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EnGen®SpyCas9NickaseisavariantofCas9nucleasedifferingbyapointmutation(D10A)intheRuvCnucleasedomain,whichenablesittonick,butnotcleave,DNA(1,2).EnGenSpyCas9Nickase,likeEnGenCas9NLS(NEB#M0652),targetsDNAusingaguideRNAcomplementarytoasitewitha3’NGGprotospaceradjacentmotif(PAM).NickingoccursontheDNAstrandoppositethePAM.Double-strandedDNAbreakscanbegeneratedwithreducedoff-targetcleavagebytargetingtwositesincloseproximity(generally0-20bpapart)andwithPAMsfacingoutwardtoleave5’overhangs.NickingbyEnGenSpyCas9NickaseoccursontheDNAstrandoppositethetargetsequence.EnGenSpyCas9NickasecontainsSV40Tantigennuclearlocalization(NLS)sequencesontheNandC-termini.ProductSource
EnGen®SpyCas9NickaseisexpressedasaN-terminal6XHis-taggedfusioninE.coli.ReagentsSupplied
Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
| Storeat(°C) | Concentration | |
| NEBuffer™3.1 | -20 | 10X |
Notes:
20µMisequalto~3.2mg/mlEnGen®Cas9NickaseNLS,S.pyogenes.1µMisequalto~0.16mg/ml.ThisproductiscompatIBLewithDiluentBufferB:300mMNaCl,10mMTris-HCl,0.1mMEDTA,1mMDTT,500µg/mlBSAand50%glycerol.(pH7.4@25°C).蚂蚁淘电商平台
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淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
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2021-09-15
2017 年 4 月，维通达自主研发的基因修饰明星小鼠模型 NPG 小鼠，荣登国际著名学术期刊《Cell》，人源化 NPG 荣登《Molecular Therapy》。为此，维通达特推出【大小鼠基因敲除服务 买一赠一活动】。我们用更便捷、更专业、更优质的动物模型，助您成就科研梦想。活动时间：2017 年 6 月 1 日～2017 年 8 月 31 日活动内容：基因敲除小鼠 49800（买一赠一） 立即购买 >> 1.最快... 查看更多
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2021-06-03
基因敲除CruiserCel同源。该酶能够高效特异地识别异源双链的突变位点，并从突变位点的端高效地切割异源双链。基因敲除 特点20min ●特异性极高：精准定位突变位点，准确得出突变数 ●检测范围广：可用于检测的片段用于、、和实验的活性检测、突变效率检测、阳性克隆筛选DNA ●SNP ● ●DNA... 查看更多
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2021-09-16
动物模型是现代生命科学研究的重要工具，特别是基因工程小鼠和大鼠，在基因功能研究、人类生理病理机制研究及新药研发中起着不可替代的作用。近几年来，制备动物模型的基因敲除技术主要包括传统ES基因打靶、TALEN、CRISPR/Cas9， 近期又有一项新的基因敲除技术——TetraOne... 查看更多
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2021-08-15
广州往圣生物科技有限公司在发布的OneShine CRISPR/Cas9 基因敲除细胞文库供应信息，浏览与OneShine CRISPR/Cas9 基因敲除细胞文库相关的产品或在搜索更多与OneShine CRISPR/Cas9 基因敲除细胞文库相关的内容。 查看更多
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2018-06-02
基因敲除 基因敲除(knockout)是指一种遗传工程技术，针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏障，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。这项技术的诞生可以... 查看更多
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2021-08-25
上海麒盟生物科技有限公司在发布的CRISPR基因敲除慢病毒稳转细胞株 (LentiCas9-Stable)供应信息，浏览与CRISPR基因敲除慢病毒稳转细胞株 (LentiCas9-Stable)相关的产品或在搜索更多与CRISPR基因敲除慢病毒稳转细胞株 (LentiCas9-Stable)相关的内容。 查看更多
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2018-01-04
江苏吉锐生物技术有限公司在发布的CRISPR/Cas9植物基因敲除试剂盒-双子叶植物/单子叶植物供应信息，浏览与CRISPR/Cas9植物基因敲除试剂盒-双子叶植物/单子叶植物相关的产品或在搜索更多与CRISPR/Cas9植物基因敲除试剂盒-双子叶植物/单子叶植物相关的内容。 查看更多
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2018-06-13
转基因动物模式动物对于生命科学、人类医药和健康研究领域的发展有着不可或缺的作用，拜睿生物模式动物对于生命科学、人类医药和健康研究领域的发展有着不 查看更多
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上海博舜生物科技有限公司在发布的TALEN靶向技术CRISPR/Cas9系统制备基因敲除、基因敲入大小鼠 供应信息，浏览与TALEN靶向技术CRISPR/Cas9系统制备基因敲除、基因敲入大小鼠 相关的产品或在搜索更多与TALEN靶向技术CRISPR/Cas9系统制备基因敲除、基因敲入大小鼠 相关的内容。 查看更多
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2017-10-26
北京维通达生物技术有限公司在发布的基因敲除小鼠供应信息，浏览与基因敲除小鼠相关的产品或在搜索更多与基因敲除小鼠相关的内容。 查看更多
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2021-07-31
青岛云山生物科技有限公司在发布的Crispr-Cas9基因敲除小鼠供应信息，浏览与Crispr-Cas9基因敲除小鼠相关的产品或在搜索更多与Crispr-Cas9基因敲除小鼠相关的内容。 查看更多
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2021-08-18
随着分子生物学技术和生物信息学的发展，功能基因组学的研究已成为基因组学中引人注目的新方向和研究热点。利用结构基因组学提供的信息和产物，通过在基因组或系统水平上全面分析基因的功能，使生物学研究从单一基因或蛋白质的研究转向对多个基因或蛋白质同时进行系统的研究。「智能信息处理技术」为人力资源与社会保障部中国科学院北京分院国家级专业技术人 查看更多
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CRISPRCas9基因敲除sgRNA设计123
火力全垲2021-08-12
大家好，我是CRISPR新手。在设计一个白蛋白基因相关的sgRNA，但是白蛋白的序列有17多kb，很多设计工具都无法导入。请问大家我这个问题该怎么解决呀？？
CRISPRCas基因靶向修饰基因敲除基因打靶解读123
35z11701352021-08-07
课题设计； 5，而且其周期长工作量大. 获得Fo代小鼠. 体外转录sgRNA#47； 6. 获得F1代小鼠;Cas9进行活性检测，可实现多基因. 设计构建识别靶序列的sgRNA； 2； 5。虽然EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，并获得F1阳性杂合子小鼠. 设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒，利用PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定; 6;； 4； 7； 3，5个月得到F1F1代杂合子小鼠;，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆： 1，速度快，得到阳性克隆;Cas9 mRNA，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定; 2。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的，用G418筛选转染后的胚胎干细胞； 3，基因敲除#47； 4，并植入到假孕小鼠的子宫内、EGE技术（基于Crispr cas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术. 按照课题设计. 将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中、 利用EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠的流程 1;敲入效率高. 进一步通过PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选. 得到嵌合鼠，最快2个月即可得到F0代阳性鼠、 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程;Cas9 mRNA和打靶载体;，其实不然？一、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用； 8;敲入. 利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA#47，订购课题BAC菌。基于胚胎干细胞的基因打靶技术，EGE技术（基于Crispr cas9技术）系统构建简单将重组载体电转到胚胎干细胞中基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型. 小鼠受精卵原核注射sgRNA#47。二，在生命科学，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，完成打靶载体设计和构建。基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术、多物种基因敲除#47. 设计构建打靶载体展开
CRISPRCas9 基因敲除sgRNA 设计好之后 实验方法 123
一乽2017-10-29
这要具体分析，如果这个基因存在可变剪接，那就看这个基因是否有外显子（不为三的整倍数的外显子）是这些转录本里共有的，如果是就可以在这个外显子上设计sgRNA，这样就可以敲除掉这个外显子和其后的外显子（因为移码突变导致的提前翻译终止）。如果没有这样的外显子那就只能在不同的外显子上设计多条sgRNA，然后筛选这几个转录本都敲除成功的细胞系或实验动物就可以了（毕竟应用Cas9技术能够实现多基因敲除）。
酿酒酵母基因敲除实验顺利需多少时间 微生物 学术 科研 互...123
石原忍2021-08-04
做黄单胞，在通过Tn5构建转化子库之后，通过致病力筛选、Tail-PCR获得侧翼序列、比对获得全基因之后，将几个可能与致病力相关的基因做了敲除，现在正在构建互补载体，已经做了敲除转化子的胞外酶活性测定、胞外多糖分泌测定、生长曲线、致病性测定等等，不过不知道将互补做完了之后还有什么可以做的。
通过敲除来研究基因的功能，所谓的敲除不外乎有三种情况：1）单交换插入抗性基因使原基因失活；2）抗性基因双交换替换掉原基因；3）同框缺失即完整的使原基因敲除掉。
第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大，前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子，但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect，所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的，如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系，做了会更好。
通过敲除来研究基因的功能，所谓的敲除不外乎有三种情况：1）单交换插入抗性基因使原基因失活；2）抗性基因双交换替换掉原基因；3）同框缺失即完整的使原基因敲除掉。
第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大，前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子，但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect，所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的，如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系，做了会更好。
浅谈CRISPR/Cas9原理及优势 123
含笑饮毒酒7682017-10-29
此系统的工作原理是 crRNA（ CRISPR-derived RNA ）通过碱基配对与 tracrRNA （trans-activating RNA ）结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物，此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA。而通过人工设计这两种 RNA，可以改造形成具有引导作用的sgRNA （singleguide RNA ），足以引导 Cas9 对 DNA 的定点切割。
作为一种 RNA 导向的 dsDNA 结合蛋白，Cas9 效应物核酸酶是已知的第一个统一因子（unifying factor），能够共定位 RNA、DNA 和蛋白，从而拥有巨大的改造潜力。将蛋白与无核酸酶的 Cas9（ Cas9 nuclease-null）融合，并表达适当的 sgRNA ，可靶定任何 dsDNA 序列，而 sgRNA 的末端可连接到目标DNA，不影响 Cas9 的结合。因此，Cas9 能在任何 dsDNA 序列处带来任何融合蛋白及 RNA，这为生物体的研究和改造带来巨大潜力。向左转|向右转
作为一种 RNA 导向的 dsDNA 结合蛋白，Cas9 效应物核酸酶是已知的第一个统一因子（unifying factor），能够共定位 RNA、DNA 和蛋白，从而拥有巨大的改造潜力。将蛋白与无核酸酶的 Cas9（ Cas9 nuclease-null）融合，并表达适当的 sgRNA ，可靶定任何 dsDNA 序列，而 sgRNA 的末端可连接到目标DNA，不影响 Cas9 的结合。因此，Cas9 能在任何 dsDNA 序列处带来任何融合蛋白及 RNA，这为生物体的研究和改造带来巨大潜力。向左转|向右转
转基因和基因敲除技术介绍 123
2021-07-27
转基因动物(Transgenic animal) 指基因组中整合有外源基因, 并能表达和遗传的一类动物。转基因体系打破了自然情况下的种系隔离, 使基因能在种系遥远的机体间流动, 既可加快家畜品种的改良力度, 提高畜产品品质, 又可生产珍稀药用蛋白.
基因敲除指利用染色体间基因打靶的原理，通过将设计好的打靶载体导入细胞后，同源臂发生同源重组，从而在基因组的某个特定位点引入预定的突变，获得基因型发生了改变的动物。可以分为基因敲入和基因敲出：基因敲入即引入新的基因或突变；基因敲出即使某个特定的基因得到破坏，可以用于研究基因的功能。
基因敲除指利用染色体间基因打靶的原理，通过将设计好的打靶载体导入细胞后，同源臂发生同源重组，从而在基因组的某个特定位点引入预定的突变，获得基因型发生了改变的动物。可以分为基因敲入和基因敲出：基因敲入即引入新的基因或突变；基因敲出即使某个特定的基因得到破坏，可以用于研究基因的功能。
利用CRISPRCas9特异敲出microRNA基因家族的方法123
2楼司马笑逞鼏2021-08-10
我想理论上应该行不通吧？还是用基于同源重组的策略吧。在MicroRNA基因上或附近用CRISPR制造DSB，同时转同源重组载体来增加效率是可行的。
“基因敲除狗”是怎么造出来的?_科技_123
遁底耪车762021-07-26
近日，中国科学家利用基因编辑技术——CRISPR/Cas9，对抑制狗骨骼肌生长的基因（MSTN）进行了敲除，培育出两只肌肉发达的“大力神”狗，成功构建了世界首个基因敲除狗模型。
科研人员所使用的“基因编辑技术”，顾名思义，能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势，技术不断改进后，更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。
一、与诺奖“擦肩而过”的CRISPR/Cas9技术
这不是CRISPR/Cas9这项明星技术第一次得到人们的关注。在此之前，有着“豪华版”诺奖之称的“2015年度生命科学突破奖”颁发给了发现基因组编辑工具“CRISPR/Cas9”的两位美女科学家——珍妮弗·杜德娜和艾曼纽·夏邦杰。二人更是获得了2015年度化学领域的引文桂冠奖——素有诺奖“风向标”之称，曾被认为是今年诺贝尔化学奖的最有力竞争者。
那CRISPR/Cas9到底是一项什么技术，为何能够获得如此这般青睐，又何以在短短两三年时间内，发展成为生物学领域最炙手可热的研究工具之一，并有近700篇相关论文发表？它将来又会如何影响到我们的生活？
CRISPR/Cas9是继“锌指核酸内切酶（ZFN）”、“类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）”之后出现的第三代“基因组定点编辑技术”。与前两代技术相比，其成本低、制作简便、快捷高效的优点，让它迅速风靡于世界各地的实验室，成为科研、医疗等领域的有效工具。
科研人员所使用的“基因编辑技术”，顾名思义，能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势，技术不断改进后，更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。
一、与诺奖“擦肩而过”的CRISPR/Cas9技术
这不是CRISPR/Cas9这项明星技术第一次得到人们的关注。在此之前，有着“豪华版”诺奖之称的“2015年度生命科学突破奖”颁发给了发现基因组编辑工具“CRISPR/Cas9”的两位美女科学家——珍妮弗·杜德娜和艾曼纽·夏邦杰。二人更是获得了2015年度化学领域的引文桂冠奖——素有诺奖“风向标”之称，曾被认为是今年诺贝尔化学奖的最有力竞争者。
那CRISPR/Cas9到底是一项什么技术，为何能够获得如此这般青睐，又何以在短短两三年时间内，发展成为生物学领域最炙手可热的研究工具之一，并有近700篇相关论文发表？它将来又会如何影响到我们的生活？
CRISPR/Cas9是继“锌指核酸内切酶（ZFN）”、“类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）”之后出现的第三代“基因组定点编辑技术”。与前两代技术相比，其成本低、制作简便、快捷高效的优点，让它迅速风靡于世界各地的实验室，成为科研、医疗等领域的有效工具。
CRISPR/Cas9 系统目前的研究热点有哪些方面?123
TASG13072017-10-02
1.什么是CRISPR/Cas9？
CRISPR----Clustered Regularly Interspaced
Short Palindromic Repeats
是在细菌和古细菌中广泛存在的成簇的、有规律的、间隔的短回文重复序列。07年，发现细菌可以用CRISPR系统抵抗噬菌体的入侵；08年，发现细菌的
CRISPR系统能够阻止外源质粒的转移。是细菌的一种获得性免疫系统。
Cas----CRISPR-associated
CRISPR/Cas9----CRIPSR-
Cas系统分为Type I、TypeII 、Type III三种类型。在TypeII
系统中包含一个标志性的Cas9蛋白（参与crRNA的成熟以及降解入侵的噬菌体DNA或外源质粒)。CRISPR/Cas系统和Cas9蛋白结合成复合
体，发挥识别和降解入侵的外源DNA功能。
2.CRISPR/Cas9的优缺点
优点：
构建方便简单快捷
高效的介导基因定点敲入和基因组的点突变
精确的切口酶活性提高了基因治疗的安全性
缺点：
严重的脱靶性
3.CRISPR/Cas9的用途
CRISPR/Cas9被改造成第三代人工核酸内切酶（前两代分别是ZFN和TALEN），用于复杂基因组的编辑，目前该技术应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠及细菌的基因组精确修饰。
4.CRISPR/Cas9目前热点
CRISPR/Cas9有个极大的优势就是可以改造为切口酶，在DNA的特定位置制造单链切口，这样不会引起非同源末端连接，但是可以激活同源细胞的重组。
这套系统目前的主要用途是在以下几个方面：
基因定点InDel突变
基因定点敲入
两位点同时突变
小片段的缺失
编码基因和非编码基因（lncRNA、microRNA）的靶向基因敲除
CRISPR----Clustered Regularly Interspaced
Short Palindromic Repeats
是在细菌和古细菌中广泛存在的成簇的、有规律的、间隔的短回文重复序列。07年，发现细菌可以用CRISPR系统抵抗噬菌体的入侵；08年，发现细菌的
CRISPR系统能够阻止外源质粒的转移。是细菌的一种获得性免疫系统。
Cas----CRISPR-associated
CRISPR/Cas9----CRIPSR-
Cas系统分为Type I、TypeII 、Type III三种类型。在TypeII
系统中包含一个标志性的Cas9蛋白（参与crRNA的成熟以及降解入侵的噬菌体DNA或外源质粒)。CRISPR/Cas系统和Cas9蛋白结合成复合
体，发挥识别和降解入侵的外源DNA功能。
2.CRISPR/Cas9的优缺点
优点：
构建方便简单快捷
高效的介导基因定点敲入和基因组的点突变
精确的切口酶活性提高了基因治疗的安全性
缺点：
严重的脱靶性
3.CRISPR/Cas9的用途
CRISPR/Cas9被改造成第三代人工核酸内切酶（前两代分别是ZFN和TALEN），用于复杂基因组的编辑，目前该技术应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠及细菌的基因组精确修饰。
4.CRISPR/Cas9目前热点
CRISPR/Cas9有个极大的优势就是可以改造为切口酶，在DNA的特定位置制造单链切口，这样不会引起非同源末端连接，但是可以激活同源细胞的重组。
这套系统目前的主要用途是在以下几个方面：
基因定点InDel突变
基因定点敲入
两位点同时突变
小片段的缺失
编码基因和非编码基因（lncRNA、microRNA）的靶向基因敲除
《鼠年说鼠》第十四期:CRISPR/Cas9条件性基因敲除鼠如何鉴定?123
no1lbt2021-08-14
请教各位大神，CRISPR/Cas9基因敲除的小鼠（完全性敲除）构建后，鉴定的方法是不是只要PCR扩增进行基因型鉴定就可以了？核型鉴定及southernblot检测需不需要呢？谢谢！
CRISPRCas9基因敲除实验步骤 day 25？ 正式实验123
miSAKA5802021-08-06
载体里有没有抗性基因啊
【原创】CRISPR/Cas9 Talen基因敲除技术交流_问答详情_CRISPR基...123
晴天20142021-09-13
大家好，对于新技术CRISPR/Cas9Talen-基因敲除，这里有一个群，331527578，群里有一些资料，欢迎大家进群学习、交流331527578331527578
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