【求助】核表达的抗体，为何是这样的?

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【求助】核表达的抗体，为何是这样的?

2015-11-14

问题描述：

这是本人最近在做的pax7的石蜡切片的免疫组化，抗体来自abcom，修复方式为复合酶37摄氏度半小时，二抗10分钟（福州迈新sp法试剂套装推荐步骤），pax7是核表达的转录因子，是否应该在当个核中表达？而我的表达却是成片的，我做出来的效果如下图：

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Justin001

用户

这两张图上都没看到明显的核表达。试过热修复没有。我做过对照，核指标用EDTA修复液微波热修复，效果比枸橼酸和PBS好很多。酶消化的修复方式还是主要用于浆膜的指标

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天宝物华

用户

试试热修复。

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谢朗

用户

Justin001这两张图上都没看到明显的核表达。试过热修复没有。我做过对照，核指标用EDTA修复液微波热修复，效果比枸橼酸和PBS好很多。酶消化的修复方式还是主要用于浆膜的指标请问前辈你的EDTA微波热修复的具体操作过程是怎么样的？

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谢朗

用户

qq693056322试试热修复。前辈你好，这个指标我也试过枸橼酸高温高压修复，它表达的位置与上述图片中的差不多，但背景色更深，表达的特异性不够好，还有，这个复合酶修复后的片子好像苏木素复染的时候，不太上色，不知道这其中有什么门道？谢谢前辈的回复

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Justin001

用户

谢朗请问前辈你的EDTA微波热修复的具体操作过程是怎么样的？用EDTA修复液，配方网上有很多，查一下就可以了，嫌自己配麻烦市面上也有现成的卖，我做实验对照的时候查到武汉博士德公司有卖的。使用方式就跟PBS或枸橼酸的使用一样，浆组织浸没，微波炉高火至沸腾维持两三分钟，冷却几分钟之后再加热至沸腾（就是反复两次或多次），再冷却至室温

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wenshl2005

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不止是没有核阳性，感觉都是纤维着色哦～

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谢朗

用户

Justin001用EDTA修复液，配方网上有很多，查一下就可以了，嫌自己配麻烦市面上也有现成的卖，我做实验对照的时候查到武汉博士德公司有卖的。使用方式就跟PBS或枸橼酸的使用一样，浆组织浸没，微波炉高火至沸腾维持两三分钟，冷却几分钟之后再加热至沸腾（就是反复两次或多次），再冷却至室温EDTA修复液之前已经购买了，不过之前做的都是柠檬酸高温高压，微波修复没做过，查了一番资料，发现大家的做法也不太一样，所以具体操作也不知怎么样。另，是不是把温度维持在98度左右15分钟，就算达到热修复的要求了，那这样的话，用水浴法是不是来的更温和，可控性也更强？

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谢朗

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wenshl2005不止是没有核阳性，感觉都是纤维着色哦～有道理，因为有另一个抗体的表达有时候也与这有些相似，纤维着色的原因一般是为什么？感觉它的特异性还很好啊，哈哈。谢谢老师的关注与回复

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天宝物华

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水域微波均可，主要是控温。多试几个条件做好对照。

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wenshl2005

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谢朗有道理，因为有另一个抗体的表达有时候也与这有些相似，纤维着色的原因一般是为什么？感觉它的特异性还很好啊，哈哈。谢谢老师的关注与回复具体原因我也不清楚。酶修复我只做过一次，当时背景有点儿高，舍弃了。建议多用集中抗原修复方法试试（柠檬酸盐、EDTA等）刚刚瞟了一眼这个基因相关的文章，胚胎中的蛋白丰度应该还是挺高的。

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caatt

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这个是非特异性染色。染色都是在裂隙处，类似于边缘着色。

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谢朗

用户

wenshl2005具体原因我也不清楚。酶修复我只做过一次，当时背景有点儿高，舍弃了。建议多用集中抗原修复方法试试（柠檬酸盐、EDTA等）刚刚瞟了一眼这个基因相关的文章，胚胎中的蛋白丰度应该还是挺高的。第一次用了柠檬酸高温高压，一抗浓度梯度做，但出来的背景色都很强，也未见到特异性染色，所以改用了酶修复。谢谢老师提点，我再试试。

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谢朗

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cAATt这个是非特异性染色。染色都是在裂隙处，类似于边缘着色。嗯，确实可能是这样，我再用别的方法重复几次。

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谢朗

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qq693056322水域微波均可，主要是控温。多试几个条件做好对照。，结果出来，我再来回复

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谢朗

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试过热修复，EDTA/柠檬酸，还是未见特异性核表达，每次都做了对照和一抗浓度梯度，可能选择的抗体不太适合，时间来不及了，打算放弃这个指标了。谢谢各位老师前辈战友的热心回答