大鼠乙酰胆碱酯酶(AChE)测定试剂盒
| 实验材料 | 噬菌体 试剂、试剂盒 | LB顶层琼脂糖氯仿SMMgSO4 仪器、耗材 | 培养箱牙签硝酸纤维素膜 实验步骤 | 1. 在直径82mmLB平极上倒入含200μl宿主菌的3ml0.7%顶层琼脂糖，放置10min。 2. 通过放射自显影胶片上的杂交斑点确定阳性噬斑在原平板上的位置，用牙签轻轻插入斑中。 3. 然后接种到步骤1制备的次级平板的顶层琼脂糖中，此牙签在平板上接连插30~40下。 4. 或用吸管插入阳性噬斑的位置，取一小块环形琼脂糖转入1mlSM中。 5. 加入1滴氯仿，放置1~2h，滴定，制备3~6个平板，每个平板的噬斑数应小于500个。 6. 次级平板置37℃过夜培养，将噬菌斑影印到硝酸纤维素滤膜上。 7. 再依次处理、杂交、洗膜和曝光，然后在次级平板上找出对应的阳性噬菌斑。 9. 对每个克隆，将牙签插入杂交信号最强的噬菌斑中，并在1mlSM中放置5min。 10. 将1μl噬菌体贮存液。1μl和10μl1：100稀释液铺三级平板。 11. 按以上步骤筛选第三级平板上的噬斑。 12. 重复这一纯化过程，直至获得纯的噬斑为止，并将纯的噬菌体保存在SM中。 |
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发布于 ： 2021-07-26
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