| Discount | $100DiscountCodeforYourFirstOrderof1mgCreRecombinase:CreDiscount Discountforswitchingfromcompetitors'product:$150.EmailtoTechSupportts@Excellgen.comfordiscountcode. |
| Description | Crerecombinase,oftenabbreviatedtoCre,isaTypeItopoisomerasefromP1bacteriophagethatcatalyzessite-specificrecombinationofDNAbetweenloxPsites.Thisenzymedoesnotrequireanyenergycofactors,andCre-mediatedrecombinationquicklyreachesequilibriumbetweensubstrateandreactionproducts.TheloxPrecognitionelementisa34basepair(bp)sequencecomposedoftwo13bpinvertedrepeatsflankingan8bpspacerregionwhichconfersdirectionality.RecombinationproductsaredependentonthelocationandrelativeorientationoftheloxPsites.TwoDNAspeciescontainingsingleloxPsiteswillbefusedwhilstDNAbetweenloxPsitesinthesameorientationwillbeexcisedincircularformandDNAbetweenopposingloxPsiteswillbeinvertedwithrespecttotherestoftheDNA. Crerecombinaseisusedasatooltomodifygenesandchromosomes.InthisapproachtheCrerecombinaseisusedtodeleteasegmentofDNAflankedbyLoxPsites(aka'floxed')inanexperimentalanimal.Ithasbeenusedtogenerateanimalswithmutationslimitedtocertaincelltypes(tissue-specificknockout)oranimalswithmutationsthatcanbeactivatedbydrugadmiNISTration(inducIBLeknockout)inanumberoftransgenicspecies.TheavailABIlityoftransgeniclineswithtissuespecificorinducibleCreexpressionpermitsresearcherstoinactivateoractivateageneofinterestsimplybybreedingafloxedanimaltopre-existingCre-transgenics.OneexampleofaninducibleCrerecombinasesystemistheCre-ER(ER=EstrogenReceptor)systeminwhichintraperitonealinjectionoftamoxifenwillcausedose-dependentexcisionofthefloxedsite(i.e.willinactivatethegeneofchoice). RecombinantCrerecombinase(TAT-Cre)waspurifiedfromanE.colistraincarryinganengineeredplasmidencodingenhancedformofCreRecombinasefrombacteriophageP1.ThisCrerecombinasehasanN-terminal6XHistag,aTatpeptide(GRKKRRQRRRPPAGTSVSL)andanNLSsequence(PKKKRKV).HTNCisthemosteffectiveproteinintransduction(invivo)andsubsequentrecombinationcomparedtootherformsofCrerecombinases,e.g.,HNC,TCH6,HC,HNCM,CH.Incubationoffibroblastreportercellswith1μMHTNCfor1to2hourscanresultintranductionof60~90%ofthecells*.Additionof100μMchoroquinetoculturemediumcanfurtherenhancetransductionandrecombination. *Usethispagetocalculateconcentrationrequiredforculturedcells: http://www.excellgen.com/pub/mw_2_moles.html |
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| Properties | MolecularWeight:43kDa QC:Tat-Creinduced80~100%recombinationefficienciesinHEK293T-Crereportercells.HEK293T-cellsweretransfectedwithreporterplasmidDNA:LoxP-RFP-Stop-LoxP-GFP,thenadd1μMpurifiedTat-Creprotein.
Fig1:0:beforeaddingTat-Cre;1to5:1to5daysaftertransductionwithTat-Cre.
Fig2:ComparisonofrecombinationacitivitiesofTat-Crerecombinaseinliquidand lyophilizedform.1,Tat-Crerecombinaseinliquidformafterstoringat-80oCfor6months;2,LyophilizedTat-Crerecombinaseafterstoringat37oCfor2weeks;3,LyophilizedTat-Crerecombinaseafterstoringat37oCfor2weeksandsubsequentlystoringat4oCfor2weeks.Picturesweretaking15hoursafteradding1uMTat-Crerecombinase. EndotoxinLevels:<0.1EU/μg Purity:>98%bySDS-PAGEandHPLCanalysis. |
| UnitDefintion | Astandardof100UnitsisdefinedastheamountofTAT-CRE(μg) in1.0mLoftissueculturemediumthatisrequiredtoinduce50% GFPexpressioninaHEK293Treportercelllineassay. |
| Stability | 5yearsat-80oC.2yearsat-20oC.1yearat4oC,upto6monthsatambienttemperature |
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| Storage | 4~-20ºC |
| Shipping | ambienttemperature(reducedshippingfee) |
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通过敲除来研究基因的功能，所谓的敲除不外乎有三种情况：1）单交换插入抗性基因使原基因失活；2）抗性基因双交换替换掉原基因；3）同框缺失即完整的使原基因敲除掉。
第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大，前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子，但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect，所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的，如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系，做了会更好。
基因敲除技术的产生和发展建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，自身发展的同时也促进了相关技术的进一步发展。流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。
目前，在ES细胞中进行同源重组已经成为一种研究特定基因甚至基因的特定结构域和对小鼠染色体组上任意位点进行遗传修饰的常规技术。1997年通过基因打靶获得的突变小鼠就已经超过千种，近年来随着基因敲除技术的不断进步，尤其是DNA重组技术和小鼠基因组测序的完成，使得建立基因敲除小鼠的周期大大减少，使基因敲除小鼠数目大大增加。各国也都建立了突变体小鼠及转基因小鼠的数据库。
06年8月七日，美国国立卫生研究院宣布将投巨资启动敲除小鼠基因组计划，目的是建立一个完善、免费的小鼠基因组突变基因数据库，研究人员可以利用基因敲除小鼠研发能为治疗癌症、心脏病、神经退行性疾病、糖尿病等人类遗传疾病提供更为优秀的动物模型。展开
问下各位大神，用在线设计的软件找PAM后，还需要找functiondomains，从而排除一些PAM吗？有没有一些比较好的在线设计网站。
类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统
只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件。
目前，来自Streptococcuspyogenes的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9蛋白（含
有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合
成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的
DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。
由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前最高效的基因组编辑系统。
请教各位大神，CRISPR/Cas9基因敲除的小鼠（完全性敲除）构建后，鉴定的方法是不是只要PCR扩增进行基因型鉴定就可以了？核型鉴定及southernblot检测需不需要呢？谢谢！
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