【求助】什么载体可以表达N末端不是Met的天然蛋白？

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2021-07-21

问题描述：

最近要用原核系统表达几条基因的成熟蛋白，N末端没有Met，而且最好能够表达出可溶的有活性的蛋白。
我本想用pET带有信号肽的载体表达到周质空间，但发现在信号肽切除的位置克隆进去我的基因的话还是会引入多余的氨基酸。
请教各位有经验的高手，哪些载体或者方法我可以尝试去做？
多谢了！

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gingivalis

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问得有道理啊，如何区分。脯氨酸氨基肽酶家族还有一个老大，prolyl oligopeptidyl peptidase （POP），根据它的活性特性，可以比较有把握地这样说，如果某蛋白质N端是这样的开头：M-K-H-H-H-H-H-H-X-P / X-X....POP 可以把 P 后面的肽键水解开。（最好你的目的蛋白质开始几十个氨基酸内没有 P ）。酶切效率可以查文献，理论上没有问题，我相信实际操作可行。

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xuezhishui

用户

你的意思其实就是找一些非融合表达载体而已，这样的载体还是有不少的。你自己在克隆目的基因的时候5‘端引入ATG，翻译的时候就是从这个ATG开始的。你可以尝试pBV20，温度诱导载体，不少基因都可以可溶性表达的。当然，最终是否表达以及表达的形式都是更主要取决于你基因本身的情况的。

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yjgao

用户

sorry，标题之前写错了。我要表达的蛋白N末端的氨基酸不是Met，而翻译起始的第一个氨基酸必须是Met，我想找到一种方法可以去掉这个Met。所以想到用signalpeptide融合表达我的基因，这样signalpeptide引入周质空间的时候就可以被切除，只留下我的目的蛋白。但遇到的问题是我所找到的有信号肽的载体（pET系统），克隆入我的基因之后，在信号肽和我的基因之间还是有其他多余的氨基酸。所以请帮忙推荐一种载体，可以得到不含多余氨基酸的天然蛋白。谢谢！

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