
Description
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TransfectionReagentforCT26.WTCells(ColonCarcinomaCells,CRL-2638)
- Proprietarycationiclipidsformulation
- HightransfectionefficiencyofsmallRNA(siRNA,shRNA,miRNA),mRNA,pDNA
- Effectiveandrobustintracellulardelivery
- Producesconsistentresults,lot-to-lot,plate-to-plate,andwell-to-well
- DownloadinvitroCT26WTtransfectionprotocol:[PDF]
- Download CT26.WTCRISPR/Cas9transfectionprotocol:[PDF]
- DownloadPowerPointpresentationforCT26WTcellstransfectionkit:[PPT]
- DevelopedandmanufacturedbyAltogenBiosystems
TransfectionEfficiency:
Reagentexhibitsatleast92%transfectionefficiencyofsiRNAdelivery.TransfectionefficiencywasdeterminedbyqRT-PCR.
TransfectionProtocolandMSDS:
DownloadAltogenBiosystemsCT26WTTransfectionProtocol:[PDF]
DownloadMSDS:[PDF]
CT26.WTCellLine:
ColoncanceristhefourthmostcommoncancerdetectedintheUnitedStates.InadditiontobeingresponsIBLeforover95,000newcasesannually,ithasanincreasedincidencerateinpatientsyoungerthanage50,aspertheColonCancerAlliance(CCA).TheCT26.WTcoloncancercelllinewasderivedfromBALB/cmicethatdevelopedaggressivecoloncarcinomaasaresultofchemicallyinducedmutationandclonedwiththeretroviralvectorLXSN,containingthelacZgene.CT26.WTisahighlytumOrigeniccellline,whichiscommonlyemployedinthedrugdevelopmentforcoloncancer.Also,CT26.WTcellsareoftenusedasamodelforthetestingofimmunotherapyprotocols,aswellastransfectionhostcelllineforresearchstudiesontheimmuneresponse.AltogenBiosystemsprovideslipid-basedhigh-efficiencytransfectionreagentkitsfortheCT26.WTcelllinethathavedemonstratedconsistentresultsandlowcytotoxicity.
Data:
Figure1.CyclophilinBsilencingefficiencywasdeterminedbyqRT-PCRinCT26WTcellstransfectedbyCyclophilinBsiRNAornon-silencingsiRNAcontrolfollowingtherecommendedtransfectionprotocol.CyclophilinmRNAexpressionlevelsweremeasured48hourspost-transfection.18SrRNAlevelswereusedtonormalizetheCyclophilinBdata.Valuesarenormalizedtountreatedsample.Dataarepresentedasmeans±SD(n=6).
Figure2.ProteinexpressionofCyclophilinBinCT26.WTcells.DNAplasmidexpressingCyclophilinBorsiRNAtargetingCyclophilinBweretransfectedintoCT26.WTcellsfollowingAltogenBiosystemstransfectionprotocol.At72hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyWesternBlotforproteinexpressionlevels(normalizedbytotalprotein,10µgoftotalproteinloadedpereachwell).Untreatedcellsusedasanegativecontrol.
CT26.WTTransfectionReagent
AltogenBiosystems:
AltogenBiosystemsisalifesciencescompany thatoffers celltype-specificandpre-optimizedtransfection products, electroporationkits,and invivo deliveryreagents.Advancedformulationofreagentsandoptimizedtransfectionprotocolsprovideefficientintracellulardeliveryofprotein,DNA,mRNA,shRNA andsiRNAmolecules.Readmore abouttransfectiontechnologyatAltogen’s TransfectionResource.
AltogenLabsResearchServices:
AltogenLabsprovidesGLP-compliantcontractresearchstudiesforpre-clinicalresearch,INDapplications,anddrugdevelopment.BIOLOGyCROservices include:Xenograftmodels(30+),developmentofstablecelllines,ELISAassaydevelopment,cell-basedandtissuetargetedRNAistudies,safetypharm/toxassays,andotherstudies(visitAltogenLabs.com).
VolumeOptions:
- 0.5ml(Catalog#6454)
- 1.5ml(Catalog#6455)
- 1.5mlCRISPR(Catalog#2134)
- 8.0ml(Catalog#6456)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
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而且直接使用自制的PEI非常便宜,在293上远比商品化的脂质体要好。
另外,如果你们实验室确实钱多,不怕花钱,建议你取用Promega的FugenHD,那个转染效率比脂质体更好,而且毒性小,至于价格。。。。。。。。。。。也更高。。。。。。。。。
另外,你说漂浮的细胞有表到GFP,那个不一定是真的GFP,很多时候
内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁(cellwall)上的特有成分,主要是脂多糖中的类脂A,在细菌被裂解时被释放出来,由于其化学结构和特性,在质粒的纯化过程中很容易混入质粒DNA一同提取出来。内毒素的存在会严重的影响质粒转染细胞的效率,此外会激活造血细胞(如B细胞、巨噬细胞等)的非特异免疫反应,造成实验的假阳性,所以转染级质粒的提取纯化必须去除内毒素。
近期,上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofecttransfectionreagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(Engreen)进行了一次RNA转染比较。比较情况如下:
实验方法
转染试剂:Turbofecttransfectionreagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(EngreenBiosystemCo,Ltd)
待处理细胞:humanCD8+T细胞
1.针对Turbofect转染的方法
每孔培养体积均为100μL,细胞数目在105左右。
取0.5μLagomir,加入9.5μL无血清RPMI1640,充分混匀;
取0.2μLTurbofecttransfectionreagent和agomir稀释液充分混合。
转染复合物制备完成;混匀后室温下孵育15-20分钟,直接取10μL加入已铺好细胞的孔中,继续培养24h收取细胞,用PBS洗涤3次以上,以备RNA抽提。
转染Mix的配制:100nMago/N.C.:(0.5μLagomir+0.2μLTurbofect+9.3μL无血清的RPMI1640)×2.5=1.25+0.5+23.25
2.EntransterTM-R4000转染
每孔培养体积均为100μL,细胞数目在105左右。
取0.5μLagomir,加入9.5μL无血清RPMI1640,充分混匀,制成10μLagomir稀释液;
取0.25μLEntransterTM-R4000,然后加入9.75μL无血清稀释液体,充分混匀,制成10μLEntransterTM-R4000稀释液;
将EntransterTM-R4000稀释液和agomir稀释液充分混合(可用振荡器或加样器吹吸10次以上),室温静置15分钟。
转染复合物制备完成;
将20μL转染复合物加入孔中的细胞悬液中,前后移动培养皿,混合均匀;
转染后6h观察细胞状态,并更换培养基,继续培养24h后收取细胞,用PBS洗涤3次以上,以备RNA抽提。
转染Mix的配制:100nMago/N.C.:(0.5μLagomir+9.5μL无血清的RPMI1640)×2.5=1.25+23.75;Etranster稀释液:(0.25μLEtranster+9.75μL无血清的RPMI1640)×5=1.25+48.75(室温静置5分钟),取20μL至ago和N.C.管中,室温静置15分钟。
实验结果
结论:从目的miRNA表达水平的检测结果来看,转染24h后,英格恩生物公司(EngreenBiosystem)的EntransterTM-R4000(ago/NC:422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂(ago/NC:285870倍)。
讨论:从实验结果来看,英格恩生物公司(EngreenBiosystem)的EntranstenTM-R4000(ago/NC:422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂(ago/NC:285870倍)。EntransterTM-R4000是英格恩生物(EngreenBiosystem)最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA,而且针对mRNA等长链RNA优化。该试剂可将RNA导入多种细胞系,包括原代细胞和悬浮细胞。无论有无血清、抗生素存在均可获得很高的转染效率。
对重复性要求不高的试验,一般没有问题的,只不过可能需要增加一些转染试剂用量了。
为了避免这个问题,推荐收到货之后,进行适当分装,用多少,拿出来多少最好。

