一个月内，顶级学术期刊连发两篇顶级论文！上半年引爆生物圈的华人科学家张锋教授团队又有新动作！这次，他在一月内，分别在《Nature》、《Science》连发两篇论文！他将CRISPR-Cas13a改造成了灵敏度达到了阿摩尔级（aM，10的负18次方摩尔每升），可以检测单分子的SHERLOCK技术。而这其中，RPA起到了不小的作用。
那么，什么是RPA呢？
RPA,即重组酶聚合酶扩增技术，是在由多种酶和蛋白的参与下，在恒温条件下实现核酸指数扩增的技术，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。
RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，最佳反应温度在37°C左右。
RPA的反应原理
RPA的反应过程，首先是重组酶与引物结合，形成蛋白-DNA复合物。接着在dsDNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。而被替换的DNA链与SSB（单链DNA结合蛋白）结合，防止进一步被替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。
RPA与相关技术的比较
与PCR实验相比，RPA实验能在恒定温度下进行全程实验，没有复杂的操作，对仪器及人员的要求不高，适合基层或现场快速诊断。
而另一种新兴技术，LAMP(Loop-mediatedisothermalamplification),中文名为“环介导等温扩增反应”，由于其简便的操作，也被视为PCR技术强有力的竞争者。在此，让我们对比下LAMP与RPA两种试剂盒进行的实验：
RPA试剂盒 | ||
主要组分 | 链置换DNA聚合酶 | 重组酶；单链结合蛋白；链置换DNA聚合酶 |
最适反应温度 | 60-65℃ | 37-40℃ |
推荐反应时间 | 40min左右 | 20min左右 |
引物数 | 2对 | 1对 |
保存形式 | 液体 | 冻干粉；液体 |
检测方式 | 荧光目视；比浊法实时浊度仪 | 电泳；试纸条；荧光定量 |
扩增产物可否用于下游应用 | 否 | 是 |
可否Multiplex/多重反应 | 否 | 是 |
缺点 | 气溶胶，易产生假阳性 | 价格高 |
英国TwistDx公司（前身为ASM科技有限公司）成立于1999年，基于英国剑桥Babraham研究院建立的生物技术公司。该公司通过突破等温DNA扩增，开发的重组酶聚合酶扩增专利技术（RPA），被誉为DNA诊断领域的革命性创新。
TwistDx以此技术为基础生产的核酸扩增类产品，能在恒定且较低的温度下，仅用10~20分钟，进行单分子核酸检测。这一技术对环境、硬件设施的要求很低，对于生物防护、水体检验、食品检验、医疗诊断、微流体、兽医等方面都有良好的应用。
RPA扩增的各种体系试剂盒中，含有DNA、RNA扩增所需的所有试剂，研究者只要准备好引物和模板就行了。扩增结果可以分别通过凝胶电泳检测、荧光定量检测或试纸条检测，产物纯化后可用于下游研究。
