1 Pierce生物素化蛋白互作Pull-Down试剂盒 捕获纯化与生物素诱饵蛋白互作的蛋白 Pierce生物素（酰化）蛋白互作Pull-Down试剂盒包含使用生物素标记蛋白捕获和纯化与与其互作蛋白的必要成分。 实验者须提供生物素化蛋白作为“诱饵”（见相关产品，生物素化蛋白试剂盒）和表达互作靶标推测蛋白（“猎物”）的细胞。Pull-Down试剂盒提供剩余所有用品：细胞裂解缓冲液，微型离心机离心柱，链亲和素琼脂糖树脂，优化的结合、洗脱缓冲液及详细的操作步骤。该试剂盒可使初学者掌握实验方法，而对于有经验的研究者更方便使用。操作步骤简便易学（图1）。图1.ThermoScientific生物素化蛋白相互作用Pull-Down试剂盒操作步骤概要. Pull-down 除了其抗体功能被一些其他亲和体系所取代外，是一种类似免疫沉淀法（IP）的小规模亲和纯化技术。在这里，亲和体系是已知且特异的生物素-链亲和素的相互作用。生物素化蛋白作为“诱饵”捕获推测的连接配体（即“猎物”）。在一个典型的pull-down实验中，被固定的诱饵蛋白在细胞裂解液中孵育。经过指定步骤的漂洗后，“反应物”被选择性洗脱以进行凝胶分析或Western印迹。因为生物素-链亲素和的互作连接亲和度较高，一般情况下猎物蛋白被洗脱掉，而生物素化诱饵蛋白则仍保持固定在链亲和素琼脂糖树脂上，不被洗脱。图1： 2.生物素化的胰凝乳蛋白酶(baCT)经过pull-down从哺乳动物细胞裂解液中捕获到的反应物牛胰胰蛋白酶抑制剂（BPTI）。图像是用过Pull-Down试剂盒后的洗脱液和对照的Western印迹。baCT“诱饵”固定连接在链亲和素琼脂糖树脂上。BPTI“猎物”蛋白表达在哺乳动物细胞裂解液中。在对BPTI进行洗脱前，baCT“诱饵”蛋白仍连接在树脂上。经过4-20%Tris-GlycineSDS-PAGE。转至硝化纤维膜后，样本被baCT诱饵蛋白探测到，再用Streptavidin-HRP(Product#21124)探测，加入SuperSignalWestDuraChemiluminescentSubstrate(Product#34075)，将印迹暴露在CL-XPosureX-rayFilm(Product#34080)下。
