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Hycult Biotech/Calprotectin, Human, recombinant  | Hycult Biotech/HC2120
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Hycult Biotech/Calprotectin, Human, recombinant | Hycult Biotech/HC2120
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Hycult Biotech
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HC2120
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Calprotectin, also known as MRP-8/MRP-14 or S100A8/A9 heterocomplex, is formed out of the calcium-binding, migration inhibitory factor-related proteins, MRP-8 (S100A8) and MRP-14 (S100A9). The expression of these proteins is largely confined to the cytosol of neutrophils and monocytes. The complex formation of these proteins is calcium-dependent. Calprotectin comprises 60% of the cytoplasmic protein fraction of circulating polymorphonuclear granulocytes and is also found in monocytes, macrophages and ileal tissue eosinophils. Peripheral blood monocytes carry the antigen extra- and intracellularly, neutrophils only intracellularly. Calprotectin has antibacterial, antifungal, immunomodulating and antiproliferative effects. Furthermore, it is a potent chemotactic factor for neutrophils. Plasma concentrations are elevated in diseases associated with increased neutrophil activity. During intestinal wall inflammation, granulocytes transmigrate through the intestinal wall. Therefore calprotectin is also detectable in faeces. Several investigations report that faecal calprotectin is significantly increased in intestinal diseases such as inflammatory bowel disease (IBD), Crohn"s disease, ulcerative colitis and colon cancer. Normal human plasma contains a calprotectin concentration ranging from 500 to 3000 ng/ml.
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Contributor: Suprya JayadevDate: Mar. 11, 1993Synthesis reaction:1) Mix purified DMSM with cyclohexylamine and 14CH3I at a ratio of 1/1.1/1.3 in 5 ml of methan 查看更多>
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1. Proteins are TCA precipitated and washed with acetone, then dried.2. The CNBr should be brought to room temperature in the hood and used ONLY in the hood. E 查看更多>
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重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。目前,体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功... 查看更多>
BioLegend新产品—TNF家族新重组蛋白,&amp;nbsp;<br><br><br><br><br><br>&amp;nbsp;<br><br>&amp;nbsp;<br><br>&amp;nbsp; &amp;nbsp; &amp;nbsp;&amp;nbsp;TNF家族新重组蛋白<br><br>& 查看更多>
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AdipoGen Life Sciences公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多>
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His-Tag作为一种标签,对以后蛋白的分离纯化及检测鉴定都有好处。不含His-Tag的蛋白只能使用,如要检测,则需要购买专门的抗体。
应该是活性吧,武昊公司买了,还可以免费得
用E.coli重组表达了一种蛋白,现在想要大量表达纯化,开始用过滤的方法,因为所需的蛋白和细胞碎片分子量差别很大,但是发现有很多的DNA污染,用什么方法能去掉DNA,而不影响需要的蛋白呢?用Dnase可以吗?
无细胞蛋白表达系统又称为体外翻译系统,是模拟生物细胞的生命现象,重现胞内蛋白转录翻译过程。无细胞蛋白质合成体系以外源目的mRNA或DNA为蛋白质合成模板,通过人工控制补加蛋白质合成所需的底物和转录、翻译相关蛋白因子等物质,能实现目的蛋白质的体外蛋白合成。金开瑞的与传统的蛋白表达系统相比,省略了耗时耗力的质粒转化、细胞培养、收集、破碎和离心等,极大地提高了工作效率;2.反应体系小,能同时平行合成多种不同的蛋白质;3.反应周期短,能满足高通量配体筛选和蛋白质组学的科研要求;4.开放的反应体系,便于改变各项反应条件,有利于调控基因的转录,蛋白质的合成和翻译后修饰,避免包涵体的形成;5.稳定的反应体系,可以偶联其它工艺,形成自动化、程序化、规模化生产,加快重组蛋白的纯化、功能表征和后续的结构解析;6.无细胞结构限制,可用于生产对宿主有毒害作用的外源蛋白,避免蛋白表达对宿主细胞的致死作用;7.添加非天然氨基酸或同位素标记氨基酸,表达特殊蛋白。8.对于多次跨膜或由于疏水性强导致的普通细胞系表达困难的项目有显著改善。
1.在悬浮培养液中培养Sf9细胞,并使之适应无血清培养液。

2.准备旋转培养瓶,用于按比例扩增Sf9细胞,将合适大小的两孔盖连接在转瓶的一个 侧臂,另用一平盖接在另一侧臂。将一段短管(约6英寸或15 cm)装在通气孔中,末端连接一滤器,借助张力器用管索将管子与通气孔和滤器固牢。

3.将一段长管(30~60 cm)连接至进气孔,并在末端连接一滤器,用管索加固,另一段管子连接于滤器的另一端,用管索固牢。管子末端用铝箔封好。

4.将与两孔装置相对的侧壁上的盖子旋转90度以松开,高压灭菌培养瓶1 h。

5.将适应了无血清培养液的细胞接种于经高压灭菌的培养瓶中。将培养瓶装至半
重组蛋白不切除GST-tag有活性,那么如果使用带有GST-tag的酶进行测活,对测活结果是否会带来干扰?
蛋白质重组,先要全部水解为氨基酸,蛋白质的种类多就是因为它的数量大,结构复杂,空间结构千变万化。而基本的氨基酸只有20中,所以它重组以后就可能变成完全不同的东西,控制和以前完全无关的代谢过程。
基因重组只是控制同一性状表达不同而已,但是它不会改变性状的基本情况。如:控制眼睛颜色的基因,亲本的基因重组之后可能亲本为黑色,子代便为蓝色。但绝对不会控制眼睛颜色的基因在重组之后就变成控制耳朵的基因。
包涵体的形成是一个由许多蛋白质参与的极端复杂的动力学过程,依赖于蛋白质的折叠速率和聚集速率,并且与蛋白质的合成和降解程度相关。强的表达系统,高的诱导剂浓度,相对较高的培养温度常常造成包涵体的形成。除了外界因素,包涵体的形成依赖于蛋白质特异的折叠行为,而不是蛋白的通常特性,如大小,融合标签,相对的疏水性。尽管如此,限制折叠速率的结构特性,如二硫键的形成常常是含有二硫键蛋白质正确折叠的限速步骤(并不绝对,因为有些蛋白质二硫键的破坏并不影响其功能),富含二硫键的蛋白质具有更为复杂的结构,当高水平表达时,由于大肠杆菌细胞质是一个偏还原性的环境,蛋白质容易形成错配的二硫键,这常常是包涵体形成的主要原因。膜蛋白具有暴露的疏水区,表达时易于聚集形成包涵体,也有可能由于降解或对细胞的毒性作用使得表达水平极低。蛋白质的糖基化可以影响到蛋白质的折叠行为和溶解性,当它们在原核系统进行表达时,也容易聚集。
防止包涵体常用的方法:使用中等强度或弱的启动子,低温培养,有限的诱导,优化培养基条件,进行融合表达,与伴侣分子和折叠酶共表达,表达定位于不同的空间,选择突变的菌株或其他的原核表达系统。
增加蛋白质折叠的添加剂:添加剂可能的作用机制甘油对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度L-精氨酸两亲分子/渗压剂甘氨酰甜菜碱/山梨糖醇 对蛋白质具有优先的水合作用阿拉伯聚糖 增加黏度木糖醇 增加黏度乙醇 调节极性DMSO 调节极性
两性离子表面活性剂(Zwitterionic detergents)保护非极性表面Triton X-100保护非极性表面硫代甜菜碱类物质(NDSBs)保护非极性表面蔗糖/海藻糖对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度N-氧化三甲胺(TMAO)对蛋白质具有优先的水合作用/渗压剂三氟乙醇(TFE)促进二级结构的形成低浓度盐酸胍使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性低浓度尿素使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性配体稳定天然结构状态聚乙二醇保护熔球体(molten globule)/增加黏度需要强调的是在培养细菌时,在培养基中加入5%的乙醇可以起到一定的防止包涵体产生的作用。
对比另外一篇文章:
减少包涵体形成的策略降低重组菌的生长温度,降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法,较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用,从而可减少包涵体的形成。2. 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂,培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应,在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输,其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇(诱导热休克蛋白的表达)、低分子量的巯基或二硫化合物(影响细胞周质的还原态,从而影响二硫键的形成)和NaCl。3. 供给丰富的培养基,创造最佳培养条件,如供氧、pH等。
美迪西在做重组蛋白表达方面很有经验,