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biopioneerinc/Cell Migratiopn Assay 96-well, 8um/1/CM-102
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biopioneerinc
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CM-102
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Cell Migratiopn Assay 96-well, 8um, 96 assays

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2016年2月3日,英国科学家获得了生育监管机构的审批,获权对人类胚胎的基因进行修改。利用基因编辑技术就是操纵我们的DNA——生命的蓝图。... 查看更多>
高效、低毒性siRNA转染试剂,成功转染的细胞包括:LNCap, C2C12, 3T3 L1, A549, BxPC3, DU145, HeLa, HeLa S3, HT-1080, HT-29, MDA-MB453, hMSC, PC-3, SKBR3, H9C2, NIH/3T3, COS7, H2122, H2126, HCC193, HCT116, Primary Chondrocytes, Primary Fibroblasts, SK-OV-3, SW620, 3T3-Swiss, NIH/3 查看更多>
近日美国生物技术公司Alnylam宣布叫停revusiran的三期临床开发。revusiran作为RNAi疗法首个进入临床阶段的治疗性药物,它的失利是该领域面临的又一沉重打击。 查看更多>
研究人员利用CRISPR/Cas9 系统对受到感染的哺乳动物肝细胞进行基因组编辑,靶向切割了HBV病毒共价闭合环状DNADNA的一些特异位点,从中删除了乙型肝炎病毒DNA,攻克乙肝不是梦。 查看更多>
DNAFect是一种高效的阳离子脂质体转染试剂,适用于多种细胞的DNA转染。对于大多数细胞系包括原代细胞都有较高的转染效率,并且对细胞毒性极低。本转染试剂可应用于瞬时转染、稳定转染、共转染、进行高通量DNA转染,基因表达和基因功能研究。 查看更多>
威斯腾生物在发布的慢病毒与 RNAi(RNA干扰)(慢病毒包装纯化、过表达慢病毒、干扰慢病毒、miRNA病毒包装、腺病毒包装纯化、过表达腺病毒、干扰腺病毒、腺相关病毒包装、逆转录病毒包装 ) 威斯腾生物,让科研更简单!供应信息,浏览与慢病毒与 RNAi(RNA干扰)(慢病毒包装纯化、过表达慢病毒、干扰慢病毒、miRNA病毒包装、腺病毒包装纯化、过表达腺病毒、干扰腺病毒、腺相关病毒包装、逆转录病毒包装 ) 威斯腾生物,让科研更简单!相关的产品或在搜索更多与慢病毒与 RNAi(RNA干扰)(慢病毒包装 查看更多>
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基因治疗领域权威杂志human Gene Therapy在线发表了中国科学院广州生物医药与健康研究院陈小平课题组的最新研究成果.本文威正翔禹/缔一生物为您分析Human Gene Therapy:中科院广州生物院陈小平课题组发表原代T细胞基因编辑和艾滋病基因治疗研究进展. 查看更多>
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基因编辑技术指能够让人类对目标基因进行“编辑”,实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来,就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势,技术不断改进后,更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。... 查看更多>
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不同的转染试剂有不同要求, 生物通小编个人经验是转染试剂细胞毒性高 的要求长满一些,细胞多一些,就算死伤惨重 也还能留下多些活口,嘿嘿,对于质粒转染来 说这并非评判转染试剂好坏的标准,毕竟只要 转进去就算OK 了,但是对于RNAi 实验来说 就不同了),将siRNA 和转染试剂混合物加 入共同温育一段时间,更换培养基,再培养 24-48 小时检测mRNA 含量等等。 创新的方法是反向转染。这种方法称为 everse tr ansfection 或者neofection,和传统 转染方法相比区别在于,传统方法需要提前一 天接种铺板,培养24 小时后等细胞到一定汇 合度再加转染复合物转染;而反向转染则是不 用预先接种细胞,先加入转染试剂和siRNA 混合物在培养板上共同温育,然后再加入细胞 铺板,培养。这个方法的好处不单是可以节约 一整天的时间,而且转染效率高。
近日,中国科学家利用基因编辑技术——CRISPR/Cas9,对抑制狗骨骼肌生长的基因(MSTN)进行了敲除,培育出两只肌肉发达的“大力神”狗,成功构建了世界首个基因敲除狗模型。

科研人员所使用的“基因编辑技术”,顾名思义,能够让人类对目标基因进行“编辑”,实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来,就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势,技术不断改进后,更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。

一、与诺奖“擦肩而过”的CRISPR/Cas9技术

这不是CRISPR/Cas9这项明星技术第一次得到人们的关注。在此之前,有着“豪华版”诺奖之称的“2015年度生命科学突破奖”颁发给了发现基因组编辑工具“CRISPR/Cas9”的两位美女科学家——珍妮弗·杜德娜和艾曼纽·夏邦杰。二人更是获得了2015年度化学领域的引文桂冠奖——素有诺奖“风向标”之称,曾被认为是今年诺贝尔化学奖的最有力竞争者。

那CRISPR/Cas9到底是一项什么技术,为何能够获得如此这般青睐,又何以在短短两三年时间内,发展成为生物学领域最炙手可热的研究工具之一,并有近700篇相关论文发表?它将来又会如何影响到我们的生活?

CRISPR/Cas9是继“锌指核酸内切酶(ZFN)”、“类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)”之后出现的第三代“基因组定点编辑技术”。与前两代技术相比,其成本低、制作简便、快捷高效的优点,让它迅速风靡于世界各地的实验室,成为科研、医疗等领域的有效工具。
RNAi(RNA干扰)技术:生物的遗传信息从脱氧核糖核酸(DNA)传到作为“信使”的核糖核酸(RNA),再传到蛋白质,特定的基因控制细胞制造特定的蛋白质。如果RNA被干扰,基因就会“沉默”,不起作用。科学家在这次实验中的做法是:设计一段微小的RNA分子,与需要干扰的基因的某个片段吻合。这些称为“小干扰RNA”的分子会打开细胞抵抗入侵病毒的一个天然防御系统,制造化学物质攻击这个基因释放出的信使RNA,使之无法正常传递遗传信息。
这种技术,以前曾被用来研究植物和蠕虫等,但直到现在才发现它对哺乳动物细胞也有效。
如果把这个思路用于医疗,使致病的基因“沉默”下来,不就可以治好许多疾病吗?而哈佛医学院的研究人员首次用RNA干扰使活体动物的致病基因“沉默”。美国哈佛医学院的科学家在最新一期英国《自然医学》杂志上报告说,他们已经成功地利用这种核糖核酸干扰技术治愈了实验鼠的肝炎。如果进一步证实这种技术在人体内有效,将为许多疾病和感染提供新疗法。
在研究中,科学家干扰的目标是“凋亡相关蛋白质(FAs)基因”。这种蛋白质存在于细胞表面,它能够启动细胞的自杀程序,据认为,许多肝病是由于病毒、免疫系统失常或慢性酒精中毒激活了FAs基因所导致的。
研究人员给实验鼠尾部的血管注入旨在“沉默”FAs基因的小干扰RNA,发现有90%的肝细胞接收到了这种RNA分子,FAs蛋白质的产量变成原先的十分之一。随后,科学家给实验鼠注入大量FAs抗体,激活细胞自杀程序,模拟实验鼠患有严重肝炎的情形。
结果,未接受RNA干扰治疗的实验鼠有40%在3天内死亡。而40只接受过治疗的实验鼠有33只活了下来,10天后研究人员检查这些实验鼠的肝部,发现完全正常。
对于人来说,身体比老鼠大得多,血液循环系统也庞大。科学家目前正在寻找把小干扰RNA送到人体特定部位的方法,以便验证RNA干扰技术在人体中的效果。
在此,我只是抛砖引玉,向大家简单介绍一种新的技术,希望对其感兴趣的同仁多多发表,也希望版主给予支持。

想用RNAiMAX或者lipo2000转染siRNA,但是看了下转染试剂的说明书和锐博的siRNA说明书,觉得分别对siRNA的用量描述差别挺大的呀,不知道到底该参考哪个呢。

以24孔板为例在siRNA说明书中写到,siRNA终浓度是50nM的话,加入浓度为20μM的siRNA1.25ul,每孔体积是500ul,那这样的话,每孔最终siRNA的量是25pmol。

但是在RNAiMAX或者是lipo2000说明书中,一个写的每孔siRNA用量是5pmol,一个是500ng,这与siRNA厂家所提供的量相差也太多了吧。

到底该看哪一个呢。

ps.一旦siRNA的量和体积确定下来之后,转染试剂的量和siRNA1:1的加就可以了吗?

请各位大神解答。


1.siRNA说明书中的用量,红线圈出

2.RNAIMAX说明书中siRNA的用量。

3.lipo2000说明书中siRNA用量


欲研究某基因的功能,只知道现在很多干扰实验是在细胞水平体外进行实验的.不清楚目前能否应用RNA干扰在小鼠或其它动物上进行,这种设计是否可行.
  请有经验的战友指点,若可以最好能提供几篇应用动物进行RNA干扰研究的文章.
  非常感谢!
谁才是CRISPR技术的所有者?123
75█基佬天降█2021-09-06
近年来,CRISPR/Cas9风暴席卷全球。这项基因组编辑技术在短短几年内迅速应用于世界各地的实验室,并催生了上千篇文章的发表。然而,麻省理工学院(MIT)的《Technology Review》杂志提出了一个问题,谁才是CRISPR技术的所有者? 立即索取更多资料 生物通 www.ebiotrade.com
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近年来,CRISPR/Cas9风暴席卷全球。这项基因组编辑技术在短短几年内迅速应用于世界各地的实验室,并催生了上千篇文章的发表。然而,麻省理工学院(MIT)的《Technology Review》杂志提出了一个问题,谁才是CRISPR技术的所有者?生物通 www.ebiotrade.com
一个月前,“科学突破奖”(Breakthrough Prize)揭晓。加州大学伯克利分校的Jennifer Doudna和德国亥姆霍兹传染研究中心的Emmanuelle Charpentier因在CRISPR技术方面的重要贡献而获奖,且每人获得了300万美元的奖金。
这一领域的另一位风云人物,Broad研究院的张锋(Feng Zhang)虽然没有获得科学突破奖,但在今年4月获得了CRISPR/Cas9的首个专利。他的研究中心控制着这一技术的每个重要商业应用。生物通 www.ebiotrade.com
那么问题来了,这个备受瞩目的奖项和专利为何会落入不同人的手中?究竟是谁发明了它?“这一领域的知识产权相当复杂,”CRISPR Therapeutics公司的CEO Rodger Novak谈道。Emmanuelle Charpentier是这家公司的创始人之一。
Tech Review的记者Antonio Regalado指出,张锋与Doudna共同创立了Editas Medicine公司,它获得了Broad的技术授权。不过,在张锋成功申请专利之后,Doudna就与该公司断绝了关系。她将她的知识产权(专利申请中)授予了另一家竞争性的公司Intellia Therapeutics。然而,让事情更加复杂的是,Charpentier又将她在同一专利申请中的权利出售给了CRISPR Therapeutics。生物通 www.ebiotrade.com
此外,围绕这一技术的科学信用,那也是错综复杂。2012年夏天,Doudna、Charpentier及她们的团队发表了一篇文章,证明CRISPR/Cas9系统可以作为一种可编程的DNA编辑工具。半年后,张锋博士以及哈佛大学的George Church发表文章称它可应用于人类细胞,不久后,Doudna也发表了类似的结果。
但是,张锋表示他对Doudna和Charpentier的工作知之甚少。为了支持他的专利申请,他提交了实验室笔记本的照片,表示他在2012年年初就开始了这方面的研究,早于Doudna和Charpentier。生物通 www.ebiotrade.com
Charpentier表示:“我可以说的是,我和Jennifer Doudna是在我的实验室中开展研究。这里的一切都很夸张,因为这是一项人们很容易学会的技术。事情发生得太快了。”
Regalado在文中写道:“目前还没有CRISPR药物。但是如果CRISPR真的如科学家想象得那么重要,对这一基本技术的商业控制将价值数十亿美元。”也许,这场专利之战才刚刚开始。(生物通 薄荷)

我先开个头哈:

现今基因导入是生物技术实验的家常便饭,常用的方法无非是转染、病毒感染、电转这几种。

几乎所有做细胞转染的战友们都面临过这样的尴尬。

效率低,

效率低、

效率好低。(烦恼的事也要说三遍)

于是,我们就开始寻找各种各样的转染试剂,遂经蒸煮炸烤,百般试验,

运气好还能拣个宝,点儿背的那就一千个

为了广大细胞转染的战友,为了大家心中不再有那个“物种”,特开此贴,大家贡献一下资源、分享一下心得、或者吐槽一下心中的不忿,忘大家顶起,顶起,再顶起!!!


这是个理解的问题目的基因与质粒结合利用了碱基互补配对但质粒进入受体细胞不需要碱基互补配对即使整合到染色体的dna上你也只能说整合过程利用了碱基互补陪读而不是那个导入过程
求大神解惑,RNA干扰回复实验是怎么做的?我的实验需要设计一个RNArescue组,不知道怎么操作。
RNA干扰与基因敲除123
蜗牛小灵子2017-02-23

本是小菜鸟,目前研究某个比较新的蛋白对内质网应激的影响,需要抑制这个蛋白的表达看下游信号的表达情况,但是无论如何夜找不到抑制剂,做RNA干扰的话经费就超出预算了!急求各位大神,帮忙出个解决方案吧!非常感谢!

1.高效性:Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的,只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低到1.5 nmol/L时产生的基因沉默效果变化不大,只有当浓度降低到0.05 nmol/L时,沉默的效果才消失。Holen等也证实1~100 nmol/L的双链RNA浓度对基因沉默的效果是一致的。这说明双链RNA介导的基因沉默效率是相当高的。需要ATP:Zamore等认为RNAi过程中至少有2个步骤需要能量的供给:一是长的双链RNA被 Dicer所酶切产生双链RNA;二是在双链RNA与RISC结合解链后形成有活性的RISC。
⒉特异性:Elbashir等和Brummel kamp等发现在21~23个碱基对中有1~2个碱基错配会大大降低对靶mRNA的降解效果。
⒊位置效应:Holen等根据人TF(tissue factor)不同的位置各合成了4组双链RNA来检测不同位置的双链RNA对基因沉默效率的影响。在不同浓度和不同类型的细胞中,hTF167i和hTF372i能够抑制85%~90%的基因活性,hTF562i只能抑制部分基因活性,而hTF478i则几乎没有抑制基因的活性。他们还以hTF167为中心依次相差3个碱基对在其左右各合成了几组双链RNA,有趣的是它们所能抑制该基因活性的能力以hTF167为中心依次递减。特别是hTF158i和 hTF161i只与hTF167i相距9个和6个碱基,但它们几乎没有抑制该基因活性的能力。结果还表明双链RNA对mRNA的结合部位有碱基偏好性,相对而言,GC含量较低的mRNA被沉默效果较好。
⒋竞争效应:Hoten等将10 nmol/L和30 nmol/L的hTF167i相比,两者的沉默基因效果无差异,但将20 nmol/L基因抑制效果很差的PSK314i和10 nmol/L的hTF167i相混和后,hTF167i产生的抑制效果明显降低。
⒌可传播性:在线虫中,双链RNA可以从起始位置传播到远的地方,甚至于全身。Feinberg 和Hunter在线虫细胞膜上发现一种跨膜蛋白SID1,它可以将双链RNA转运出细胞,因此系统性的RNAi包括了SID1介导的双链 RNA在细胞间的运输。但在果蝇上并未发现有此基因的同源物,因此在果蝇上通过注射产生的RNAi不能扩散。向左转|向右转
最新一期Nature上,张锋实验室发表了《InvivogenomeeditingusingStaphylococcusaureusCas9》,在文章中,他们用腺病毒AAV包装SaCas9和gRNA,靶向小鼠肝脏中胆固醇调节基因Pcsk9。注射AAV一周内,他们观察到>40%基因改变,血清中Pcsk9下降。那么问题来了,这种效率情况下,可否靶向精子或者卵细胞中的特定基因,然后通过交配获得杂合子,进一步获得纯合子。这样是否可行?谢谢!
http://www.nature.com/nature/journal/v520/n7546/full/nature14299.html
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