Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统，广泛应用于Westernblotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。Flag标签是一个与重组蛋白相融合的由8个亲水氨基酸（Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）组成的多肽片断。FLAG标签只有8个氨基酸组成，因此它不会占据其他表位与结合域，避免导致融合蛋白的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点，FLAG标签倾向于定位在融合蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。
由于Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，这一系统已用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳细胞。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。
有两种商品化的抗体MI和M2，可识别FLAG标记物。Mi抗体的结合要求表位是氨基末端，因而仅适用于将标记物连接到蛋白的氨基末端。二价阳离子(最好为Ca2+)可增强MI抗体与FLAG标记物的结合，因此金属螯合剂，如EDTA可引起其相互作用完全或部分破坏，可在很温和的条件下纯化。
M2抗体的存在使该系统显示出更大的应用价值，因为FLAG无论是处于蛋白分子中间或羧基末端，该抗体可识别相同的FLAG表位。M2对FLAG表位的识别不需要二价阳离子的存在，并且可以通过游离的多肽竞争性地将FLAG标记蛋白从M2分子中温和洗脱下来。
多种FLAG标记蛋白可保留全部的生化活性(如转录因子、生长因子和酶)，这些标记物亦广泛应用于细胞染色、免疫印迹和免疫沉淀试验中。由于已有各种载体和检测试剂出售，包括抗体亲和树脂和直接标记抗体的商品，使其成为人们常选用的系统。
由于对抗-FLAG抗体的特异性进行了更详尽的研究，使得可以采用其他替代序列(Slootstraetal．1997)和更短部分(Knappik和Pluckthunl994)作为标记物。抗-FLAG抗体产生的本底一般非常低，但M2抗体至少可与一种细胞蛋白发生交叉反应(Schafer和Braunl995)。
Sigma F1804/F3165ANTI-FLAG®M2antibody（全球flag抗体综合引用率第一）
产品描述
FrequentlyAskedQuestions
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FeaturesandBenefits
抗体生物保证
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Immunogen
FLAG;peptidesequenceDYKDDDDK
包装
5mginpolybottle
PreparationNote
Dilutetheantibodysolutionfrom0.5-10ug/mLinTrisBufferedSaline,pH8.0,with3%nonfatmilk
Application
Antibodyisrecommendedforuseinimmunoblotting,immunoprecipitation,immunocytochemistry,immunofluorescence,ELISA,electronmicroscopy,flowcytometryandsupershiftassays.
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Generaldescription
AntiFlagM2antibodyisusedforthedetectionofFlagfusionproteins.ThismonoclonalantibodyisproducedinmouseandrecognizestheFLAGsequenceattheN-terminus,MetN-terminus,andC-terminus.TheantibodyisalsoabletorecognizeFLAGataninternalsite.M2,unlikeM1antibodyisnotCalciumdependent.
F1804 isanaffinitypurified,FLAGM2antibody,increasingsensitivityinmostapplications.
法律信息
ANTI-FLAGisaregisteredtrademarkofSigma-AldrichCo.LLC
FLAGisaregisteredtrademarkofSigma-AldrichCo.LLC
