2008溴化氢的活化Sephrose4B连接HIS-Ag,与你得到的多抗结合,再洗脱,得到目的抗体。或者溴化氢的活化Sephrose4B连接GST,与你的多抗结合,收集流穿,得到目的抗体。这样的话,实验很难,为什么不在第一步,免疫的时候直接去掉GST啊?或者验证一下,你得到的多抗不跟GST反应,不就可以了?最好,做单克隆抗体!!老板发飙不应该啊,得补课啊......嗯嗯,谢谢你的指点,表达的时候是GST融合蛋白,用GSTbeads纯化的,你说的去掉GST是怎么操作呀?
▍
相关分类
▍
相关文章
拍下自动打5折 肌肤食品skfood专柜百香果营养紧致洁面乳 ...
完全不会看 1234和abc各代表什么_
BEND细胞培养(BEND血清、BEND培养基)公司动态通派(上海)生物...
Larodan 68810060 上海惠诚生物性能参数,报价/价格 ...
鏻离子液体和由其制成的涂层.pdf 专利查询网 ...
apci和esi电离源找同种物质的质谱条件时一样吗_
人CYP2D6酶联免疫分析 酶学实验
His标签单克隆抗体产品金斯瑞生物
构建好了细胞稳转株,一般都做哪些实验,最好时间比较短的
联川生物microRNA技术讲座——内分泌学miRNA研究最新进展和策略生活...
Myc 标签抗体 -
eenzyme代理eenzyme上海代理importbio官网
▍
相关问答