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Cell Technology/Fluoro Lactate/100/FLLACT100
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- Description
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Introduction
Lactate is an intermediate product of carbohydrate metabolism. Of the two forms of Lactate, D- and L-, the L- lactate is predominant isomer found in biological systems. L-lactate is formed during the anaerobic glycolysis by conversion of pyruvate to L-lactate by lactate dehydrogenase. Lactate level is an indicator for tissue oxygen demand and utilization. Abnormally high lactate levels are associated with diseases such as diabetes and lactate acidosis. Cell Technology’s Fluoro Lactate assay is a lactate oxidase-based method for detecting L-lactate in biological samples such as serum, plasma, blood, urine, and tissue extract.
In the assay, lactate oxidase (LOX) catalyzes the oxidation of L-lactate to pyruvate, along with the concomitant reduction of hydrogen peroxide (H2O2). The detection utilizes a non-fluorescent detection reagent, which is oxidized in the presence of horse radish peroxidase (HRP) and LOX to produce its fluorescent analog.
Cell Technology’s Fluoro Lactate assay provides a reliable, sensitive fluorimetric method for the quantification of lactate in biological samples such as serum, plasma, urine, and tissue extracts.
Figure.1 Standard curve of Lactate. 50 µl serial dilutions of lactate (Starting dose 40 µM in tubes) were added to the wells of 96-well fluorescent plate. 10 µL LOX was added to each well and incubated plate at 37ºC for 10 min. 50 µL of detection reagent was added and plate was read at Ex/Em=530/590 nm.
Table 1. An example showing serum L-lactate level. 50 μl diluted serum was added to the wells of 96 –well fluorescent plate. 10 μl LOX was added to each well and incubated plate at 37ºC for 10 min. 50 μl of detection reagent was added and plate was read at Ex/Em=530/590 nm.
Table 2. Spike and recovery experiments were performed to estimate % recovery of lactate. Serum (1:100) was spiked with lactate with the concentrations mentioned in the table above. The samples were processed as described in the protocol.
Table 3. Spike and recovery experiments were performed to estimate % recovery of lactate. Serum (1:100), heat-inactivated @ 56ºC, 30 min) was spiked with lactate with the concentrations mentioned in the table above. The samples were processed as described in the protocol.
Key Benefits
- Highly effective and stable fluorescent assay for L-lactate.
- Simple and fast assay-add the reagent directly to your experimental samples. Plate can be incubated and read in 15-30 min.
- Works for serum, plasma and tissue extract.
Additional information
| Kit Size | 100 |
|---|
| Document Title |
| Fluoro Lactate Protocol |
| msds.FluoroLactate |
| Reference |
| Hasegawa H., Fukushima T., Lee J., Tsukamoto K., Moriya K., Ono Y. and Imai K. (2003) Determination of serum D -lactic and L -lactic acids in normal subjects and diabetic patients by column-switching HPLC with pre-column fluorescence derivatization. Anal Bioanal Chem 377:886-891. |
| Kondoh Y., Kawase, M. and Ohmori S. (1992) Concentration of D-Lactate and its metabolic intermediates in liver, blood, and muscle of diabetic and starved rats. Res Exp Med 192: 407-414. |
| Lin, C. Y., Chen S. H., Kou G. H., Kuo C. M. (1999) An Enzymatic Microassay for Lactate. Concentration in Blood and Hemolymph. Acta Zoologica Taiwanica 10: 91-101. |
| McLellan, A. C., Phillips, S. A., and Thornally, P. J. (1992) Flourimetric assay of D-lactate. Anal Biochem 206: 12-16. |
| Scheijen J.L., Hanssen N. M., van de Waarenburg M. P., Jonkers D. M., Stehouwer C. D., Schalkwijk C. G. (2012) L(+) and D(-) lactate are increased in plasma and urine samples of type 2 diabetes as measured by a simultaneous quantification of L(+) and D(-) lactate by reversed-phase liquid chromatography tandem mass spectrometry. Exp Diabetes Res. 2012(doi:10.1155/2012/234812). |
| White R., Yaeger D., and Stavrianeas S. Determination of Blood Lactate Concentration: Reliability and Validity of a Lactate Oxidase-Based Method (2009) Int. J. Exerc Sci 2: 83-93. |
| Part# | Reagent | Temperature |
| Part # 7022 | Lactate Standard 4mM, 500µl | 2-8C |
| Part # 6004 | Horseradish Peroxidase, 18.9 Units | 2-8C |
| Part # 3011 | 5X Reaction Buffer, 25 mL | 2-8C |
| Part # 4026 | Detection Reagent, 1 Vial | -20C |
| Part # 6025 | Reaction Enzyme Mix, 1 Vial - 1.1mL | -20C |
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2021-08-27
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2021-09-07
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2021-08-16
[摘要]学术不端行为严重影响科技事业的健康发展,已经成为学术界关注的问题之一,高校科技期刊应建立有效的学术不端行为防范机制.编辑要结合编辑实践对高校期刊怎样防范学术不端行为开展系统的研究,提出提高科技期刊编辑的综合素质/充分利用学术不端行为检测系统/与审稿专家交流加大学术不端行为处理的可信度/提升作者的学术规范意识/建立学术不端行为惩罚机制等具体防范学术不端行为的途径和方式,以使高校学术期刊在改善学术研究氛围/净化校园学术环境/传播先... 查看更多
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2021-08-23
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2021-07-14
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好... 查看更多
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2021-09-14
上海研生实业有限公司所提供的96T/48大鼠前列腺酸性磷酸酶（PAP）ELISA试剂盒品牌质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息！ 查看更多
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2018-02-12
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2018-03-08
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2018-06-30
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2021-08-17
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辣根过氧化物酶只能应用于ELISA,对不?123
佛心zmh2018-01-09
辣根过氧化物酶用于ELISA的标记用酶RP是一种分子量达44000的糖蛋白，由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成，中性糖和氨基糖约占18％。每一个HRP分子中含一个氯化血红素IX作辅基，该辅基在403nm波长处有最大吸收峰，而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有最大吸收。HRP在403nm的OD值与275nm的OD值之比，也就是所谓的RZ（ReinheitsZahl）值。RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量，并非表示HRP制剂的真正纯度，而且RZ值高的HRP制剂，并不意味着酶活性也高。但可以一纯酶溶液在10mm光径403nm波长下的吸光度来计算酶浓度[1％（W／V）酶溶液吸光度为22．5，浓度为227umol／L]。纯HRP干燥贮存于一200C可保持稳定，使用1．36mol／L甘油、10mmol／L磷酸钠、30umol／L牛血清白蛋白和20umol／L细胞色素C（pH7．4）溶液作为基质冷冻保存，可使酶结合物稳定数年。HRP对热及有机溶剂的作用比较稳定，用甲苯与石蜡切片处理或用纯乙醇或lo％甲醛水溶液固定做冷冻切片，均不能使其活性改变。氰化物或硫化物在10-5～10-6mol／L浓度时具有可逆性地抑制HRP的作用；氟化物、叠氮化合物或羟胺仅在高于10-3mol／L浓度时抑制HRP；HRP还可被羟甲基过氧化氢不可逆地抑制。强酸也是HRP的强烈的抑制剂。因此，在酶免疫测定常选用上述的某些化合物如氟化钠、叠氮钠和强酸等作为酶反应的终止剂。此外，在配制酶免疫测定的稀释缓冲液时，为防止酶失活，应避免使用叠氮钠作防腐剂。HRP的同工酶主要可分为三种类型：①含糖量高的酸性同工酶。②等电点接近于中性（或微碱）的含糖量相对较低的同工酶。③含糖量低的碱性（PI>11）同工酶。酶免疫试验中所使用的HRP，以PI为8．7～9．0的所谓“C”同工酶为主要组成成分，其他同工酶的活性则很低。“C”同工酶的共价结构由2个密切接近的区域组成，血红素基团则位于其间而成夹心结构，糖链以8个不同的部位结合于多肽。天然的酶所带的纯电荷极少；无游离的。—氨基，仅有2个可测出的组氨酸，6个赖氨酸似乎全被糖链外壳所遮盖。因此，HRP一般仅有1～2个可用于耦联的氨基。根据HRP的催化特性，ELISA中一般使用过氧化氢（H2O2）作为HRP底物之一，在供氢体（即色原底物）存在时，HRP与H2O2的反应迅速而又专一。由图4—1可见，HRP被H2O2二价地氧化形成复合物I，而复合物I又可与氢供体的二步连续的单价相互作用而还原至起始状态。复合物Ⅱ是被氧化的带一个电子的中间产物，当H2O2：过量，由于复合物Ⅲ或Ⅳ的形成，酶活性受抑制。30％的H2O2并不稳定。由于H2O2既为HRP的底物，也为其抑制剂，因而ELISA要想得到满意的测定结果，H2O2必须限定在一定的浓度范围内，终浓度通常为2～6mmol／L。然而在实际研究工作中，一般很少注意这一点。大多数研究者所使用的H2O2的浓度常较理想反应所需的量大2～4倍。吸附于固相的HRP较游离的HRP更易受过量H2O2的抑制。如果30％H：O：贮存液浓度经测定证实确为30％，则稀释10000—12000倍常是较为理想的底物。H2O2的摩尔消光系数为10mm光径240nm波长下为43．6，因此，可通过这种方式来检测H2O2工作溶液的浓度。固相ELISA中，当温度高于20~C时，HRP活性常较低，在底物溶液中加入非离子去垢剂聚山梨醇—20或TritonX-100可延迟HRP的失活，且可使反应温度加大，但非离子去垢剂的这种酶活性保护效应依氢供体的不同而有差异。如以2，2’—联氮—双—[3—乙基苯并噻唑啉]—6—磺酸（ABTS）为氢供体，则只能保护20％的酶活性，而以邻联茴香胺（ODA）为氢供体时，酶活性的保护提高至90％。HRP之所以是迄今为止在ELISA中应用最为广泛的标记用酶，主要是因为其一方面易于提取，价格相对低廉；另一方面性质稳定，耐热及有机溶剂的作用，与抗原或抗体耦联后，活陛很少受损失。
慢病毒介导的异柠檬酸脱氢酶1基因R132H突变过表达抑制脑胶质瘤LN...123
游侠VY59L2021-07-25
答案A
试题分析：酶是一种生物催化剂，在催化反应中本身不发生变化；此非酶的特性；B项体现了酶的作用条件较温和的特性；C项体现了酶的专一性；D项体现了酶的高效性；故选A。
考点：本题考查的是酶的特性。
点评：对于此类试题，学生应掌握酶的特性。
试题分析：酶是一种生物催化剂，在催化反应中本身不发生变化；此非酶的特性；B项体现了酶的作用条件较温和的特性；C项体现了酶的专一性；D项体现了酶的高效性；故选A。
考点：本题考查的是酶的特性。
点评：对于此类试题，学生应掌握酶的特性。
苯胺盐酸盐的结构简式 123
哊歞喞12021-07-29
DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一种借助辣根过氧化物酶(HRP)，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色的试剂盒。DAB，即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride，是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下，DAB会产生棕色沉淀。该棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在DAB显色后，还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。本试剂盒可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可以用于Western等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。
过氧化氢酶和过氧化物酶的作用 实验方法123
命运军团01392018-01-21
mRNA是用地高辛标记的，用不同的方法可以检测地高辛 即可以用碱性磷酸酶标记的地高辛标抗体和 地高辛记的反应 也可以用辣根过氧化物酶标记的地高辛抗体和 地高辛记的反应
美国原装进口Calumet Penreco食品级白油美国网123
小有意1072018-01-09
DAB辣根氧化物酶显色试剂盒(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)种借助辣根氧化物酶(HRP)用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色试剂盒DAB即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride辣根氧化物酶用底物辣根氧化物酶催化DAB产棕色沉淀该棕色沉淀溶于水乙醇DAB显色使用溶于乙醇染料进行续染色本试剂盒用于细胞或组织免疫组化或原位杂交结合辣根氧化物酶显色用于Western等结合辣根氧化物酶膜显色检测同用于细胞或组织内源性辣根氧化物酶显色
0.5%的辣根过氧化物酶磷酸缓冲溶液怎么配制?磷酸缓冲溶液已经配...123
柳芽蓝月2018-01-21
磷酸缓冲溶液已经配好了，是不是在里面加辣根过氧化物酶就行了，加多少？最好说明出处，或者简单说一下怎么算的
过氧化物酶活性测定方法123
wincol852021-07-28
请把邮箱告诉我
辣根过氧化物酶的需求大吗？_问答详情_蚂蚁淘,【正品极速】生物医...123
小鑫5882021-07-21
属于糖蛋白类物质，我们实验中有用，有的频率高，但量不大
Jenna是什么意思、发音和在线翻译 英语单词大全 911查询123
土豆亲卫队7972018-01-21
抗甲状腺过氧化物酶抗体是诊断甲状腺自身免疫性疾病的首选指标，由于你没有提供你检查该项目的参考值，如果没有高于参考值，那么是正常的；如果高于参考值，那么就是升高，单一抗甲状腺过氧化物酶抗体升高是不能判断是什么疾病，需要进一步检查抗甲状腺球蛋白抗体（TGAb）、抗甲状腺微粒体抗体（TMAb）、TRAB、甲状腺彩超、甲状腺功能等。
1.若都为正常，那么并未有太大问题，只要定期复查就可以了。
2.如果TGAb、TMAb、甲状腺功能均高，那么就是桥本氏甲状腺炎并甲亢，需要抗甲亢治疗。
3.如果TGAb、TMAb高，甲状腺功能下降，那么就是桥本氏甲状腺炎并甲减，需要进行甲减治疗。
4.如果TGAb、TMAb高，甲状腺功能正常，那么就是桥本氏甲状腺炎，无需特殊治疗，只要定期复查甲状腺功能就可能以了，不过这种情况有可能以后演变成甲减或者甲亢。
1.若都为正常，那么并未有太大问题，只要定期复查就可以了。
2.如果TGAb、TMAb、甲状腺功能均高，那么就是桥本氏甲状腺炎并甲亢，需要抗甲亢治疗。
3.如果TGAb、TMAb高，甲状腺功能下降，那么就是桥本氏甲状腺炎并甲减，需要进行甲减治疗。
4.如果TGAb、TMAb高，甲状腺功能正常，那么就是桥本氏甲状腺炎，无需特殊治疗，只要定期复查甲状腺功能就可能以了，不过这种情况有可能以后演变成甲减或者甲亢。
辣根过氧化物酶的结构与作用机制 123
2021-07-31
通常用做光学和电子显微镜的组织化学示踪物。
英文名称：horseradish peroxidase;HRP
定义：一种糖蛋白，由于在辣根中该酶的含量很高，故名。它以铁卟啉为辅基，在过氧化氢存在时能催化苯酚、苯胺及其取代物聚合。
英文名称：horseradish peroxidase;HRP
定义：一种糖蛋白，由于在辣根中该酶的含量很高，故名。它以铁卟啉为辅基，在过氧化氢存在时能催化苯酚、苯胺及其取代物聚合。
过氧化物酶在植物体内的主要作用是什么?123
浪漫时光baby2018-01-21
植物体中含有大量过氧化物酶，是活性较高的一种酶。它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有关系。在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱。这是因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素，增加木质化程度，而且发现早衰减产的水稻根系中过氧化物酶的活性增加，所以过氧化物酶可作为组织老化的一种生理指标。此外，过氧化物同工酶在遗传育种中的重要作用也正在受到重视.
甲状腺过氧化物酶抗体大于600有事吗_有问必答_123
Thd00082018-01-09
抗甲状腺过氧化物酶抗体是诊断甲状腺自身免疫性疾病的首选指标，单一抗甲状腺过氧化物酶抗体升高是不能判断，需要进一步检查抗甲状腺球蛋白抗体（TGAb）、抗甲状腺微粒体抗体（TMAb）、TRAB、甲状腺彩超、甲状腺功能等。
1.若都为正常，那么并未有太大问题，只要定期复查就可以了。
2.如果TGAb、TMAb、甲状腺功能均高，那么就是桥本氏甲状腺炎并甲亢，需要抗甲亢治疗。
3.如果TGAb、TMAb高，甲状腺功能下降，那么就是桥本氏甲状腺炎并甲减，需要进行甲减治疗。
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1.若都为正常，那么并未有太大问题，只要定期复查就可以了。
2.如果TGAb、TMAb、甲状腺功能均高，那么就是桥本氏甲状腺炎并甲亢，需要抗甲亢治疗。
3.如果TGAb、TMAb高，甲状腺功能下降，那么就是桥本氏甲状腺炎并甲减，需要进行甲减治疗。
4.如果TGAb、TMAb高，甲状腺功能正常，那么就是桥本氏甲状腺炎，无需特殊治疗，只要定期复查甲状腺功能就可能以了，不过这种情况有可能以后演变成甲减或者甲亢。
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