
TwotypesofsolubleTNFreceptors(sTNFR-1andsTNFR-2)havebeenidentified,whichacttoneutralizetheBIOLOGicalactivitiesofTNF-alphaandTNF-beta.Levelsofthesesolublereceptorsappeartoariseasaresultofsheddingoftheextracellulardomainsofthemembraneboundreceptors.ElevatedlevelsofsolubleTNFreceptorshavebeenfoundintheamnioticfluidofpregnantwomen.
TherecombinantsTNFR-1comprisesa161aminoacidfragment(41-201)correspondingtothematuresTNFR-1proteinandisexpressedinE.coliwithanamino-terminalhexahistidinetag.
Form:liquid
Purity:95%SDS-PAGE
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基因敲除除可中止某一基因的表达外,还包括引入新基因及引入定点突变。既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因,也可以用正常基因敲除相应的突变基因。 基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的一门新技术。80年代初,胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年,Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。此后的几年中,基因敲除技术得到了进一步的发展和完善。
基因敲除的技术路线如下:
(1)构建重组基因载体﹔
(2)用电穿孔、显微注射等方法把重组DNA转入受体细胞核内﹔
(3)用选择培养基筛选已击中的细胞﹔
(4)将击中细胞转入胚胎使其生长成为转基因动物,对转基因动物进行形态观察及分子生物学检测。
基因敲除的靶细胞目前最常用的是小鼠ES细胞。基因敲除的技术路线虽不复杂,但由于高等真核细胞内外源DNA与靶细胞DNA序列自然发生同源重组的机率非常低,约为百万分之一,要把基因敲除成功的细胞筛选出来是一件非常困难的工作。因此,同源重组的筛选和检测就成了基因敲除技术所要解决的关键问题。目前已有多种筛
2.准备旋转培养瓶,用于按比例扩增Sf9细胞,将合适大小的两孔盖连接在转瓶的一个 侧臂,另用一平盖接在另一侧臂。将一段短管(约6英寸或15 cm)装在通气孔中,末端连接一滤器,借助张力器用管索将管子与通气孔和滤器固牢。
3.将一段长管(30~60 cm)连接至进气孔,并在末端连接一滤器,用管索加固,另一段管子连接于滤器的另一端,用管索固牢。管子末端用铝箔封好。
4.将与两孔装置相对的侧壁上的盖子旋转90度以松开,高压灭菌培养瓶1 h。
5.将适应了无血清培养液的细胞接种于经高压灭菌的培养瓶中。将培养瓶装至半
植物:抗虫、抗病、抗除草剂植物培育、改良作物品质(富含赖氨酸的玉米)
动物:提高生长速度、生产药物蛋白、器官移植、乳腺生物反应器
微生物:疫苗
基因治疗等等
生物合成人胰岛素注射液,比如诺和灵R笔芯。是单一品种、不是混合的胰岛素。是不含鱼精蛋白的短效胰岛素。
E.coliExpressionSystems.pdf(136.05k)

