- Specification
- Product Description:
- AHR (Human) Cell-Based ELISA Kit is an indirect enzyme-linked immunoassay for qualitative determination of AHR expression in cultured cells.
- Reactivity:
- Human, Mouse, Rat
- Storage Instruction:
- Store the kit at 4°C.
- Protocol:
- Protocol Download
- Suitable Sample:
- Attached Cell, Loosely Attached Cell, Suspension Cell
- Label:
- HRP-conjugated
- Detection Method:
- Colorimetric
- Regulation Status:
- For research use only (RUO)
- Datasheet:
- Download
- Applications
- Qualitative
- Application Image
- Qualitative
- AHR
- AHRR
- Gene Information
- Entrez GeneID:
- 196
- Protein Accession#:
- P35869 (Gene ID : 196);A9YTQ3 (Gene ID : 57491)
- Gene Name:
- AHR
- Gene Alias:
- bHLHe76
- Gene Description:
- aryl hydrocarbon receptor
- Omim ID:
- 600253
- Gene Ontology:
- Hyperlink
- Gene Summary:
- This gene encodes a ligand-activated transcription factor involved in the regulation of biological responses to planar aromatic hydrocarbons. This receptor has been shown to regulate xenobiotic-metabolizing enzymes such as cytochrome P450. Its ligands included a variety of aromatic hydrocarbons. [provided by RefSeq
- Other Designations:
- AH-receptor,aromatic hydrocarbon receptor
- Gene Information
- Entrez GeneID:
- 57491
- Protein Accession#:
- P35869 (Gene ID : 196);A9YTQ3 (Gene ID : 57491)
- Gene Name:
- AHRR
- Gene Alias:
- AHH,AHHR,KIAA1234,MGC167813,MGC176630,bHLHe77
- Gene Description:
- aryl-hydrocarbon receptor repressor
- Omim ID:
- 606517
- Gene Ontology:
- Hyperlink
- Gene Summary:
- Dioxin is a teratogen that exerts its effects through the arylhydrocarbon receptor in conjunction with the receptor"s binding partner, arylhydrocarbon receptor nuclear translocator. The protein encoded by this gene represses signal transduction by the arylhydrocarbon receptor by competing with the arylhydrocarbon receptor nuclear translocator for binding to the arylhydrocarbon receptor. Expression of the repressor is stimulated by the receptor/translocator heterodimer, thereby regulating receptor function through a negative feedback mechanism. In addition, the encoded protein can bind to nuclear factor kappa-B. [provided by RefSeq
- Other Designations:
- aryl hydrocarbon hydroxylase regulator,aryl hydrocarbon receptor regulator,arylhydrocarbon receptor repressor,dioxin receptor repressor
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为适应医疗器械监督管理工作的需要,总局组织有关单位和专家对恒温核酸扩增检测仪等22个产品的管理类别进行了界定。现通知如下:
一、作为Ⅲ类医疗器械管理的产品(1个)
恒温核酸扩增检测仪:由检测系统、加热模块、温控系统、触摸屏和随机软件组成。基于荧光检测的恒温核酸扩增检测技术,定性检测样本中的目标核酸有无扩增。分类编码:6840。
二、作为Ⅱ类医疗器械管理的产品(7个)
(一)免疫磁微粒捕获仪:由蠕动泵、管路、永磁铁及其他必要辅助器具组成。用于磁微粒免疫分析中捕获磁微粒复合物,是临床免疫磁微粒检验分析的前处理设备。分类编码:6841。
(二)精液采集器:由精液收集套、润滑剂、精液采集管、采集漏斗、袖珍剪组成。产品以无菌型式提供。临床上用于收集成年男性精液,为评价男性生育能力提供完整标本。分类编码:6841。
(三)干式血细胞微量样品测试管:由测试管体、封管器、浮子、肝素钠抗凝剂和荧光吖啶橙染料组成。用于收集末梢血样和静脉血样,临床上与干式血细胞计数仪配合使用,对样本染色、抗凝和分类。分类编码:6841。
(四)胎盘生长因子检测试剂盒(时间分辨荧光法):由校准品、铕标示踪抗体、分析缓冲液、生物素抗体、链霉亲和素微孔板条、条形码标签等组成。用于定量测定孕妇血清中的胎盘生长因子。临床上用于辅助筛查妊娠妇女孕早期唐氏综合症风险。分类编码:6840。
(五)脂联素检测试剂盒(免疫比浊法):由试剂1(缓冲液)和试剂2(乳胶抗体试剂)组成。用于体外定量检测人血清或血浆中脂联素浓度。临床上用于评估2型糖尿病和心血管疾病的风险。分类编码:6840。
(六)小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒(直接清除法):由试剂(含过氧化氢酶、胆固醇氧化酶、胆固醇脂酶、显色剂的缓冲液)和试剂(含过氧化物酶、酶稳定剂、显色剂的缓冲液)组成。用于体外定量检测人血清中小而密低密度脂蛋白胆固醇的含量,临床上用于动脉粥样硬化的辅助诊断。分类编码:6840。
(七)尿液游离LamBDa-轻链测定试剂盒(免疫比浊法):由定标液、试剂缓冲液和试剂(游离Lambda-轻链抗血清)组成。用于体外定量测定尿液游离Lambda-轻链浓度,临床上用于单克隆丙种球蛋白增多症的辅助诊断。分类编码:6840。
三、作为第Ⅰ类医疗器械管理的产品(13个)
(一)制片染色一体机:通常由离心模块、制片模块、染色模块、控制系统等功能模块组成。用于病理分析前对人体细胞或细菌样本进行制片及染色。分类编码:6841。
(二)细胞分离制片染色一体机:通常由控制系统、过滤器、多路阀注射泵、贮液瓶、废液瓶等组成。适用于病理分析前对人体外周血或组织样本中细胞的分离、过滤、制片和染色。分类编码:6841。
(三)试剂卡孵育器:由塑料外壳、温控模块、电器元件组成。用于特定试剂卡的孵育。分类编码:6840。
(四)细胞过滤采集器:由软管、过滤收集病变细胞装置、抽吸装置组成。用于病理分析前对人体内脱落病变细胞的采集。分类编码:6841。
(五)液基细胞和微生物处理、保存试剂:主要由细胞保存液、细胞裂解液、提取液、稀释液、消化酶、防腐剂等及必要的细胞承载或制片器具组成。用于临床检验分析前细胞或微生物的保存、运输、提取、分离、沉淀、固定、制片等。分类编码:6840。
(六)病理分析前处理试剂:主要由组织固定液、组织脱水液、透明液、清洗剂等组成。用于病理分析前组织标本的固定、梯度脱水、透明、浸蜡和包埋制片。分类编码:6840。
(七)脱蜡液:由脱蜡液、防腐液、专用水等组成。用于对样本进行染色前预处理,去除石蜡包埋组织样本上的石蜡。分类编码:6840。
(八)触发缓冲液:由0.9%的氯化钠等渗溶液组成。与血小板功能分析仪及配套检测试剂盒配套使用,用于在检测前润湿生化活性膜。分类编码:6840。
(九)流式细胞分析用鞘液:由含盐缓冲液和防腐剂组成。用于与流式技术相关的分析中对样本进行检测时形成鞘流,以利于仪器进行计数分析。分类编码:6840。
(十)流式细胞分析用溶血剂:由浓度小于2%的甲醛和浓度小于15%的甘油组成。用于快速裂解人类外周血中红细胞,维持白细胞基本形态,临床上用于流式细胞仪检测前样本处理。分类编码:6840。
(十一)抗体稀释液:由缓冲液和防腐剂组成。用于临床检验时抗血清的稀释。分类编码:6840。
(十二)溶痰剂:由次氯酸钠、表面活性剂组成。用于抗酸染色前痰标本的均质化处理,以提高阳性检出率。分类编码:6840。
(十三)精液液化剂:由菠萝蛋白酶和蔗糖组成。用于精液检查前促进液化迟缓的精液标本的液化、降低精液的粘稠度。分类编码:6840。
四、不按照医疗器械管理的产品(1个)
瓷珠菌种保存管:由表面多孔的小瓷珠、胰蛋白脉大豆肉汤、甘油和蔗糖按一定比例混合组成。用于微生物检验中菌种的保存。
自本文件发布之日起,对于不作为医疗器械管理的,如已受理尚未完成注册审批的,食品药品监管部门应按规定不予注册,相关注册申请资料予以存档。尚在有效期内的医疗器械注册证书不得继续使用。
食品药品监管总局办公厅
2015年6月11日
如果要测量细胞表面2个受体的比率,最好用流式细胞仪来测量
荧光定量PCR数据如下表,想通过GraphPadPrism5软件构建柱状图,但不知道是将2-△△Ct数据导入GraphPadPrism5软件,还是将Mean和SD导入GraphPadPrism5软件中。请大神赐教。另外Mean和SD是求的△△Ct的还是2-△△Ct的?
目前各家仪器公司推出自己的数字PCR,目前市场主流的是三家,1、LIFETechnologies3D数字PCR(芯片式数字PCR):我个人认为是微孔数字PCR,主要是将20ul反应体系分散到20000个微孔中进行反应,变成20000个反应体系,PCR反应结束后,采用CCD拍照,数阳性反应孔。2、Bio-Rad的微滴数字PCR(油包水原理):将20ul反应体系采用液滴反应器形成20000个油包水反应体系,PCR反应结束后,才有流式细胞术的原理,检测每一个液体,数阳性反应的液滴数量。3、RainDance的数字PCR(油包水原理)、原理与伯乐微滴数字PCR相同,但是其液体形成能力比伯乐强很多,理论上可以产生1000万个小油滴。价格从高到底:Raindance、Bio-Rad、LIFETechnologies。目前本人使用的是Bio-RadQX200、正在做实验室,希望广数字PCR的使用者可以相互交流,相互解答疑问,更好的利用数字PCR。
原理?(没有就算了...)
答的好的提高悬赏50分
有原理的追加50分
谢谢啊~~~~
酶切体系(参考):
质粒17ul
buffer2ul
酶1ul
----------37度,过夜。
酶切位点
在质粒上,所选的两个酶的酶切位点不可以靠的太近,如6bp
建议载体质粒不要用双酶切,用两次单酶切之后切胶回收.另外建议加多以下两个个步骤:
1.PCR产物的酶切片断做TA克隆,之后再酶切回收,与载体相连.
2.目的片段与载体连接之后建议先转化DH5α这些容易转化的菌株.然后筛选到的阳性克隆测序之后,提质粒,用质粒转化BL21,转化率很高.质粒不一定要新鲜提取,我的质粒放在-20度冻了大半年,作为载体完全没问题,只要确定不降解.
酶切的量、小提的质粒浓度和纯度
浓度:
根据我的实验,OD值0.5左右吧,不一定很准确。260:280通常是1.8左右。3ml菌过夜,进行小提,并没有对OD限定.小提的效果好不好主要决定于你的溶液I,II,III的质量以及你的操作手法,
特别是加溶液II时最为关键。现在有很多试剂盒既便宜效果又好,条件允许的话可以考虑购买。
琼脂糖电泳目测,不一定测OD,连接比例更重要.
质粒表达载体不用测序的,通常都是跑电泳看一下质量,然后再根据图谱选择适当的酶,看能不能够切开,如果能够切开,基本上就可以采用了。
纯度:
酶切对质粒的纯度要求高,如果蛋白和RNA去的不干净会影响酶切;
我们用于酶切的质粒的ratio值一般在1.8左右。
酶量;
在量上最好不超过酶的酶切能力,一般酶都为10U/ul,就是说酶切体系里加
1ul的酶可以在合适的温度下,1小时内消化10ugDNA,但在实际操作当中
一般酶都是过量的,而且延长了酶的作用时间,比如作用6小时。
因为酶切产物用于连接,所以我们酶切时质粒的用量尽量多,用20ul的体系
时可以如下加样,我们也有用50ul的体系切过。
回收目的片段与阳标一起进行酶切:
PCR后,电泳回收目的片断(比如玻璃奶或者一次性回收柱回收),再进行酶切。除非产物非常特异,直接酶切PCR产物效果有时不是很好,还有一般PCR体系里过量得dNTPs会影响酶切效果。酶切后,可以用标准得乙醇沉淀法沉淀酶切产物,获得高纯度得酶切产物,也即是你的黏性目断片断供后边得试验。而DNA的纯度对酶切效果是有很大的影响的。而酶切时应加个阳标(如含相应酶切位点的质粒载体)来确定酶和酶切体系是不是work的。如果这两步没问题,你的酶切肯定能顺利的。如果有阳标一起来切,容易找出问题的所在。
酶切不下
酶切这一步,本来问题不大,你严格按说明书上的要求进行就行了,包括酶量,酶切体系以及DNA的量也要按要求加入。而DNA的纯度和浓度是有必要测定的,最好OD260/280要接近2.0。DNA的量过大或是纯度太低都会影响酶切效果。万一如果无法充分酶切,但有所需要的片段,就可以根据Markers的位置回收所需片段。
因为基因组大部分是甲基化的,酶切不下来的原因一可能是内切酶活性低,或者是基因组杂质含量较高,或者盐离子浓度太高(不同的酶有不同的盐浓度).还有就是基因组酶切酶的量要求比较多,大概1ugDNA/10u酶,如果不行还可以加大量,酶量不能超过酶切体系的1/10,浓度过高里面的甘油会影响酶的活性。接头5-端是去磷酸化的,这样就可以避免接头自连,pcr结果就会有东西出来。
连接酶反应温度
空掉开低一点,一般16度连接2-3小时;
放进4度冰箱中,连接过夜,16小时
多片段连接:
将三个片断放在一起连的,效果的确不好.还是应该一个一个地连接.
连接比例
我用T载体连接PCR产物,请问片段和载体的摩尔比怎么选择连接效率好?根据什么因素来调节?有没有经验值?
一般片段:载体=3~8:1。根据片段的大小、连接时间、温度、感受态细胞等因素来调节。经验值就是3~8:1。4度连接过夜,用新鲜制备的感受态细胞,一般可以得到很好的克隆效率。
补充一句:如果PCR产物片段比较大(>1kb)的话一般用3:1的比例,如果比较小就几百bp的话用>3:1的比例连接效率能高一些。3-10:1一般没问题.
建议仔细参看Teasy的说明书
接头处理
接头的处理和连接这一步其实是挺头疼的。建议先制备和接头两粘端连接的线性质粒分子。因为这对于你接头是否完成了磷酸化和退火处理提供了一个评价体系。你接头处理完,并通过评价,你就可以放心用了。退火时的处理一般要使用专门的annealingbuffer,否则效果不好。而对于粘端连接来说,应该问题不大,唯一担心的是能进行连接的片段太少了,影响下面的PCR扩增,所以酶切这一步是很关键的。
最后一步是高保真PCR,首先建议用Taq酶进行扩增,然后再用Pfu酶扩增,因为后者效率比较低。其实你用Taq酶如果扩出来,测序经blast/n后,如果有突变,你也完全可以根据正确的序列重新设计引物将之调出来。
注意感受态
如果还是不行,建议检查一下感受态菌的质量。
我的感觉是感受态很重要,你可以转化连接产物的同时用纯质粒转化进行感受态活性的验证,后者取1ul转化,10ul涂板,好的感受态一般要长50个菌落以上。其次是连接体系,目的片断与载体的摩尔比为3-10:1,除此,连接酶也很重要,最好不要使用储存太久的酶,建议你下次做的时候用别人的酶试一下。
转化要用空质粒作对照,保证感受态没问题,细菌一般长12到16小时就形成可见的菌落,转化后的菌落一般比为转化的菌落小一些。
在另外的一组管子中,加入已知拷贝数的DNA同时扩增,每个管子中加入的数量是不同的,但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。
PCR反应完成后,把已知拷贝数DNA的量和PCR荧光Ct值制成标准曲线,再把待测样本的CT值和该标准曲线比对,就可以得到样本中的起始拷贝数了