| Description | RecombinantCrerecombinase(TAT-Cre)waspurifiedfromanHEK293celllineexpressingenhancedformofCreRecombinasefrombacteriophageP1.ThisCrerecombinasehasanN-terminal6XHistag,aTatpeptide(GRKKRRQRRRPPAGTSVSL)andanNLSsequence(PKKKRKV).Tat-Creisthemosteffectiveproteinintransduction(invivo)andsubsequentrecombinationcomparedtootherformsofCrerecombinases,e.g.,HNC,TCH6,HC,HNCM,CH. |
Applications |
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| Source | HEK293cells |
| Activity | Astandardof100UnitsisdefinedastheamountofTat-Crein1.0mLoftissueculturemediumthatisrequiredtoinduce90%GFPexpressioninaHEK293TloxPreportercelllineassay. |
| Properties | QC:HEK293T-Crereportercellline80~100%recombinationefficiencies. ![]() Figure1.QCassayofTat-Cre.Adding 50and100unitsofTat-CretoHEK293TcellstransfectedwithLoxP-RFP-Stop-LoxP-GFPreporterplasmidDNA. EndotoxinLevels:<0.1EU/ug |
| Storage | -20ºC~-80ºC |
| Shipping | dryice |
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尽量简洁
缺点:质粒仍然较大,转染难度相对较大。具有碱基识别偏好性,局限了基因编辑的运用范围,而且会导致不同基因位点编辑效率不同。筛选仍然需要较大工作量。
http://www.nature.com/nature/journal/v520/n7546/full/nature14299.html
1、过表达目的蛋白,用以检测基因表型;
2、荧光标签标记目的蛋白,用以跟踪其细胞 定位;
3、引入野生型等位基因。
是的,确切来说是大量表达。 大肠杆菌是基因重组技术中常用的细菌,将外源目的基因(如人胰岛素基因)导入大肠杆菌后可在大肠杆菌内表达目的蛋白(如胰岛素),由于细菌繁殖速度快,通过发酵便可在短时间内获得大量胰岛素,再经多步分离、纯化便得到了药用胰岛素。
流程大概是这样的:首先获得小鼠ES细胞系,测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体,将打靶载体转入一定数目ES细胞中,然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞,是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传,从而得到带有修饰基因的突变小鼠,而后可以对其进行表型分析。

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