—维生素C可改变重要表观遗传修饰酶功能
货号: | P1041/P1042/P1043/P1044 |
供应商: | 东盛生物 |
数量: | 大量 |
保存条件: | -20℃保存2年。 |
规格: | 250U/1000U/3000U/18000U |
货号
P1041 | P1042 | P1043 | P1044 | |
规格 | 250U | 1000U | 3000U | 18,000U |
OptimusTM HotstartTaqDNA聚合酶(5U/μl) | 50μl | 200 μl | 200 μlx3 | 100μlx36 |
10×HotstartBuffer(Mg2+ plus) | 1.25ml | 1.25mlx2 | 1.25mlx6 | 1.25mlx36 |
6×LoadingBuffer | 1ml | 1ml | 1ml |
保存条件
-20℃保存2年。
产品说明
东盛HotstartTaqDNA聚合酶是一种创新型的化学修饰热启动酶,该酶在室温下活性被完全封闭,依赖温度激活酶活性,可有效减少非特异性扩增,具有非常高的特异性。扩增片段长度可达5kb(简单模板)。延伸速率为0.5kb/min(70-75℃)。该酶具有5-3聚合酶活性,无3-5外切酶活性。扩增产物具有3-dA末端。东盛HotstartTaqDNA聚合酶采用先进的化学修饰技术生产,动物源性DNA污染为0,稳定性更强,具有抗体法热启动酶不可比拟的优势,同时,预变性时间缩短至3分钟,工作效率比大多数化学修饰法热启动酶更高,是一款非常新颖、实用的产品。
活性定义
一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30min内,摄入10nmol全核苷酸所需的酶量。
质量控制
相关测试表明无外源核酸内切酶或核酸外切酶污染;PCR检测无宿主残余DNA,能有效特异地扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,扩增活性无明显改变。
10×HotstartBuffer
50mMKCl
100mMTris-HCl
200mMNH4Cl
20mMMgCl2
酶贮存液
200mMTris-HCl
1mMDTT
0.1mMEDTA
100mMKCl
0.5%Tween 20
50%Glycerol
0.5%TritonX-100
应用举例
反应体系
λ DNA(2.5ng/μl) | 1μl |
引物1(10μM) | 2μl |
引物2(10μM) | 2μl |
10× HotstartBuffer | 5μl |
dNTP(2.5mM) | 4μl |
HotstartTaq(5U/μl) | 0.5 -1 μl |
超纯水 | 补足至50μl |
反应条件
94℃ | 3min |
94℃ | 30 sec |
55-68℃ | 30sec |
72℃ | 1-2min |
72℃ | 10min |
注意事项
1本产品采用改进的化学修饰技术,依赖温度激活DNA聚合酶,能有效抑制非特异性结合,可在室温下配置反应体系。
2HotstartTaqDNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3末端通常会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷。
3模板DNA推荐用量(50μl标准PCR体系)
人类基因组DNA | 0.1-1μg |
λ DNA | 0.5-5ng |
质粒DNA | 0.1-10ng |
大肠杆菌DNA | 10-100ng |
Q&A
HotstartTaqDNA聚合酶的特异性为何高于普通TaqDNA聚合酶?
答:HotstartTaqDNA聚合酶是采用化学修饰技术对普通TaqDNA聚合酶进行了修饰,室温下活性被完全封闭,需要依赖温度激活DNA聚合酶。低温时酶活性被抑制,高温时酶被激活,均在极短时间内完成。每一步反应都会有低温抑制、高温激活的效果,所以特异性更好。
HotstartTaqDNA聚合酶的扩增产物能否直接进行TA克隆?
答:可以。
温馨提示:不可用于临床治疗。
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发布于 : 2020-01-05
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