| Product Name | SensoLyte ® AFC Thrombin Activity Assay Kit *Fluorimetric* |
| Size | 1 kit |
| Catalog # | AS-72130 |
| US$ | $456 |
Thrombin, a serine protease, plays a central role in hemostasis by converting soluble plasma fibrinogen into an insoluble fibrin clot and by promoting platelet aggregation.Thrombin also influences a number of normal and pathological processes, including inflammation, tissue repair, embryogenesis, angiogenesis, and tumor invasion.The SensoLyte® AFC Thrombin Assay Kit is optimized for screening of enzyme inhibitors.This kit contains a fluorogenic substrate which shows high reactivity and low background.Thrombin cleaves the substrate resulting in the release of the AFC (7-amido-4-trifluoromethylcoumarin) fluorophore.Fluorescence can be monitored at excitation/emission= 380 nm/500 nm.The assays are performed in a convenient 96-well or 384-well microplate format. Kit size: 100 assays. | |
| Detailed Information | |
| Product Citations | Ambadapadi, S. et al. (2015) Reactive Center Loop (RCL) peptides derived from serpins display independent coagulation and immune modulating activities J. Biol. Chem. 291 2874-2887doi: 10.1074/jbc.M115.704841Nair, DG. et al. (2014). Interactions of some commonly used drugs with Human α-thrombin. J Biomol Struct Dyn doi: 10.1080/07391102.2014.923329.Wendeler, M. et al. (2014). Process-scale purification and analytical characterization of highly gamma-carboxylated recombinant human prothrombin. J Chromatogr A 1325, 171.Yang, H. et al. (2013). Interleukin-1 promotes coagulation, which Is necessary for protective immunity in the lung against Streptococcus pneumoniae infection. J Infect Dis 207, 50. doi: 10.1093/infdis/jis651.Sasaki, T. et al. (2012). Intravenous and oral administrations of DD2 [7-Amino-2-(sulfanylmethyl)heptanoic acid] produce thrombolysis through inhibition of plasma TAFIa in rats with tissue factor-induced microthrombosis. Thrombosis Res 130, e222. doi:10.1038/jid.2012.204Lim, HA. et al. (2011). Novel agmatine and agmatine-like peptidomimetic inhibitors of the West Nile Virus NS2B/NS3 serine protease. Eur J Med Chem 10.1016/j.ejmech.2011.04.055. |
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针对这个应该有详细的解说的
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那里有一个版块叫做【有问必答】的,一般只要描述清楚的问题,都能够得到论坛羊友的解答。
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参考见解:只是固定方法不同。细胞固定用甲醇,切片固定用多聚甲醛,而染色方法是一样的。
2、问:近期要做免疫荧光双标,不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤及其注意事项?
参考见解:我正在做冰冻组织切片的免疫荧光双染。我的经验是:
(1)选取一抗时要来源于两种不同的动物,我用的是来源于rabbit和rat的抗体,二抗则是不同荧光信号标记的,我用的是donkey anti-rabbit-FITC(绿)和donkey anti-rat-Tex-Red(红)。
(2)我的做法是两种一抗(CHI抗体)同时孵育,然后两种二抗同时孵育。抗体浓度、孵育时间要仔细摸索,我感觉一抗4度孵育过夜比较好,背景比较清晰。
(3)我的阳性对照用的是阳性组织切片,阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG,荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。
(4)封闭血清与二抗来源动物一致,我用的是10%的正常donkey血清。
(5)其余步骤同一般免疫荧光单标操作。
3、问:本人拟做Brdu标记神经干细胞免疫荧光,二抗为FITC标记,想请教各位大侠:
(1)抗体分装和荧光显微镜观察时是否一定要在暗室中进行?
(2)封片时是否用甘油缓冲液即可,还是用甘油和0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液等量混合封片?
(3)免疫酶染色中的3%过氧化氢及2N盐酸是否还需要用?
参考见解:
(1)你的二抗是用FITC标记的,为避免荧光分解,分装及荧光显微镜观察时均要避光;
(2)封片最好用甘油加0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液,后者能使玻片透明;
(3)关于免疫酶染色,如果是用过氧化物酶做标记,就必须用3%H2O2以去除内源性过氧化物酶;2N盐酸需要使用,目的是使DNA变性,让Brdu抗体能够充分地与已经掺入的Brdu结合。
4、问:做间接法免疫荧光染色,如何设置对照?
参考见解:最好是同一视野在未用荧光激发下进行对照,看是否非特异性染色。
(1)空白对照:如果你做的是石蜡切片免疫组化,这个对照必须有,目的是看自发荧光,脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。
(2)阴性对照:标本直接滴加二抗,呈阴性反应。
(3)抗原对照:标本加同种动物的未免疫血清,以PBS冲洗后,在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性抗体,应呈阴性反应。
5、问:我做乳腺组织的免疫荧光染色,结果用激光共聚焦显微镜看很好:有阳性信号,阴性对照组也没有荧光,但是拿到荧光显微镜下看,我的阴性对照组一片绿,像非特异性染色,到底哪个结果才是真实的呢?
参考见解:激光共聚焦显微镜的分辨率比普通荧光显微镜要高的多,出现上述现象首先要排除荧光显微镜的问题,如是不是紫外灯泡寿命到期了或者别的原因,荧光显微镜没有问题,那就以共聚焦显微镜的结果为主。展开
一般用BSA。
血清的目的就是因为含有白蛋白和抗体,所以一举两得。不过不应该用AB型。这是人的血清。流式检测一般都是使用小鼠单克隆抗体,所以封闭的血清也应该是用种的小鼠血清。
2.-20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥 10分钟
3.PBS洗净:3min*3
4.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS
5.PBS洗净:2*5min
6.羊血清封闭:37度,20分钟
7.一抗,4度过夜,一般要大于18小时或者37度 1-2小时
8.4度 PBS洗净,3min*5次
9.二抗 37度小于一小时
2.-20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥 10分钟
3.PBS洗净:3min*3
4.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS
5.PBS洗净:2*5min
6.羊血清封闭:37度,20分钟
7.一抗,4度过夜,一般要大于18小时或者37度 1-2小时
8.4度 PBS洗净,3min*5次
9.二抗 37度小于一小时

