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TheNativeAntigenCompany/Rabbit Anti-Borrelia burgdorferi sensu stricto (ZS7) Flagellin Antibody/25ug/PAB21453-25_蚂蚁淘,【正品极速】生物医学科研用品轻松购|ebiomall 蚂蚁淘商城
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TheNativeAntigenCompany/Rabbit Anti-Borrelia burgdorferi sensu stricto (ZS7) Flagellin Antibody/25ug/PAB21453-25
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RABBIT ANTI-BORRELIA BURGDORFERI SENSU STRICTO (ZS7) FLAGELLIN ANTIBODY

This is a polyclonal antibody, prepared against Flagellin from the spirochete B. burgdorferi, for use in ELISA and Western blotting applications.

PRODUCT DETAILS – RABBIT ANTI-BORRELIA BURGDORFERI SENSU STRICTO (B31) VLSE ANTIBODY

  • Rabbit anti-B. burgdorferi sensu stricto Flagellin polyclonal IgG antibody (strain ZS7).
  • Greater than 95% purity by SDS-PAGE and buffered in 0.02 M Potassium Phosphate, 0.15 M Sodium Chloride, pH 7.2.

BACKGROUND

Strain ZS7 was isolated from Ixodes rizinus ticks collected by flagging in the Freiburg, Germany area in the 1980s (Schutzer et al., 2011).

The flagella of B. burgdorferi are different from those of other spirochaetes in that they are not surrounded by an outer sheath layer but are comprised of a single flagellin protein. Unlike other bacterial flagella, those of the spirochaetes are situated within the periplasm and are referred to as periplasmic flagella. Studies comparing aflagellate Borrelia to flagellated indicate that the flagella have a role in the invasion of human tissue (Panelius, et al., 2001).

The 41 kD flagellin of B. burgdorferi is a major component of the periplasmic flagellar filament core, found in the hollow cylinder forming the filament. Its structure is helical, which is important for its function (Wallich, et al., 1990). The N- and C-termini of flagellin form the inner core of the flagellar filament, and the central portion of the protein makes up the outer surface. While the terminus of the protein is quite similar between all bacterial flagellins, the central portion is variable.

The flagellin genes are highly conserved among the different Borrelia species (Noppa, et al., 1995). Borrelia have double-stranded linear plasmids in addition to supercoiled circular plasmids, in low copy number. This suggests that initiation of DNA replication and partitioning are carefully controlled during the cell division cycle (Casselli, et al., 2012). Mammals often have acquired immune responses (T-cell and antibody responses) to flagellated bacterium and some bacteria are able to switch between multiple flagellin genes in order to evade this response; B. burgdorferi may also use this tactic when challenging mammals with infection (Noppa, et al., 1995).

It is believed that expression of the various proteins associated with the spirochete may be regulated by the changes in tick life cycle, changes in conditions during tick feeding (such as temperature, pH, and nutrients) and/or in coordination with the course of infection of the mammal host, i.e., changes in environment as the spirochete migrates from the tick’s midgut to its salivary glands to the mammal host. B. burgdorferi can attach to (and also differentially express antigens in) diverse tissues within the vertebrate host and the tick vector, suggesting that physiological factors other than pH and temperature may play roles in modulating B. burgdorferi gene expression. Flagellin is considered a good candidate for serodiagnosis in early stage of Lyme disease (Liu, et al., 2016) and in some instances has been the only detectable protein in serologic assays (Wagemakers, et al., 2018).

REFERENCES

  • Casselli, T., Tourand, Y. & Bankhead, T., 2012. Altered murine tissue colonization by Borrelia burgdorferi following targeted deletion of linear plasmid 17-carried genes. Infection and Immunity, 80(5), pp. 1773-1782.
  • Liu, H. et al., 2016. Polymorphism of 41 kD Flagellin Gene and Its Human B-Cell Epitope in Borrelia burgdorferi Strains of China. BioMed Research International, Volume 2016, p. 7.
  • Noppa, L. et al., 1995. Expression of the flagellin gene in Borrelia is controlled by an alternative c factor. Microbiology, Volume 141, pp. 85-93.
  • Panelius, J. et al., 2001. Recombinant Flagellin A Proteins from Borrelia burgdorferi Sensu Stricto, B. afzelii, and B. garinii in Serodiagnosis of Lyme Borreliosis. Journal of Clinical Microbiology.
  • Schutzer, S.E. et al., 2011. Whole-genome sequences of thirteen isolates of Borrelia burgdorferi. J Bacteriol, 193, pp. 1018-1020.
  • Wagemakers, A. et al., 2018. Case report: persistently seronegative neuroborreliosis in an immunocompromised patient. BMC Infectious Diseases, Volume 18, p. 362.
  • Wallich, R. et al., 1990. The Borrelia burgdorferi flagellum-associated 41-kilodalton antigen (flagellin): molecular cloning, expression, and amplification of the gene. Infect Immun., 58(6), pp. 1711-1719.

Product datasheet – PAB21453-25Product datasheet – PAB21453-100Safety datasheet

Western blot showing detection of 0.1µg of recombinant Flagellin protein. Lane 1: Molecular weight markers. Lane 2: MBP-Flagellin fusion protein (arrowhead at expected MW: 76.3 kDa). Lane 3: MBP alone. Protein was run on a 4-20% gel, then transferred to 0.45 µm nitrocellulose. After blocking with 1% BSA-TTBS overnight at 4°C, primary antibody was used at 1:1000 at room temperature for 30 min. HRP-conjugated Goat-Anti-Rabbit secondary antibody was used at 1:40,000 in HiGlo Blocking Buffer and imaged on the VersaDoc™ MP 4000 imaging system (Bio-Rad).

Dry ice – PAB21453-25Ambient – PAB21453-100

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Origene中国区域代理艾美捷科技——cDNA/蛋白/抗体/转染试剂 发布者:艾美捷科技发布时间:2014-01-13 分享按钮 OriGene成立于1996年,立足于收集世界上最大的人全长cDNA克隆库,将其构建在统一的表达载体内,并使其商品化作为研究工具提供给全世界的科学家。随着人类基因组全测序的完成及以基因组研究为基础的研究工具的开发,使得人们可以通过系统生物学的研究,进行药物相关靶向的鉴定。OriGene的目标是提供大量全面... 查看更多>
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转染试剂的选择及转染技术        转染技术是指将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控,突变分析等的常规工具。随着功能研究的兴起,其应用越来越广泛。以下就向大家介绍一些转染的技术要点及市面上主要的转染试剂类型的选择。       常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷 贝数,产生高水平的表达,但... 查看更多>
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基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。目前,最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物,它们的特点和病毒类似,容易透过细胞膜。其中,阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率,然而在体内,它迅速被血清清除,在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,这将导致高水平的毒性,因此,在很大程度上限制了其应用。由于阳离子脂质体的局限性,阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。 查看更多>
该试剂盒由一套独特的基于阳离子脂类的载体系统1-3组成,可用于将生物学上有活性的蛋白质,肽段或抗体导入活细胞。试剂/蛋白质络合物粘在带负电荷细胞表面并通过直接与细胞膜融合或胞吞作用及随后的与内涵体融合,将捕获蛋白质释放入细胞质中而进入细胞4。形成的络合物是非共价的,因此不会干扰蛋白质的生物学活性。试剂可以用于研究细胞内信号传导,细胞周期调控,细胞凋亡,肿瘤发生和转录调节。使用Thermo Scientific蛋白质转染试剂成功导入细胞的分子包括β-半乳糖苷酶,荧光抗体,绿色荧光蛋白(GFP),高和低分子量 查看更多>
MICROFIL 血管造影剂MV-117【flowtechinc代理商】 查看更多>
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荧光互作转染细胞质粒和转染试剂需要孵育
质粒转染一般是说DNA转染,用常用的sinofection等转染试剂就可以;
小干扰RNA(Small interfering RNA;siRNA)有时称为短干扰RNA(short interfering RNA)或沉默RNA(silencing RNA),是一个长20到25个核苷酸的双股RNA,这种RNA的转染需要用专门的RNA转染试剂。
表面活性剂原理及应用 图文123
蚌硼遇淌╮2017-10-03
悬浮细胞NB4用哪种转染试剂比较好
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。

如题,PolyplusTransfection转染试剂在中国区的代理商有哪些?求推荐1-2个靠谱的,谢谢!

Signagen转染试剂(transfectionreagent)
—DNA转染试剂Polyjet-适用于普遍的哺乳动物细胞

LipoD293-适用于悬浮细胞的转染(包括昆虫细胞SF9)-对于普遍的哺乳动物细胞具有更优异的转染效率

—DNAandsiRNA转染试剂
Lipojet-适用于大多数哺乳动物细胞的转染-低毒性(无需换液)-用量少-DNA/RNA共转染(co-transfection)-效果优于Lipofectamine2000
—siRNA转染试剂
GenMute-适用于大多数哺乳动物细胞转染-低毒性(无需换液)-用量少-DNA/siRNA共转染(co-transfection)PepMute-适用于普遍的哺乳动物细胞的转染

请问您具体需要购买什么产品呢?麻烦详细描述一下,方便小v准确为您解答。

近期,上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofecttransfectionreagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(Engreen)进行了一次RNA转染比较。比较情况如下:

实验方法

转染试剂:Turbofecttransfectionreagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(EngreenBiosystemCo,Ltd)

待处理细胞:humanCD8+T细胞

1.针对Turbofect转染的方法

每孔培养体积均为100μL,细胞数目在105左右。

取0.5μLagomir,加入9.5μL无血清RPMI1640,充分混匀;

取0.2μLTurbofecttransfectionreagent和agomir稀释液充分混合。

转染复合物制备完成;混匀后室温下孵育15-20分钟,直接取10μL加入已铺好细胞的孔中,继续培养24h收取细胞,用PBS洗涤3次以上,以备RNA抽提。

转染Mix的配制:100nMago/N.C.:(0.5μLagomir+0.2μLTurbofect+9.3μL无血清的RPMI1640)×2.5=1.25+0.5+23.25

2.EntransterTM-R4000转染

每孔培养体积均为100μL,细胞数目在105左右。

取0.5μLagomir,加入9.5μL无血清RPMI1640,充分混匀,制成10μLagomir稀释液;

取0.25μLEntransterTM-R4000,然后加入9.75μL无血清稀释液体,充分混匀,制成10μLEntransterTM-R4000稀释液;

将EntransterTM-R4000稀释液和agomir稀释液充分混合(可用振荡器或加样器吹吸10次以上),室温静置15分钟。

转染复合物制备完成;

将20μL转染复合物加入孔中的细胞悬液中,前后移动培养皿,混合均匀;

转染后6h观察细胞状态,并更换培养基,继续培养24h后收取细胞,用PBS洗涤3次以上,以备RNA抽提。

转染Mix的配制:100nMago/N.C.:(0.5μLagomir+9.5μL无血清的RPMI1640)×2.5=1.25+23.75;Etranster稀释液:(0.25μLEtranster+9.75μL无血清的RPMI1640)×5=1.25+48.75(室温静置5分钟),取20μL至ago和N.C.管中,室温静置15分钟。

实验结果

结论:从目的miRNA表达水平的检测结果来看,转染24h后,英格恩生物公司(EngreenBiosystem)的EntransterTM-R4000(ago/NC:422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂(ago/NC:285870倍)。

讨论:从实验结果来看,英格恩生物公司(EngreenBiosystem)的EntranstenTM-R4000(ago/NC:422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂(ago/NC:285870倍)。EntransterTM-R4000是英格恩生物(EngreenBiosystem)最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA,而且针对mRNA等长链RNA优化。该试剂可将RNA导入多种细胞系,包括原代细胞和悬浮细胞。无论有无血清、抗生素存在均可获得很高的转染效率。


无血清,不含大量蛋白组分,不干扰DNA与转染试剂形成复合物;optimem培养基有利于细胞恢复健康状态:其中使用了 HEPES 和碳酸氢钠进行缓冲,并添加次黄嘌呤、胸苷、丙酮酸钠、L-谷氨酰胺、痕量元素和生长因子;其他因素;

转染技术的要点及转染试剂正确选择

转染技术是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控,突变分析等的常规工具。随着功能研究的兴起,其应用越来越广泛。以下就向大家介绍一些转染的技术要点及市面上主要的转染试剂类型的选择。
常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24-96小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染,外源DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。
转染效率收多种因素影响,主要因素有下面几个:

1.细胞培养

健康的细胞培养物是成功转染的基础。不同细胞有不同的培养基血清添加物。低的细胞代数(<50)能确保基因型不变。高的转染效率需要一定的细胞密度,一般的转染试剂都会有专门的说明。推荐在转染前24小时分细胞,这将提供正常细胞代谢,增加对外源DNA摄入的可能。一定要避免细菌,支原体或真菌的污染。

2.血清

大多数培养基在使用前需要加血清。胎牛血清(FCS)经常用到,便宜一点的有马或牛血清。通常的,血清是一种包含生长因子及其它辅助因子的不确切成分的添加物,对不同细胞的生长作用有很大的差别。血清质量的变化直接影响转染效率。因此在转染前建议先测(转右)试出对细胞生长良好的血清批号,转染时用同一批号的血清,并同时做负对照(不加转染试剂及外源DNA)以测试细胞生长是否正常。有些转染技术如脂质体转染在有血清存在情况下效率很低,因此在转染前要除血清。但有些对此敏感的细胞如原代细胞会受到损伤,甚至死亡导致转染效率极低。

3.载体构建

转染载体的构建(病毒载体,质粒DNA,RNA,PCR产物,寡核苷酸等)也影响转染结果。病毒载体对特定宿主细胞感染效率较高,但不同病毒载体有其特定的宿主,有的还要求特定的细胞周期,如逆转录病毒需侵染分裂期的宿主细胞,此外还需考虑一些安全问题(如基因污染)。除载体构建外,载体的形态及大小对转染效率也有不同的影响,如前面提到的超螺旋及线性DNA对瞬时和稳定转染的影响。如果基因产物对细胞有毒性作用,转染也很难进行,因此选择组成或可调控,强度合适的启动子也很重要,同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。

4.DNA质量

DNA质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术(如脂质体等)基于电荷吸引原理,如果DNA不纯,如带少量的盐离子,蛋白,代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成及转染的进行。核酸纯化世界第一品牌德国Qiagen公司提供的超纯质粒抽提试剂盒,能达到两倍2xCsCl梯度离心以上的纯度效果,使您不必为DNA质量操心。此外,对一些内毒素敏感的细胞(如原代细胞,悬浮细胞和造血细胞),QIAGEN还提供可去除内毒素污染的质粒抽提试剂盒,在质粒抽提过程中有效去除脂多糖分子,保证理想的转染效果。

5.转染技术

转染技术的选择对转染结果影响也很大,许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例,细胞数量,培养及检测时间等。一些传统的转染技术,如DEAE右旋糖苷法,磷酸钙法,电穿孔法,脂质体法各有利弊,其主要原理及应用特点见下:

转染方法原理应用特点

DEAE-右旋糖苷法

带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞瞬时性转染相对简便、结果可重复但对细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清
磷酸钙法
磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞稳定转染,瞬时性转染不适用于原代细胞,操作简便但重复性差,有些细胞不适用。
电穿孔法
高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA通过膜上形成的小孔导入稳定转染,瞬时性转染,所有细胞适用性广但细胞致死率高,DNA和细胞用量大,需根据不同细胞类型优化电穿孔实验条件

阳离子性的脂质体法
带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞稳定转染

瞬时性转染,所有细胞适用性广,转染效率高,重复性好但转染时需除血清

转染效果随细胞类型变化大

病毒介导法
逆转录病毒通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中稳定转染,特定宿主细胞可用于难转染的细胞、原代细胞,体内细胞等,但携带基因不能太大
细胞需处分裂期,需考虑安全因素,腺病毒瞬时转染,特定宿主细胞可用于难转染的细胞,需考虑安全因素。

Biolistic颗粒传递法
将DNA用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的颗粒用弹道装置投射入细胞,DNA在胞内逐步释放,表达瞬时性转染可用于:人的表皮细胞,纤维原细胞,淋巴细胞系以及原代细胞

显微注射法
用显微操作将DNA直接注入靶细胞核稳定转染,瞬时性转染转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞。

脂质体的转染毒性是最大的,很明显,那么多的细胞死亡是由于转染的细胞毒性导致的。对于这一点我有两个建议,一个是减少DNA的用量,我一般做转染,对于任何细胞,只要是12孔板,一般都是用1ugDNA,这个量绝对够了。,因为质粒转染进入细胞的本质,和病毒感染没区别,质粒的各种元件会从宿主细胞内抢夺细胞机器大量开始转录翻译你的目的蛋白,在这个过程中会产生大量的没有正确折叠蛋白,这些异常折叠蛋白进一步引起ER stress导致细胞凋亡。因此你用DNA太多,本身就有细胞毒性。另外就是脂质体本身的毒性。事实上,对于293系的细胞系,最好用的是PEI这种东西。毒性小,转染效率高,一般对293系列的细胞系可以轻易达到80%。polyscience有粉末买,买回来后直接在分子纯度的水里配置成1ug/uL的溶液,和你的质粒按照1ug DNA/6ug PEI对293进行转染。
而且直接使用自制的PEI非常便宜,在293上远比商品化的脂质体要好。

另外,如果你们实验室确实钱多,不怕花钱,建议你取用Promega的FugenHD,那个转染效率比脂质体更好,而且毒性小,至于价格。。。。。。。。。。。也更高。。。。。。。。。

另外,你说漂浮的细胞有表到GFP,那个不一定是真的GFP,很多时候
RNA转染与甲状腺炎研究123
qingwudarao2021-07-20

EntransterTM-R4000是英格恩生物(EngreenBiosystem)最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA,而且针对mRNA等长链RNA优化。由于纳米技术的应用,EntransterTM-R4000能做到高达90%的转染效率和60-90%的沉默效率,对难转染细胞和原代细胞也非常适用。

先附上一篇英格恩生物RNA转染试剂转染mir-346至Jurkat细胞研究甲状腺的文献,以供参考。



RNA转染试剂转染Mir-346至Jurkat细胞研究甲状腺.pdf(5947.72k)
试剂方面,大致下面三个组分。DNA转染试剂制备复合物需要的基础培养基或者150mM氯化钠溶液。
推荐做一个小样转染验证试验(设定一下梯度),没有问题就正常使用。
对重复性要求不高的试验,一般没有问题的,只不过可能需要增加一些转染试剂用量了。

为了避免这个问题,推荐收到货之后,进行适当分装,用多少,拿出来多少最好。
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