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biopioneerinc/Cell Migratiopn Assay 96-well, 8um/1/CM-102
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Cell Migratiopn Assay 96-well, 8um, 96 assays
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2021-08-26
导读：近日，广州市妇女儿童医疗中心珠江新城院区眼科副主任朱洁博士科研团队发表了一项突破性科研成果，他们通过对视细胞进行基因编辑，能有效防止视网膜细胞变性，并保留视网膜组织感光功能，有望帮助视网膜色素变性的患者摆脱失明的阴影。 视网膜色素变性是造成失明的主要原因之一，目前临床上还没有有效的治疗手段，患者常出现夜盲、视野缩小，最终视力丧失，严重影响生活质量。 近日，广州市妇女儿童医疗中心珠江新城院区眼科副主任朱洁博士科研团队发... 查看更多
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2021-07-26
北京强欣博瑞生物技术有限公司在发布的CRISPR/Cas9基因敲除载体 双敲，Puro抗性供应信息，浏览与CRISPR/Cas9基因敲除载体 双敲，Puro抗性相关的产品或在搜索更多与CRISPR/Cas9基因敲除载体 双敲，Puro抗性相关的内容。 查看更多
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2021-09-15
上海杰美基因医药科技有限公司在发布的植物细胞原生质体转染试剂盒供应信息，浏览与植物细胞原生质体转染试剂盒相关的产品或在搜索更多与植物细胞原生质体转染试剂盒相关的内容。 查看更多
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2021-09-18
动物模型是现代生命科学研究的重要工具，特别是基因工程小鼠和大鼠，在基因功能研究、人类生理病理机制研究及新药研发中起着不可替代的作用。近几年来，制备动物模型的基因敲除技术主要包括传统ES基因打靶、TALEN、CRISPR/Cas9， 近期又有一项新的基因敲除技术——TetraOne... 查看更多
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2018-06-28
巴傲得生物长期备有Bioworld抗体现货4000多种抗体可以在一周左右送到客户...上海遐锦生物科技有限公司于2019年11月29日举办全国循证医学Meta分析与网状... 查看更多
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2021-07-29
书中对RNA 干扰的理论系统、技术体系及应用研究进行整体的构思，以该领域最新的研究成果为基础，除了双链RNA干扰之外，重点突出了对新发现的微小RNA(miR NA)进展的描述，从而全面系统地描述了RNA干扰；结合作者实验中的研究经验，系统地介绍了当今RNA干扰在多种生物体系中研究的实用技术方法。... 查看更多
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2017-02-05
南京恩晶生物科技有限公司在发布的FRA6B-set siRNA/shRNA/RNAi Lentivector供应信息，浏览与FRA6B-set siRNA/shRNA/RNAi Lentivector相关的产品或在搜索更多与FRA6B-set siRNA/shRNA/RNAi Lentivector相关的内容。 查看更多
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2021-07-18
我们实验室在细胞信号转导方面技术非常强，但因为没有动物体内的结果，每次发表的文章档次大打折扣。我的导师因此决定要我构建基因敲除小鼠，来验证一些体外研究结果。由于我们是一个传统的cellular biochemistry实验室，对基因敲除小鼠技术的了解，仅限于书本知识，实践起来完全不够用。这样的课题对我来说几乎是impossible mission，但哪怕最终只有0.1%的成功概率，我也不想放弃，万一成功了呢？ 我们前期研究发现，一个... 查看更多
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2018-12-26
一、提取抗原蛋白将提取RNA途中留存的样品，加入150μl 100%酒精充分混匀，静置5min(RT), 2000×g , 4℃离心5min, 吸取上清至新管中, 加入750μl异丙醇, 混匀, 静置10min(RT), 12000×g, 4℃离心10min, 弃上清, 加入1ml 0.3mol/L盐酸胍/95%酒精 查看更多
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来源：Clontech用途：RNAi载体... 查看更多
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上海邦耀生物科技有限公司在发布的基因敲除和点突变大小鼠供应信息，浏览与基因敲除和点突变大小鼠相关的产品或在搜索更多与基因敲除和点突变大小鼠相关的内容。 查看更多
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2018-12-03
enQuire BioReagents公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多
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体内转染试剂的重大突破_问答详情_转染试剂_基因编辑_分子类_蚂...123
beijingqingnian2021-07-26
相关疾病：肿瘤癌症支气管哮喘EntransterTM-invivo是英格恩生物公司（EngreenBiosystemCo,...
小鼠血小板膜糖蛋白ⅡBⅢA(GPⅡBⅢA/CD41+CD61)ELISA KIT123
kkkk亲僦42017-10-06
CRISPR是生命进化历史上，细菌和病毒进行斗争产生的免疫武器，简单说就是病毒能把自己的基因整合到细菌，利用细菌的细胞工具为自己的基因复制服务，细菌为了将病毒的外来入侵基因清除，进化出CRISPR系统，利用这个系统，细菌可以不动声色地把病
酶标仪法测蛋白浓度123
狼恋莫_1x22018-01-14
RNA干扰的分子抑制机制的三种方式及原理
转录抑制
与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用，使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用，使相应基因不能被转录，从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能，使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptional gene silencing,TGS)。这种现象先在植物中得到证实,但是在哺乳动物中是否存在仍有争议。2004年Svoboda等研究表明，在小鼠卵母细胞中，通过RNAi引起靶基因表达沉默的长dsRNA不能引起相应DNA区域从头合成DNA的甲基化。Morris等也于同年得出实验结论，针对内源基因启动子的siRNA能够引起其区域内CG岛以及组蛋白H3K9的甲基化，从而在转录水平抑制基因的表达。
转录后抑制
不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物、线虫或哺乳动物细胞内，、被切割产生siRNA片断，再由合成的RISC切割靶mRNA从而阻断基因表达。这种基因能正常转录成mRNA，但mRNA因被降解使基因功能被阻断，这种RNAi方式叫做转录后沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS)。siRNA对靶mRNA降解具有序列特异性，只能引起同源mRNA降解，如果siRNA与mRNA有一个bp不配对，RNAi作用就极大降低，如果两者有4个bp不配对，就不能产生RNAi。
翻译抑制
Grishok等在研究RNAi时，发现在细胞中在细胞中存在内源性小片段单链RNA(ssRNA)，其长度也在21～25 nt之间，这种ssRNA可与mRNA的3′非翻译区(3′UTR)特异性地结合，从而抑制mRNA的翻译和相应的功能蛋白质合成。这种小片段的ssRNA叫做stRNA(small temporal RNA)。ssRNA的形成是因为当RNA的大小为70～80 nt时，容易形成双链的茎环状结构，其双链茎的长度正好在21～25 nt之间，这样的双链结构易被Dicer酶识别并切割成stRNA，由stRNA抑制翻译。这种方式的RNAi也作用于转录后形成的mRNA，它在调节生物细胞内基因的表达、自身的发育方面起着重要的作用。
转录抑制
与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用，使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用，使相应基因不能被转录，从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能，使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptional gene silencing,TGS)。这种现象先在植物中得到证实,但是在哺乳动物中是否存在仍有争议。2004年Svoboda等研究表明，在小鼠卵母细胞中，通过RNAi引起靶基因表达沉默的长dsRNA不能引起相应DNA区域从头合成DNA的甲基化。Morris等也于同年得出实验结论，针对内源基因启动子的siRNA能够引起其区域内CG岛以及组蛋白H3K9的甲基化，从而在转录水平抑制基因的表达。
转录后抑制
不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物、线虫或哺乳动物细胞内，、被切割产生siRNA片断，再由合成的RISC切割靶mRNA从而阻断基因表达。这种基因能正常转录成mRNA，但mRNA因被降解使基因功能被阻断，这种RNAi方式叫做转录后沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS)。siRNA对靶mRNA降解具有序列特异性，只能引起同源mRNA降解，如果siRNA与mRNA有一个bp不配对，RNAi作用就极大降低，如果两者有4个bp不配对，就不能产生RNAi。
翻译抑制
Grishok等在研究RNAi时，发现在细胞中在细胞中存在内源性小片段单链RNA(ssRNA)，其长度也在21～25 nt之间，这种ssRNA可与mRNA的3′非翻译区(3′UTR)特异性地结合，从而抑制mRNA的翻译和相应的功能蛋白质合成。这种小片段的ssRNA叫做stRNA(small temporal RNA)。ssRNA的形成是因为当RNA的大小为70～80 nt时，容易形成双链的茎环状结构，其双链茎的长度正好在21～25 nt之间，这样的双链结构易被Dicer酶识别并切割成stRNA，由stRNA抑制翻译。这种方式的RNAi也作用于转录后形成的mRNA，它在调节生物细胞内基因的表达、自身的发育方面起着重要的作用。
crispr cas9 蛋白还表达怎么办_问答详情_CRISPR 细胞株_基因编辑...123
灰机52gOd2017-10-01
CRISPR(clustered,regularlyinterspaced,shortpalindromicrepeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。
在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3 类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统 。
在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3 类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统 。
细胞在20度放置一夜还行吗？ 生物科学 123
2021-08-04
推荐做一个小样转染验证试验（设定一下梯度），没有问题就正常使用。
对重复性要求不高的试验，一般没有问题的，只不过可能需要增加一些转染试剂用量了。
为了避免这个问题，推荐收到货之后，进行适当分装，用多少，拿出来多少最好。
对重复性要求不高的试验，一般没有问题的，只不过可能需要增加一些转染试剂用量了。
为了避免这个问题，推荐收到货之后，进行适当分装，用多少，拿出来多少最好。
CRISPRCas9基因敲除与RNA干扰优点比照_cas9基因编辑_cas12a_...123
橙asmxm31832018-01-14
RNA干扰不能称之为基因敲出，只出算是KNOCK-DOWN，使表达降低。基因敲出是KNOCKOUT，是把基因的一段序列在DNA层面上去掉。
有人用CRISPR/Cas9系统做细胞基因敲除吗交流下 分子生物...123
阿瑟58342021-08-20
基因敲除是上个世纪90年代出现的最新外源DNA导入技术。分为完全基因敲除和条件基因敲除。
基因敲除技术的产生和发展建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，自身发展的同时也促进了相关技术的进一步发展。流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。
目前，在ES细胞中进行同源重组已经成为一种研究特定基因甚至基因的特定结构域和对小鼠染色体组上任意位点进行遗传修饰的常规技术。1997年通过基因打靶获得的突变小鼠就已经超过千种，近年来随着基因敲除技术的不断进步，尤其是DNA重组技术和小鼠基因组测序的完成，使得建立基因敲除小鼠的周期大大减少，使基因敲除小鼠数目大大增加。各国也都建立了突变体小鼠及转基因小鼠的数据库。
06年8月七日，美国国立卫生研究院宣布将投巨资启动敲除小鼠基因组计划，目的是建立一个完善、免费的小鼠基因组突变基因数据库，研究人员可以利用基因敲除小鼠研发能为治疗癌症、心脏病、神经退行性疾病、糖尿病等人类遗传疾病提供更为优秀的动物模型。展开
基因敲除技术的产生和发展建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，自身发展的同时也促进了相关技术的进一步发展。流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。
目前，在ES细胞中进行同源重组已经成为一种研究特定基因甚至基因的特定结构域和对小鼠染色体组上任意位点进行遗传修饰的常规技术。1997年通过基因打靶获得的突变小鼠就已经超过千种，近年来随着基因敲除技术的不断进步，尤其是DNA重组技术和小鼠基因组测序的完成，使得建立基因敲除小鼠的周期大大减少，使基因敲除小鼠数目大大增加。各国也都建立了突变体小鼠及转基因小鼠的数据库。
06年8月七日，美国国立卫生研究院宣布将投巨资启动敲除小鼠基因组计划，目的是建立一个完善、免费的小鼠基因组突变基因数据库，研究人员可以利用基因敲除小鼠研发能为治疗癌症、心脏病、神经退行性疾病、糖尿病等人类遗传疾病提供更为优秀的动物模型。展开
基因组编辑三大利器:TALEN、ZFN和CRISPR/Cas9 | 赛业生物123
周效华2021-09-09
从2011年科学家实现TALEN技术，2013年科学家实现CRISPR/Cas9技术，这些技术的迅速成熟都给基础生物学研究、临床医学研究提供了更为方便和快捷的分子生物学工具。技术进步必将在未来给科学研究及基因治疗研究带来更为广泛的发力！这在2014年以来的频频出现的Cas9技术在各个领域的应用进展中可以清晰看到。欢迎感兴趣的朋友联系我交流这些方面的进展。
关于这些技术的具体原理和操作细节，请查看我之前的帖子附件详细介绍，TALEN，CRISPER/Cas9技术做基因敲除技术资料-蚂蚁淘论坛。不清楚的请联系我咨询。此贴主要谈一谈在用这些技术进行癌细胞株阳性细胞克隆筛选的过程中，如何进行阳性克隆筛选，为初次接触这些新技术的研究者提供一些参考意见。
一般CRISPER-Cas9质粒转染后，采用有限稀释法接种到96孔板中长克隆，待到单个细胞长到几百到1000个细胞左右时，显微镜下仔细观察每一个孔的细胞，若发现非单克隆的细胞需要将其标注出来剔除筛选之外。传两代后，取出单个克隆的一部分细胞提取基因组DNA。
分析敲除位点的上下游序列，设计合适的引物，并从提取的基因组中扩出目的片段，然后选择部分阳性克隆进行PCR产物或做T载克隆送测序进行最终确认。
目前推崇的各种识别错配碱基的酶切鉴定方法及Surveyorassay试剂盒由于假阳性过高及过于昂贵，一般实验室我们不建议使用。少数试剂酶公司对于酶的推荐有利益因素驱动，希望各位战友注意甄别，土豪请忽略。(*^__^*)
运用CRISPER-Cas9技术进行癌细胞系的基因敲除，我们的经验是若设计的CRISPER-Cas9载体表达水平够高，敲除效率够高，此步骤多数时候可以直接省略。
详细的Protocol这里给出sigma最早ZFN的protocol，请查阅附件。这份protocol很经典，各位战友可以参考认真阅读一下。其他注意点如下，供参考。欢迎战友们补充。
建议一三事：(土豪别忽略)
1.土豪购买Surveyorassay的kit链接:
http://world.transgenomic.com/diagnostic-tools/genetic-analysis-kits/surveyor-mutation-detection-kits
2.转染的时候就按照转染试剂推荐的DNA用量转染就可以。目前有Cas9和gRNA分别在两个不同的载体上的，也有在同一个载体上的，两个载体上的那套体系，建议转染时质粒DNA用量摩尔比例1：1。
3.设计上下游引物时，PCR产物的大小最好是四五百bp长比较合适，gRNA的targeting位点并不需要正好在PCR产物的中间。
4.做surveyorassay时用的PCRmix我们就是用的Sigma的JumpStartReadyMix，这个是热启动的Taq酶，mix里面没有DNA染料，可以直接用于surveyorassay。
5.分完96孔板之后大概一个星期能长出大小比较合适的单克隆，因为分细胞的时候不能保证完全均匀，有的孔里可能会长出2个或更多细胞克隆，所以需要在显微镜下把有多个克隆的孔剔除掉。我们习惯将96孔板里的单克隆消化下来再转到一个新的96孔板里，长满之后1/4-1/5再传代，剩下的细胞裂解之后提基因组DNA做surveyorassay。挑克隆鉴定的工作量比较大。
6.5中的两次传代目的是为了去除掉细胞培养基及细胞内的参与相关CRISPER-Cas9载体，以免形成二次切割，所获得的克隆不纯。建议最好要做这样一部操作。
7.更多详细的实验细节操作，欢迎联系我咨询或仔细阅读附件中的文件。
此贴若对您实验有帮助，记得常回来踩踩，道声感谢，给个力赞、怒赞啥的，鄙人不图其他，图个能帮助到更多的蚂蚁淘的战友们。也欢迎跟帖提问。我不定期回答大家的疑问。欢迎分享、转发、收藏给您的好友、同事、同学及***等。好东西请别自己独自藏着掖着。
预祝您实验顺利！
这个部分的PS也很重要，希望能够引起，特别是土豪们的注意。那就是关于癌细胞株用来从事科学研究之我见，供参考。欢迎战友们补充。土豪我们做朋友吧。嘻嘻！
PS一三事：（土豪请重视）
1.在癌细胞系上做基因敲除，科学家有此想法由来已久。HGP后，科学家能够读取基因信息，RNAi现象的发现被很快开发并运用到基因的敲低工作中来，虽然不能达到彻底敲除的目的，但至少在那个时代，在各方面数据及对照做足的情况下，给科学进步确实带来了很大帮助。
2.做过癌细胞株染色体相关的工作的科学家一定看过或者一定知道癌基因组的Variety是非常大的，很多时候对门实验室养的Hela细胞或者293T细胞和自己养的情况都不一定一样。染色体的各种缺失、多拷贝、异位、反转等等情况时有发现及发生，也不断在癌化当中。
3.针对2中的考虑，如果我们所研究的基因恰恰与癌细胞株的种种变异相关上，在此癌细胞株上做基因敲除就会有各种风险，土豪们需要额外注意选择一个合适的细胞系可能很关键。
4.所感兴趣基因的功能对于癌细胞本身的生长等是否会造成影响，这点的风险其实对于做基因敲除来讲也是存在的，虽然一般不会有大的影响。
5.根据我们的经验，至少CRISPER-Cas9技术基因敲除细胞系获得杂合子敲除（包含三整倍数aa的缺失或插入）阳性细胞克隆的获得概率约为10%；纯合子获得概率约为30%。不同基因情况不同，数据仅供参考，有时或高或低。
6.如果一次很难获得基因敲除纯合子的癌细胞克隆，癌细胞无法实现小鼠繁育类似的杂合子间交配获得纯合子，只能再次转染筛选。
7.不管是癌细胞培养还是RNAi技术（主要指shRNA），都是在一定的特殊历史时期或者科学家经费有限情况下的特殊时期的“无奈”选择。那个年代获得基因修饰动物及饲养动物成本要肯定远远比培养细胞高多了。
8.RNAi技术所在的一个特殊历史阶段，科学家无法很快及较低成本做到细胞系或小鼠个体水皮上的彻底敲除，只能退而求其次，实现在细胞或小鼠上敲低，再辅以其他数据与严格对着呼应。
9.如果土豪您有能力，请告诉我们您的心声，截止2014年获得CRISPER-Cas9基因敲除、基因敲入、基因条件性敲除、多基因、基因大片段（如两个，三个、甚至更多）敲除的小鼠获得的周期及成本越来越低。
10.动物水平实验研究的意义要远远超过细胞株实验的意义，这点自不必说。但细胞株实验的较高通量来筛选候选基因也有其固有的优势。
11.从整个细胞株建系周期及成本上看，和基因敲除动物相比，彼此彼此，没有绝对的优势。
CRISPER-Cas9技术筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol-上海南方模式生物研究中心.pdf(310.12k)
CompoZrCustomZincFingerNuclease(ZFN)TechnicalBulletin-GenomeEditingProtocol.pdf(817.12k)
利用CRISPRCas9特异敲出microRNA基因家族的方法123
2楼司马笑逞鼏2021-08-10
我想理论上应该行不通吧？还是用基于同源重组的策略吧。在MicroRNA基因上或附近用CRISPR制造DSB，同时转同源重组载体来增加效率是可行的。
质粒转染细胞 实验方法123
eosrtihlear2017-10-03
如果提质粒的试剂盒没有去内毒素功能提出的质粒一般就有内毒素
【求助】RNA干扰技术 核酸基因技术讨论版论坛123
huihan19822021-07-29
新手上路，请大家多多关照，我是一名研究生，现在正在做RNA干扰方面的实验，可是却不知道RNA干扰的具体步骤，需要什么试剂，在网上查了半天也查不到，所以到这里来求助各位前辈，希望各位以前做过或者现在正在做这方面研究的前辈们能给指点一下迷津，在此谢谢了。
罗氏转染试剂转染后显微镜下出现许多小亮点,需要换培养基么？可以...123
lordwish2021-07-30
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