为什么我的空白始终有条带呢？
2021-07-24
问题描述：
这个引物以前用过的，条件也比较成熟。但是我做了几次，每次在空白孔都有和其他的一样的条带，我换了PCR的系统，都使用的新的一套东西，只有dNTP没有换，dNTP上回用是好的；引物是刚配的，上回用也是好的，总不至于用的ddH2O 有污染吧？
菜鸟求救，大虾帮忙看看，感激不尽。
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bestpiero
用户
一定是有污染，不然不会在PCR空白对照有特异条带的！ddH2O的污染也是有可能的；dNTP也要换。我的建议是除了模板之外的所有体系试剂都要换新的再进行PCR。并且你所用的tip头及ep管也要再重新高压灭过或用新灭过的。我想你会得到和以前一样好的结果！
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ling
用户我现在也在为空白出现条带发愁，不同的是出现在nested pcr 第一次pcr 阴性对照没有条带出现，以此pcr 产物做模板用内引物做 nested 出现很亮的带， 把水 dNTP， taq system，primer都换成新的，做的结果也还是一样， 找不到污染源，是酶不干净吗？我用了takara 和promeaga 的酶，promeaga 所出现的条带要淡一些 高手能指教！！
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ppcat
用户如果你使用的水是纯水机做的，有可能会有污染
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activation
用户引物之间也可以互为模板而扩增,如果不是水被污染,就可能是引物扩增带(引物没有被污染的话)。按这一思路试一试 .
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yiyi_xie
用户是不是试剂被污染了?!
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zbgene
用户这样的情况我也有过!!!当然你的实验习惯和环境很重要,反复出现阴性对照有条带,最坏的可能是你实验室的污染,当然这是最后排除的问题几率也很小.你可以用10%NAHCO3擦拭你的实验台和你的枪,尤其是枪,你加过模板后可能有气溶胶,然后用紫外对实验台和枪进行照射,体系反正你都换过了我就不多说了,试试吧我上次就是这么解决的!
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feverfew
用户多谢各位的回答。我把各种东西都分别换了一遍，做了对照，可是空白照样的有条带呀。我用的水是纯水机做的，为什么用纯水机的可能有污染呢？我们实验室同时和我做PCR的一个同学就没有这种问题。我也换用她的水，可是我的空白还是有条带。我也考虑过可能是引物之间的互相作用，可是以前我们实验室的用相同的东西作出来的就阴性对照就没有。最后问一下，什么是气溶胶？
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