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Diacylglycerol kinase alpha (DAG kinase alpha) is a member of the eukaryotic diacylglycerol kinase family. Upon cell stimulation converts the second messenger diacylglycerol into phosphatidate, initiating the resyn-thesis of phosphatidylinositols and attenuating protein kinase C activity. Involved in hepatocellular carcinoma progression through regulation of the Ras/Raf/MEK/ERK pathway. The DGKα/atypical PKC/β1 integrin signaling pathway is required for matrix invasion of breast carcinoma cells.
Gene Aliases:
DAGK; DAGK1; DGK-alpha
Genbank Number:
NM_001345
References:
1. Takeishi, K. et al. (2012). Diacylglycerol kinase alpha enhances hepatocellular carcinoma progression by activation of Ras-Raf-MEK-ERK pathway. J. Hepatol. 57, 77–83. 2. Rainero, E. et al. (2014). The diacylglycerol kinase alpha/atypical PKC/beta1 integrin pathway in SDF-1alpha mammary carcinoma invasiveness. PLoS ONE 9:e97144.3. Sakane F, et al. (2016). Diacylglycerol Kinases as Emerging Potential Drug Targets for a Variety of Diseases: An Update. Front Cell Dev Biol. 4:82.
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2021-09-03
50ml离心管,RCF:10000,带泡沫底座，PP,无RNA/DNA酶，无热源无菌 查看更多
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B、血浆凝固酶 C、透明质酸酶 D、DNA酶 E、溶血素S查看答案您可能感兴趣的试题 下列物质中免疫原性最强的是( ) A.核酸 B.蛋白质 C.多糖 D.半抗原 E.脂... 查看更多
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2021-09-16
分子生物 查看更多
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2021-08-28
基因工程的关键技术是脱氧核糖核酸的连接和重组，在此过程中一些酶起着至关重要的作用，这些酶统称为基因工程工具酶。工具酶种类繁多、功能各异，主要包括限制酶、聚合酶、连接酶、修饰酶和核酸酶五大类。其中，以限制性核酸内切酶和DNA连接酶在分子克隆中的作用最为突出。这些酶具有特异... 查看更多
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2021-08-21
核酶是指 A.核内的DNA酶 B.核内的RNA酶 C.核内的蛋白酶 D.一种逆转录酶 E.具有催化功能的RNA分子 请帮忙给出正确答案和分析,谢谢!... 查看更多
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2021-09-21
第二章 DNA酶切及凝胶电泳第一节 概 述 一. DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和 查看更多
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2021-08-19
200ul无色吸头，PP,无RNA/DNA酶，无热源 查看更多
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2021-09-01
上海研生实业有限公司所提供的人抗DNA酶B抗体（anti-DNase B）酶联免疫分析试剂盒品牌质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息！ 查看更多
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2021-08-13
合肥基赛生物科技有限公司在发布的合肥基赛生物销售Crystalgen的0.1-10ul、1-200ul、100-1000ul、100-1300ul无DNA酶无RNA酶无热源、带滤芯吸头供应信息，浏览与合肥基赛生物销售Crystalgen的0.1-10ul、1-200ul、100-1000ul、100-1300ul无DNA酶无RNA酶无热源、带滤芯吸头相关的产品或在搜索更多与合肥基赛生物销售Crystalgen的0.1-10ul、1-200ul、100-1000ul、100-1300ul无DNA酶无RNA酶 查看更多
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2021-08-14
上海艾研生物科技有限公司专业供应销售DNA酶琼脂系列产品，公司具有良好的市场信誉，专业的销售和技术服务团队,凭着经营DNA酶琼脂系列多年经验，熟悉并了解DNA酶琼脂系列市场行情，迎得了国内外厂商的认可，欢迎来电来涵洽谈交流！ 查看更多
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2021-08-30
上海研生实业有限公司所提供的DNA酶甲基绿琼脂基础质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息！ 查看更多
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2021-09-22
一． 实验目的： 1、 掌握质粒 DNA 分离，纯化的原理 2、 学习煮沸法快速提取质粒 DNA 的方法 3、 学习 DNA的限制性酶切的基本技术 4 、 学习利用琼脂糖电泳测定 DNA片段的长度 二、 实验原理 在基因工程中， DNA 分子的切割是由限制性内切酶来完成的。限制性内切酶能识别特定的 DNA 序列，在一 查看更多
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什么是酶,名词解释定义是?_123
kaiyue12112021-07-26
这种问题只能问佳学基因解码专家。
核酸酶发展历史123
TSˊ控白2021-07-21
20世纪70年代，在细菌中陆续发现了一类核酸内切酶，能专一性地识别并水解双链DNA上的特异核苷酸顺序，称为限制性核酸内切酶（restriction endonuclease，简称限制酶）。当外源DNA侵入细菌后，限制性内切酶可将其水解切成片段，从而限制了外源DNA在细菌细胞内的表达，而细菌本身的DNA由于在该特异核苷酸顺序处被甲基化酶修饰，不被水解，从而得到保护。
限制性核酸内切酶的研究和应用发展很快，已提纯的限制性核酸内切酶有100多种，许多已成为基因工程研究中必不可少的工具酶。
限制性核酸内切酶可被分成三种类型。Ⅰ型和Ⅲ型限制酶水解DNA需要消耗ATP，全酶中的部分亚基有通过在特殊碱基上补加甲基基团对DNA进行化学修饰的活性。
Ⅰ型和Ⅲ型酶具有限制和修饰两种作用，而特异性弱，切割位点的序列不固定，不已知，不宜用于基因克隆中。
Ⅱ型限制酶水解DNA不需要ATP也不以甲基化或其它方式修饰DNA，能在所识别的特殊核苷酸顺序内或附近切割DNA。因此，被广泛用于DNA分子克隆和序列测定。
限制性核酸内切酶的研究和应用发展很快，已提纯的限制性核酸内切酶有100多种，许多已成为基因工程研究中必不可少的工具酶。
限制性核酸内切酶可被分成三种类型。Ⅰ型和Ⅲ型限制酶水解DNA需要消耗ATP，全酶中的部分亚基有通过在特殊碱基上补加甲基基团对DNA进行化学修饰的活性。
Ⅰ型和Ⅲ型酶具有限制和修饰两种作用，而特异性弱，切割位点的序列不固定，不已知，不宜用于基因克隆中。
Ⅱ型限制酶水解DNA不需要ATP也不以甲基化或其它方式修饰DNA，能在所识别的特殊核苷酸顺序内或附近切割DNA。因此，被广泛用于DNA分子克隆和序列测定。
分子克隆常用工具酶 123
掏心专用03602017-11-27
分子克隆中常用的工具酶连接酶、T4 多核苷酸激酶、碱性磷酸酶、核酸酶、琼脂糖酶、蛋白酶、溶菌酶以及一些DNA 结合蛋白。
分子克隆在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用体外重组方法将它们插入克隆载体，形成重组克隆载体，通过转化与转导的方式，引入适合的寄主体内得到复制与扩增，然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体，可以得到插入DNA的许多拷贝，从而获得目的基因的扩增。
工具酶：基因工程涉及众多的工具酶可粗略的分为限制酶，连接酶，聚合酶，核酸酶和修饰酶五大类。其中，以限制性核酸内切酶和DNA连接酶在分子克隆中的作用最为突出。
分子克隆在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用体外重组方法将它们插入克隆载体，形成重组克隆载体，通过转化与转导的方式，引入适合的寄主体内得到复制与扩增，然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体，可以得到插入DNA的许多拷贝，从而获得目的基因的扩增。
工具酶：基因工程涉及众多的工具酶可粗略的分为限制酶，连接酶，聚合酶，核酸酶和修饰酶五大类。其中，以限制性核酸内切酶和DNA连接酶在分子克隆中的作用最为突出。
20192020学年西南四省名校高三(下)第一次大联考生物试卷(有答案解析...123
穷比烟味丶潵抨2017-11-27
A、酶的本质是绝大多数酶是蛋白质，所以绝大多数酶是基因转录和翻译的产物，A错误； B、细胞核基因是染色体的组成部分，细胞质基因不是染色体的组成部分，酶不是细胞内染色体的组成成分，B错误； C、基因可以通过控制酶的合成控制代谢进而控制生物的性状，C正确； D、有某种酶的基因，细胞中不一定有相应的酶，因为在细胞中基因是选择表达的，D错误．故选：C．
【交流】甲基化:求重亚硫酸盐修饰后DNA碎裂的改进策略 遗传学与...123
waterf212021-07-22
基因克隆的技术路线123
2017-10-01
基因克隆技术
摘要：随着转基因技术的发展，获取目的基因片段的方法也越来越多样化，获取目的基因片段的技术也日新月异，但是无论获取的方法和手段怎么样发展，获取的主要思路始终在围绕一根主线在开展。
关键词：基因 ，遗传效应，基因克隆，体外重组
一、基因工程
基因工程作为一门理论性与实践性较强的学科,其方法与技术已经渗透到现代生命科学的各个分支领域,成为生命科学的一门核心技术。基因工程包含许多独特的实验方法和技术,不仅内容丰富,涉及面广,实用性也强。基因工程是通过DNA 重组技术, 获得具有特殊生物遗传性状和功能的遗传工具生物体, 基因工程技术广泛应用于农业、医学、食品工业等。本文就基因工程的应用现状综合阐述。
基因工程技术是一项极为复杂的高新生物技术, 它利用现代遗传学与分子生物学的理论和方法, 按照人类所需, 用DNA 重组技术对生物基因组的结构和组成进行人为修饰或改造, 从而改变生物的结构和功能, 使之有效表达出人类所需要的蛋白质或人类有益的生物性状。基因工程从诞生至今, 仅有30 年的历史, 然而, 无论是在基础理论研究领域, 还是在生产实际应用方面, 都已取得了惊人的成绩。首先,基因工程给生命科学自身的研究带来了深刻的变化。目前科学家已完成了多种细胞器的基因组全序列测定工作。其次, 基因工程具有广泛的应用价值, 能为工农业生产、医药卫生、环境保护开辟新途径。
基因工程( 又称DNA 重组技术、基因重组技术) , 是20 世纪70 年代初兴起的技术科学, 是用人工的方法将目的基因与载体进行DNA重组, 将DNA 重组体送入受体细胞, 使它在受体细胞内复制、转录、翻译, 获得目的基因的表达产物。这种跨越天然物种屏障, 把来自任何生物的基因置于毫无亲缘关系的新的寄主生物细胞之中的能力, 是基因工程技术区别于其他技术的根本特征。 基因工程研究内容为：
(1) 从复杂的生物有机体基因组中, 经过酶切消化或PCR 扩增等步骤, 分离出带有目的基因的DNA 片段。
(2) 在体外, 将带有目的基因的外源DNA 片段连接到能够自我复制并具有选择记号的载体分子上, 形成重组DNA分子。
(3)重组DNA 分子转移到适当的受体细胞, 并与之一起增殖。
(4) 从大量的细胞繁殖群体中, 筛选出获得了重组DNA 分子的受体细胞克隆。
摘要：随着转基因技术的发展，获取目的基因片段的方法也越来越多样化，获取目的基因片段的技术也日新月异，但是无论获取的方法和手段怎么样发展，获取的主要思路始终在围绕一根主线在开展。
关键词：基因 ，遗传效应，基因克隆，体外重组
一、基因工程
基因工程作为一门理论性与实践性较强的学科,其方法与技术已经渗透到现代生命科学的各个分支领域,成为生命科学的一门核心技术。基因工程包含许多独特的实验方法和技术,不仅内容丰富,涉及面广,实用性也强。基因工程是通过DNA 重组技术, 获得具有特殊生物遗传性状和功能的遗传工具生物体, 基因工程技术广泛应用于农业、医学、食品工业等。本文就基因工程的应用现状综合阐述。
基因工程技术是一项极为复杂的高新生物技术, 它利用现代遗传学与分子生物学的理论和方法, 按照人类所需, 用DNA 重组技术对生物基因组的结构和组成进行人为修饰或改造, 从而改变生物的结构和功能, 使之有效表达出人类所需要的蛋白质或人类有益的生物性状。基因工程从诞生至今, 仅有30 年的历史, 然而, 无论是在基础理论研究领域, 还是在生产实际应用方面, 都已取得了惊人的成绩。首先,基因工程给生命科学自身的研究带来了深刻的变化。目前科学家已完成了多种细胞器的基因组全序列测定工作。其次, 基因工程具有广泛的应用价值, 能为工农业生产、医药卫生、环境保护开辟新途径。
基因工程( 又称DNA 重组技术、基因重组技术) , 是20 世纪70 年代初兴起的技术科学, 是用人工的方法将目的基因与载体进行DNA重组, 将DNA 重组体送入受体细胞, 使它在受体细胞内复制、转录、翻译, 获得目的基因的表达产物。这种跨越天然物种屏障, 把来自任何生物的基因置于毫无亲缘关系的新的寄主生物细胞之中的能力, 是基因工程技术区别于其他技术的根本特征。 基因工程研究内容为：
(1) 从复杂的生物有机体基因组中, 经过酶切消化或PCR 扩增等步骤, 分离出带有目的基因的DNA 片段。
(2) 在体外, 将带有目的基因的外源DNA 片段连接到能够自我复制并具有选择记号的载体分子上, 形成重组DNA分子。
(3)重组DNA 分子转移到适当的受体细胞, 并与之一起增殖。
(4) 从大量的细胞繁殖群体中, 筛选出获得了重组DNA 分子的受体细胞克隆。
[原创]亚硫酸氢盐修饰DNA步骤& lt;& lt;DNA methylation& gt;& gt;译稿 ...123
doctoryangjp2021-08-03
亚硫酸氢盐修饰DNA步骤
一、内切酶作用体系：（自建立，试过，效果很好）
EcoRⅠTaKaRa消化DNA37℃3h
ddH2O11ul
H溶液2ul
EcoRⅠ1ul
DNA6ul
37℃孵育3h
二、亚硫酸氢盐修饰过程：（翻译稿）
1.用适合的内切酶消化大分子量的DNA（避免目的基因被切割），或者通过把DNA悬于蛋白酶k/SDS缓冲液，通过26gaugeneedle5次，37℃孵育30min（降低DNA大小，利于充分变性）
2.加2.2ul新鲜配制的3MNaOH到18ulDNA样品中，搅拌混匀，短暂离心。
3.37℃孵育15min。（有的资料介绍说可以42度20min）
4.90℃孵育2min（95度5nin也可），置于冰上，短暂离心。
5.加208ul饱和的Na2S2O5PH5.0（BDH）。（加7.6gNa2S2O5到15ml水，加464ul新鲜配制的10MNaOH）
6.加12ul10mM氢醌（55mg加水50ml氢醌），混匀并短暂离心
7.加200ul矿物油，防止水分蒸发，限制氧化。
8.55℃孵育4-16h（水浴）。
9.吸弃上层矿物油。
10.①加1mlPromega’sWizardDNAClean-upresin按照指导书进行脱盐处理。每个管与2.5ml注射器相连，（注意连接紧）用吸管吸到注射器，底加2ml的离心管；轻轻加压，不要弄破膜；②加2ml80％的异丙醇洗涤，离心10000rpm，30s，底换管；柱子换到新1.5ml尖EP管，弃注射器；③加50ul预热水（60-70℃）放2-3min；离心（柱子与离心管一起，10000rpm，30s，DNA到EP管，弃柱子；
11.加50ul水到minicolumn室温下静置5min
12.离心20s收积洗提液，弃掉minicolumn
13.加5.5ul3MNaOH然后37℃孵育15min
14.短暂离心
15.加1ul糖原（10mg/ml）
16.加33.3ul5MNH4OAcetatePH7.0
17.加330ul冷（-20℃）100％乙醇，充分混匀
18.－20℃过夜（或者－70℃30min）
19.4℃下14000rpm离心15min
20.弃上清，加70％乙醇洗涤，4℃下14000rpm离心15min。
21.重悬DNA于10ul水中，室温下静置～2h，间隔旋涡振荡
22.－20℃保存DNA
hotstar酶做PCR，或者做Q-PCR
一、内切酶作用体系：（自建立，试过，效果很好）
EcoRⅠTaKaRa消化DNA37℃3h
ddH2O11ul
H溶液2ul
EcoRⅠ1ul
DNA6ul
37℃孵育3h
二、亚硫酸氢盐修饰过程：（翻译稿）
1.用适合的内切酶消化大分子量的DNA（避免目的基因被切割），或者通过把DNA悬于蛋白酶k/SDS缓冲液，通过26gaugeneedle5次，37℃孵育30min（降低DNA大小，利于充分变性）
2.加2.2ul新鲜配制的3MNaOH到18ulDNA样品中，搅拌混匀，短暂离心。
3.37℃孵育15min。（有的资料介绍说可以42度20min）
4.90℃孵育2min（95度5nin也可），置于冰上，短暂离心。
5.加208ul饱和的Na2S2O5PH5.0（BDH）。（加7.6gNa2S2O5到15ml水，加464ul新鲜配制的10MNaOH）
6.加12ul10mM氢醌（55mg加水50ml氢醌），混匀并短暂离心
7.加200ul矿物油，防止水分蒸发，限制氧化。
8.55℃孵育4-16h（水浴）。
9.吸弃上层矿物油。
10.①加1mlPromega’sWizardDNAClean-upresin按照指导书进行脱盐处理。每个管与2.5ml注射器相连，（注意连接紧）用吸管吸到注射器，底加2ml的离心管；轻轻加压，不要弄破膜；②加2ml80％的异丙醇洗涤，离心10000rpm，30s，底换管；柱子换到新1.5ml尖EP管，弃注射器；③加50ul预热水（60-70℃）放2-3min；离心（柱子与离心管一起，10000rpm，30s，DNA到EP管，弃柱子；
11.加50ul水到minicolumn室温下静置5min
12.离心20s收积洗提液，弃掉minicolumn
13.加5.5ul3MNaOH然后37℃孵育15min
14.短暂离心
15.加1ul糖原（10mg/ml）
16.加33.3ul5MNH4OAcetatePH7.0
17.加330ul冷（-20℃）100％乙醇，充分混匀
18.－20℃过夜（或者－70℃30min）
19.4℃下14000rpm离心15min
20.弃上清，加70％乙醇洗涤，4℃下14000rpm离心15min。
21.重悬DNA于10ul水中，室温下静置～2h，间隔旋涡振荡
22.－20℃保存DNA
hotstar酶做PCR，或者做Q-PCR
DNA酶切及凝胶电泳 123
挚爱小慧oDV2017-11-27
限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类：Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰（甲基化）作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子，然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成： 一种为限制性内切核酸酶（限制酶）,它切割某一特异的核苷酸序列； 另一种为独立的甲基化酶，它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA的基础。向左转|向右转
然后如何去除DNA中的RNA酶 123
禽兽TA02072017-11-27
（一）从源头控制污染：
（1）玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染，使用前必须于180 ℃干烤8小时或更长时间（玻璃器皿）或用氯仿冲洗（塑料制品）。另一种方法是用0.1 ％焦碳酸二乙酯（DEPC）的水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯，试管和其他用品。DEPC是RNA酶的强烈抑制剂，但其作用并不是绝对的（Fedorcsak和Ehrenberg,1966）。灌满DEPC的玻璃或塑料器皿在37℃放置2小时，然后用灭菌水淋洗数次， 并于100℃干烤15分钟（Kumar和Lindberg,1972)。在15 lbf/in2(1.034x105Pa)高压蒸氯灭菌15分钟。上述处理可以除去器甲上痕量的DEPC，以防DEPC通过羧甲基化作用对RNA的嘌呤碱基进行修饰。
用于RNA电泳的电泳槽应用去污剂洗干净，再用水冲洗，用乙醇干燥，然后灌满3％的H2O2溶液，于室温放置10分钟，然后用0.1 ％DEPC处理过的水彻底冲洗电泳槽。最好能留出一些玻璃器皿、塑料制品和电泳槽作上特殊标记，存放在指定地点，为RNA实验专用。
（2）研究人员造成的污染 RNA酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此，在准备分离的和分析RNA的材料和溶液时，主有涉及RNA的一切操作过程中，都应戴一次性手套，接触“胖的”玻璃器皿和其他物品以后，手套就可能沾染上RNA酶，因此进行RNA实验时应勤换手套。
（3）污染的溶液 用高压灭菌的水和RNA研究专用的化学试剂配制溶液，用干烤过的药匙称取试剂，将溶液装入无RNA酶的玻璃器皿。可能的话溶液均应用0.1％DEPC于37℃至少处理12小时，然后于100℃加热15分钟或在15lbf/in2(1.034x105Pa)的高压下蒸气灭菌15分钟。注：DEPC可与胺类迅速发生化学反应，因些不能用来处理含有Tris 一类的缓冲液。可存几瓶新的未开封的Tris晶体以制备无RNA酶的溶液。
（二）已经污染，可以加入RNA酶的抑制剂
（1）RNA酶的蛋白质抑制剂是 从人胎盘分离的一种蛋白质可与多种RNA酶紧密结合（KI≈3x1010）形成非共价结合的等摩尔复合物，使RNA酶失活。此蛋白质体内可能是血管生成素的抑制剂，血管生成素是氨基酸序列和推测的三级结构与胰RNA酶类似的一种血管生成因子， 几个厂家以不同的商品名出售这种抑制剂，该蛋白质应置于含5mmol/L二硫苏糖醇（DTT）的50％甘油中，贮存于－20℃。抑制剂制品冻融数次后或放置在氧化条件下即应弃之不用，因为上述处理会使蛋白质变性从而释放出所结合的RNA酶。因此，在使用变性剂裂解哺乳动物(mammal;mammalian)细胞这一提取RNA的初始步聚中不应使用这种蛋白抑制剂。然而职用更温和的裂解方法时应使用这种抑制剂，并且在后续的所有RNA纯化步骤中均应有此蛋白质存在。由于酚抽提可以除蛋白质抑制剂，故应在纯化过程中补加几次抑制剂。其最大活性的发挥要求巯基试剂，而且它并不干扰反转录或mRNA在无细胞体系中的翻译。
（2）氧钒核糖核苷复合物 这种由氧钒（1V）离子和4种核糖核苷之中的任意一种所形成的复合物，是量种过渡态类似物，它能与多种RNA酶结合并几科能百分之百地抑制RNA酶的活性。这4种氧钒核糖核苷复合物可加入完整细胞中，在RNA提取和纯化的所有过程中，其使用浓度都是10mmol/L。所得到的mRNA可直接在硅卵母细胞中进行翻译， 并能作为某些外酶促反应（如mRNA反转录）的模板。然而氧钒核糖核苷复合物强烈抑制mRNA在无细胞体系中的翻译，因此必须用含0.1 ％羟基喹淋的苯酚[ 用0. 01mol/LTris.Cl(pH7.8)平衡]多次抽提以去除之。有几家公司出售氧钒核糖核苷复合物。
（3）Macaloid（硅藻上）Macaloid是一咱粘土，很多年前就发现它能吸附RNA酶，用缓冲液将其制成浆液，以0.015％（W/V）的终浓度溶解细胞。 这种粘土随同它所吸附的RNA酶可在后续的RNA纯化过程中（如酚抽提后）经离心去除。
（三）提取核酸时可以加入盐酸胍或硫氰酸胍溶液。盐酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白质，从而免受RNA酶的干扰。
（1）玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染，使用前必须于180 ℃干烤8小时或更长时间（玻璃器皿）或用氯仿冲洗（塑料制品）。另一种方法是用0.1 ％焦碳酸二乙酯（DEPC）的水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯，试管和其他用品。DEPC是RNA酶的强烈抑制剂，但其作用并不是绝对的（Fedorcsak和Ehrenberg,1966）。灌满DEPC的玻璃或塑料器皿在37℃放置2小时，然后用灭菌水淋洗数次， 并于100℃干烤15分钟（Kumar和Lindberg,1972)。在15 lbf/in2(1.034x105Pa)高压蒸氯灭菌15分钟。上述处理可以除去器甲上痕量的DEPC，以防DEPC通过羧甲基化作用对RNA的嘌呤碱基进行修饰。
用于RNA电泳的电泳槽应用去污剂洗干净，再用水冲洗，用乙醇干燥，然后灌满3％的H2O2溶液，于室温放置10分钟，然后用0.1 ％DEPC处理过的水彻底冲洗电泳槽。最好能留出一些玻璃器皿、塑料制品和电泳槽作上特殊标记，存放在指定地点，为RNA实验专用。
（2）研究人员造成的污染 RNA酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此，在准备分离的和分析RNA的材料和溶液时，主有涉及RNA的一切操作过程中，都应戴一次性手套，接触“胖的”玻璃器皿和其他物品以后，手套就可能沾染上RNA酶，因此进行RNA实验时应勤换手套。
（3）污染的溶液 用高压灭菌的水和RNA研究专用的化学试剂配制溶液，用干烤过的药匙称取试剂，将溶液装入无RNA酶的玻璃器皿。可能的话溶液均应用0.1％DEPC于37℃至少处理12小时，然后于100℃加热15分钟或在15lbf/in2(1.034x105Pa)的高压下蒸气灭菌15分钟。注：DEPC可与胺类迅速发生化学反应，因些不能用来处理含有Tris 一类的缓冲液。可存几瓶新的未开封的Tris晶体以制备无RNA酶的溶液。
（二）已经污染，可以加入RNA酶的抑制剂
（1）RNA酶的蛋白质抑制剂是 从人胎盘分离的一种蛋白质可与多种RNA酶紧密结合（KI≈3x1010）形成非共价结合的等摩尔复合物，使RNA酶失活。此蛋白质体内可能是血管生成素的抑制剂，血管生成素是氨基酸序列和推测的三级结构与胰RNA酶类似的一种血管生成因子， 几个厂家以不同的商品名出售这种抑制剂，该蛋白质应置于含5mmol/L二硫苏糖醇（DTT）的50％甘油中，贮存于－20℃。抑制剂制品冻融数次后或放置在氧化条件下即应弃之不用，因为上述处理会使蛋白质变性从而释放出所结合的RNA酶。因此，在使用变性剂裂解哺乳动物(mammal;mammalian)细胞这一提取RNA的初始步聚中不应使用这种蛋白抑制剂。然而职用更温和的裂解方法时应使用这种抑制剂，并且在后续的所有RNA纯化步骤中均应有此蛋白质存在。由于酚抽提可以除蛋白质抑制剂，故应在纯化过程中补加几次抑制剂。其最大活性的发挥要求巯基试剂，而且它并不干扰反转录或mRNA在无细胞体系中的翻译。
（2）氧钒核糖核苷复合物 这种由氧钒（1V）离子和4种核糖核苷之中的任意一种所形成的复合物，是量种过渡态类似物，它能与多种RNA酶结合并几科能百分之百地抑制RNA酶的活性。这4种氧钒核糖核苷复合物可加入完整细胞中，在RNA提取和纯化的所有过程中，其使用浓度都是10mmol/L。所得到的mRNA可直接在硅卵母细胞中进行翻译， 并能作为某些外酶促反应（如mRNA反转录）的模板。然而氧钒核糖核苷复合物强烈抑制mRNA在无细胞体系中的翻译，因此必须用含0.1 ％羟基喹淋的苯酚[ 用0. 01mol/LTris.Cl(pH7.8)平衡]多次抽提以去除之。有几家公司出售氧钒核糖核苷复合物。
（3）Macaloid（硅藻上）Macaloid是一咱粘土，很多年前就发现它能吸附RNA酶，用缓冲液将其制成浆液，以0.015％（W/V）的终浓度溶解细胞。 这种粘土随同它所吸附的RNA酶可在后续的RNA纯化过程中（如酚抽提后）经离心去除。
（三）提取核酸时可以加入盐酸胍或硫氰酸胍溶液。盐酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白质，从而免受RNA酶的干扰。
【求助】DNA的甲基化修饰123
萝莉控听说1234562021-07-24
今天晚上开始做甲基化修饰DNA实验，由于没有试剂盒，需要自己配置所有容易来进行修饰。晚上溶解亚硫酸氢钠时，由于太晚了，着急走，就在管子底部还有少许结晶沉淀的情况下，就加入到EP管中了。这样对于整个甲基化修饰影响大吗？？担心啊。
MSP扩增中3种DNA提取法的比较123
佑麻麻2014-04-25
各位大神们，小妹最近才做关于甲基化方面的实验，由于涉及到MSP（甲基化特异性PCR），想请教前辈们是买的什么DNA提取试剂盒（公司是什么？）和DNA纯化修饰试剂盒呢（公司是什么？）因为不想手工提取，所以希望多多听取前辈意见，大家的试剂盒买后做的效果好吗？？请大家不吝赐教！！谢谢啦。。
275第十四章基因工程技术原理与应用123
詛躷囖482021-07-27
基因工程中聚合酶不是基本酶的原因：DNA聚合酶是将单个的脱氧核苷酸加到原有的DNA片段上的，所以不用！DNA聚合酶是不论何种片段强制连接的，而聚合酶是连接有特定顺序的碱基对片段的DNA。基因工程常见几种酶比较：DNA聚合酶： 在DNA复制时起作用，将多个脱氧核苷酸催化聚合为脱氧核苷酸链（也就是DNA单链），此时形成的化学键是磷酸二酯键。DNA解旋酶： 在DNA复制或转录时起作用，将DNA的双链解开，作用对象是氢键，使氢键断裂 DNA水解酶： 在消化道或细胞内起作用，将DNA水解为脱氧核苷酸，作用对象是磷酸二酯键。DNA连接酶：在DNA修饰过程或基因工程中起作用，将两个DNA片段连接起来，此时形成的化学键是磷酸二酯键。
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