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Excellgen/E. coli Uracil DNA Glycosylase, UDG/EG-1019/1,000 Units
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E.coliUracil-DNAGlycosylase(UDG),alsoknownasUracilN-Glycosylase(UNG),catalysesthereleaseofuracilfromuracil-containingDNA.UDGefficientlyhydrolyzesuracilfromsingle-strandedordouble-strandedDNA,butnotfromshortoligonucleotides(<6bases),orRNAsubstrates.

Applications
  • Digestionofuracil-containingDNA
SourceAnE.colistrainthatcarriestheung(Uracil-DNAGlycosylase)genefromE.coliK-12.
UnitDefinitionOneunitisdefinedastheamountofenzymethatcatalyzesthereleaseof60pmolofuracilperminutefromdouble-stranded,uracil-containingDNA.
Components
  • EcoliUDG:5,000units/mlin10mMTris-HCl,50mMKCl,1mMDTT,0.1mMEDTA,50%Glycerol,pH7.4@25°C
  • 10XReactionBuffer:200mMTris-HCI,10mMDTT,10mMEDTA,pH8.0@25°C
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B、血浆凝固酶 C、透明质酸酶 D、DNA酶 E、溶血素S查看答案您可能感兴趣的试题 下列物质中免疫原性最强的是( ) A.核酸 B.蛋白质 C.多糖 D.半抗原 E.脂... 查看更多>
答案解析 左心衰竭最早出现的症状是( )。 A.劳力性呼吸困难 B.心源性哮喘 C.端坐呼吸 D.咯粉红色泡沫痰 E.夜间阵发性呼吸困难 答案解析 湖南... 查看更多>
DNA 甲基化修饰作为一种重要的表观遗传修饰,能通过影响染色质结构、DNA 构想、稳定性以及蛋白质相互作用方式等,起到调控基因表达的作用。与多种肿瘤的发生、发展密切相关。DNA 甲基化水平和模式的改变是肿瘤发生的一个重要因素。这些变化包括 CpG 岛局部的高甲基化和基因组 DNA 低甲基化状态。它是由 DNA 甲基转移酶(DNA methy-transferase,Dnmt)催化,以 3-腺苷甲硫氨酸( 查看更多>
1.50ml离心管,RCF:30000,PP,无RNA/DNA酶,无热源 查看更多>
2021-08-30
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50ml离心管,RCF:10000,带泡沫底座,PP,无RNA/DNA酶,无热源无菌 查看更多>
问题补充:1.[单选题]与细菌侵袭力无关的酶是A.血浆凝固酶 B.氧化酶 C.DNA酶 D.卵磷脂酶E.透明质酸酶ABCDE 网友答案:参考答案:B 参考解析:氧化酶是细菌... 查看更多>
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2021-09-17
分子生物 查看更多>
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产气荚膜梭菌产生的α毒素是() A、胶原酶 B、DNA酶 C、蛋白酶 D、卵磷脂酶 E、透明质酸酶 请帮忙给出正确答案和分析,谢谢!... 查看更多>
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不存在不能被DNA水解酶水解的DNA。
  DNA水解酶,用于切断磷酸二酯键的酶,这些酶使糖-磷酸酯主链上的磷酸二酯键水解.一般分为两种:外切核酸酶和内切核酸酶。
  简介:
  原理

  DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
  但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
分子克隆常用工具酶 123
掏心专用03602017-11-27
分子克隆中常用的工具酶连接酶、T4 多核苷酸激酶、碱性磷酸酶、核酸酶、琼脂糖酶、蛋白酶、溶菌酶以及一些DNA 结合蛋白。
  分子克隆在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因,用体外重组方法将它们插入克隆载体,形成重组克隆载体,通过转化与转导的方式,引入适合的寄主体内得到复制与扩增,然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体,可以得到插入DNA的许多拷贝,从而获得目的基因的扩增。
  工具酶:基因工程涉及众多的工具酶可粗略的分为限制酶,连接酶,聚合酶,核酸酶和修饰酶五大类。其中,以限制性核酸内切酶和DNA连接酶在分子克隆中的作用最为突出。
想请问各位,甲基化修饰后测量DNA的浓度一般是多少啊?
修饰前有250ng/ul,修饰后只有25ng/ul,请问你们测的修饰后的浓度有多少?我的值正常吗?
这个浓度做pcr行吗?要上多少微升dna啊。

本人是DNA跑变性PAGE的小白,现在正在设计实验,DNA单链上带有Biotin修饰,跑变性PAGE后,转膜敷抗体,要用什么抗体显biotin呢?是直接用biotin的二抗吗?求教各位大神~~~~

DNA酶切及凝胶电泳 123
挚爱小慧oDV2017-11-27
限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用,它们是重组DNA的基础。向左转|向右转
研究称DNA修饰可控制个体恐惧感来自昆士兰大学昆士兰脑研究所的神经学家或许发现了控制个体产生恐惧感的方法
对许多人来说,类似乘坐飞机或看到蜘蛛在地板上爬过这样的经历,并不只是简单地导致心跳加速和手心出汗,而是已经成为严重的恐惧症,能带来沉重的焦虑。近日,一个国际研究团队的论文指出,他们或许发现了通过DNA修饰来控制个体恐惧感的方法。
昆士兰大学昆士兰大脑研究所(QBI)的高级研究员、神经科学家TimothyBredy博士称,研究团队阐明了如何缓解与恐惧相关的记忆,特别是在恐惧症或创伤后精神压力障碍的病例中。
TimothyBredy博士称,他们已经发现了与消除恐惧有关的基因调控新机制。这种机制是一种抑制性的学习过程,当无需做出反应的时候,这一过程对于控制个体的恐惧至关重要。Bredy说:“基因运作的方式并不是静态的,而是动态变化的,能随着我们每天的生活经验而改变,与情绪有关的事件会产生显著的影响。”
通过了解在不改变内在序列的前提下改变DNA功能的机理,可以为未来开发与恐惧相关的焦虑症靶向疗法提供依据。Bredy说:“通过新型的表观遗传学调控模式对基因实施靶向作用,选择性地加强消除恐惧的记忆,从而达到想要的效果。”
研究团队中的博士生XiangLi说,恐惧消除是个体快速行为适应的一个明显例子。恐惧消除过程中的障碍与焦虑症(恐惧相关的)的出现具有密切联系。Bredy博士称,该研究首次综合分析了DNA修饰如何影响恐惧的消除。参与这项研究的还有来自加州大学欧文分校和哈佛大学的学者。相关研究结果发表在近期的《美国科学院院刊》(PNAS)上。
原文检索:
XiangLi,WeiWei,Qiong-YiZhao,JocelynWidagdo,DanayBaker-Andresen,CharlotteR.Flavell,AnaD’Alessio,YiZhang,andTimothyW.Bredy.NeocorticalTet3-mediatedaccumulationof5-hydroxymethylcytosinepromotesrapidbehavioraladaptation.PNAS,April22,2014;doi:10.1073/pnas.1318906111
基因克隆技术
摘要:随着转基因技术的发展,获取目的基因片段的方法也越来越多样化,获取目的基因片段的技术也日新月异,但是无论获取的方法和手段怎么样发展,获取的主要思路始终在围绕一根主线在开展。
关键词:基因 ,遗传效应,基因克隆,体外重组
一、基因工程
基因工程作为一门理论性与实践性较强的学科,其方法与技术已经渗透到现代生命科学的各个分支领域,成为生命科学的一门核心技术。基因工程包含许多独特的实验方法和技术,不仅内容丰富,涉及面广,实用性也强。基因工程是通过DNA 重组技术, 获得具有特殊生物遗传性状和功能的遗传工具生物体, 基因工程技术广泛应用于农业、医学、食品工业等。本文就基因工程的应用现状综合阐述。
基因工程技术是一项极为复杂的高新生物技术, 它利用现代遗传学与分子生物学的理论和方法, 按照人类所需, 用DNA 重组技术对生物基因组的结构和组成进行人为修饰或改造, 从而改变生物的结构和功能, 使之有效表达出人类所需要的蛋白质或人类有益的生物性状。基因工程从诞生至今, 仅有30 年的历史, 然而, 无论是在基础理论研究领域, 还是在生产实际应用方面, 都已取得了惊人的成绩。首先,基因工程给生命科学自身的研究带来了深刻的变化。目前科学家已完成了多种细胞器的基因组全序列测定工作。其次, 基因工程具有广泛的应用价值, 能为工农业生产、医药卫生、环境保护开辟新途径。
基因工程( 又称DNA 重组技术、基因重组技术) , 是20 世纪70 年代初兴起的技术科学, 是用人工的方法将目的基因与载体进行DNA重组, 将DNA 重组体送入受体细胞, 使它在受体细胞内复制、转录、翻译, 获得目的基因的表达产物。这种跨越天然物种屏障, 把来自任何生物的基因置于毫无亲缘关系的新的寄主生物细胞之中的能力, 是基因工程技术区别于其他技术的根本特征。 基因工程研究内容为:
(1) 从复杂的生物有机体基因组中, 经过酶切消化或PCR 扩增等步骤, 分离出带有目的基因的DNA 片段。
(2) 在体外, 将带有目的基因的外源DNA 片段连接到能够自我复制并具有选择记号的载体分子上, 形成重组DNA分子。
(3)重组DNA 分子转移到适当的受体细胞, 并与之一起增殖。
(4) 从大量的细胞繁殖群体中, 筛选出获得了重组DNA 分子的受体细胞克隆。
亚硫酸氢盐修饰DNA步骤
一、内切酶作用体系:(自建立,试过,效果很好)
EcoRⅠTaKaRa消化DNA37℃3h
ddH2O11ul
H溶液2ul
EcoRⅠ1ul
DNA6ul
37℃孵育3h
二、亚硫酸氢盐修饰过程:(翻译稿)
1.用适合的内切酶消化大分子量的DNA(避免目的基因被切割),或者通过把DNA悬于蛋白酶k/SDS缓冲液,通过26gaugeneedle5次,37℃孵育30min(降低DNA大小,利于充分变性)
2.加2.2ul新鲜配制的3MNaOH到18ulDNA样品中,搅拌混匀,短暂离心。
3.37℃孵育15min。(有的资料介绍说可以42度20min)
4.90℃孵育2min(95度5nin也可),置于冰上,短暂离心。
5.加208ul饱和的Na2S2O5PH5.0(BDH)。(加7.6gNa2S2O5到15ml水,加464ul新鲜配制的10MNaOH)
6.加12ul10mM氢醌(55mg加水50ml氢醌),混匀并短暂离心
7.加200ul矿物油,防止水分蒸发,限制氧化。
8.55℃孵育4-16h(水浴)。
9.吸弃上层矿物油。
10.①加1mlPromega’sWizardDNAClean-upresin按照指导书进行脱盐处理。每个管与2.5ml注射器相连,(注意连接紧)用吸管吸到注射器,底加2ml的离心管;轻轻加压,不要弄破膜;②加2ml80%的异丙醇洗涤,离心10000rpm,30s,底换管;柱子换到新1.5ml尖EP管,弃注射器;③加50ul预热水(60-70℃)放2-3min;离心(柱子与离心管一起,10000rpm,30s,DNA到EP管,弃柱子;
11.加50ul水到minicolumn室温下静置5min
12.离心20s收积洗提液,弃掉minicolumn
13.加5.5ul3MNaOH然后37℃孵育15min
14.短暂离心
15.加1ul糖原(10mg/ml)
16.加33.3ul5MNH4OAcetatePH7.0
17.加330ul冷(-20℃)100%乙醇,充分混匀
18.-20℃过夜(或者-70℃30min)
19.4℃下14000rpm离心15min
20.弃上清,加70%乙醇洗涤,4℃下14000rpm离心15min。
21.重悬DNA于10ul水中,室温下静置~2h,间隔旋涡振荡
22.-20℃保存DNA
hotstar酶做PCR,或者做Q-PCR
作为生物体四大有机分子之一,糖的代谢是整个生物代谢的中心。它既是植物的生长发育过程中重要的结构组分,又是一种细胞间用于通讯的信号分子。糖类的代谢主要包括合成、修饰、分解等过程,参与这些过程的酶根据功能不同各司其职。如糖类的合成需要糖基转移酶(glycosyl transferases);糖类的修饰需要糖脂酶(carbohydrate esterases);分解则需要糖苷水解酶和多糖裂解酶(glycoside hydrolases and polysaccharide lyases)等。 糖苷水解酶(glycoside hydrolase,GH)亦称为糖苷酶,是作用于各种糖苷或寡糖使糖苷键水解的酶类总称。根据氨基酸序列,可以将糖苷水解酶划分为130个家族(GHs),但是至今仍有很多基因没有被分到任何一个家族中。拟南芥基因组中已鉴定出401个糖苷水解酶基因,分别属于35个不同家族。糖苷水解酶作为糖类代谢的关键组分,其生物学功能得到了广泛的研究。 本文利用反向遗传学,借助遗传转化和RT-PCR等生化和分子生物学手段,研究了拟南芥中两个新的类糖苷酶基因AtGHL1和AtGHL2的生物学功能。研究发现: 1.通过生物信息学分析,AtGHL1和AtGHL2两个基因的核苷酸及氨基酸序列同源性达90%以上,其编码蛋白均有糖苷酶特有的DUF1680复合结构域和类6-发卡糖苷酶,但这两个基因没有被归属到目前分类的任何糖苷酶家族中,为两个新型的类糖苷水解酶。 2.通过PCR鉴定及RT-PCR检测,分别获得了AtGHL1和AtGHL2的基因缺失突变体ghl1和ghl2;通过RNAi载体的构建及遗传转化,获得两个基因表达均下调的转基因植株ghli。表型检测发现,各突变体均存在雄蕊缺失的现象,表明AtGHL基因可能参与了雄蕊发育的过程。 3.根据拟南芥遗传转化株中报告基因GUS和YFP的表达,发现这两个基因主要在幼苗、莲座叶及花等器官的输导组织中表达。亚细胞定位结果显示,AtGHL定位于细胞壁。 4.通过糖饥饿胁迫及RT-PCR检测,发现AtGHL基因转录受糖饥饿的诱导。在不含蔗糖的MS培养基中,突变体ghl1和ghli幼苗生长受到严重影响,存活率仅为20%。
邓子新团队DNA骨架硫修饰研究获新突破
------发现两种全新的细胞自我防卫机制

来源:上海交通大学

近日,上海交通大学邓子新院士团队对DNA骨架硫修饰生物学意义的研究又获得两项突破。

聚焦核酸研究的著名国际学术刊物《核酸研究》(NucleicAcidsResearch)以特写文章(Featuredarticle)发表了由该团队由德林副教授主持,博士生徐铁刚和姚芬为共同第一作者的论文——“沙门氏菌中与DNA骨架上硫修饰直接关联的一种新的限制系统”。该论文报道了一种新的宿主专一性限制-修饰系统,它与以前所熟知的DNA甲基化限制-修饰系统截然不同,由7个基因负责,其功能与DNA骨架上的硫修饰直接相关。编辑部在特写中写道:“在沙门氏菌中所发现的这种宿主专一性硫修饰系统看来是细菌为了抵御外源对DNA的限制性所装备的又一种新的细胞防卫机制,它被一种新的途径酶所编码,堪比细菌在依赖于DNA甲基化之外加装了又一套新的防御体系。”

与之相反的另一套全新的细胞防卫系统发现于天蓝色链霉菌中,由贺新义副教授主持,博士生刘光为第一作者,以“一种IV型限制内切酶ScoMcrA对硫修饰和甲基化修饰DNA都切割”为题发表在《公共科学图书馆—遗传学》(PLoSGenetics)上,这种酶不仅可以切割DNA骨架上发生了硫修饰的DNA,还可以切割DNA碱基上发生了甲基化修饰的DNA。另外,这套限制-修饰系统分别位于两个相互排斥的基因组岛上,具有“水火不容”的敌对性,两者同时表达会导致细胞瞬时死亡。论文评审员称这是一篇“重要的、epoch-making”的论文。这项发现是上海交大与中国科学院微生物研究所和英国Leicester大学合作的结晶。

这是邓子新院士团队发现DNA骨架硫修饰以来,瞄准科技界普遍关注的有关DNA硫修饰的生物学,尤其是修饰的生理功能这个重大的科学问题公开发表的新的引人注目的原创性成果。与DNA甲基化限制-修饰系统一样,这类新系统的广泛和深度挖掘可能具有重大的分子生物学和生物工程学意义。

目前,DNA骨架硫修饰的研究已成为该团队瞄准前沿,奋力开拓的主要科研方向之一,自他们首次报道DNA硫修饰以来,已先后发表了十余篇相关的系统性研究论文,稳步地把对此新兴领域的研究推向新的高度。

据悉,2010年初,中国微生物学会为了促进、激励和纪念DNA硫修饰这个原创性科学发现,彰显我国基础生命科学领域的显示度和影响力,决定在上海交通大学设立“DNA大分子硫修饰科学发现诞生地”纪念牌。
脱氧核糖核酸酶Ⅰ是一种核酸内切酶,你说的水解酶为一类可以将组成DNA分子的脱氧核糖核苷酸之间的连接(3’,5’-磷酸二酯键)打开的酶。
具体包括:DNA聚合酶α/引发酶(引发及后随链的部分合成),DNA聚合酶δ(DNA复制主要酶),增殖细胞核抗原(滑动夹子,与合成连接性有关),拓扑异构酶(母链DNA拓扑异构化),解(螺)旋酶(能解开DNA双螺旋),单链DNA结合蛋白及复制蛋白(单链DNA结合作用),复制因子C(参与滑动夹子的装配),DNA连接酶(连接冈崎片段及参与修复),核酸酶(去除RNA引物),侧翼核酸内切酶(去除RNA引物)。
总体作用是在DNA复制过程中发挥的,在DNA复制过程中起到关键性的作用。

以上信息详见高等教育出版社《生物化学》一书第十二章:DNA的生物合成。
‘控制’这个说法其实是个广泛的表述。实际上,DNA只不过是一个模板,通俗说是没有化学活性意义的母本,要转录翻译成为蛋白质,就要先转录成mRNA,然后mRNA作为最后的模板,翻译出想要得到的蛋白质,这之后,通常对得到的蛋白质进行进一步修饰才会得到最后由化学活性意义的蛋白质产物。当然这个步骤很复杂,远远不是说得这么简单,讨论他们都是化学分子组成的同类这一点没有意义的,就像你的手的行为有大脑控制的,而你的手和大脑都是蛋白质组成的。。。这个逻辑关系实际是宏观和微观的关系,朋友千万不要把这些混淆了去钻牛角尖。如果有兴趣和能力学量子物理,你就都明白了。。。祝学习愉快。