中国有色金属张江峰：我国锂产业将平稳发展_中国电池网 ...
| 规格： | 1.0ml |
转染概要
1.细胞状态很大程度上影响了转染效率，转染时保证细胞状态良好，在细胞状态不好的情况下，建议重新准备原代培养的神经元细胞进行转染。
2.为优化转染条件，推荐使用Opti-MEM培养基制备转染试剂和质粒复合物；如果没有准备Opti-MEM培养基则用无血清培养基代替。
3.为起始优化转染条件，转染细胞时可以分别用1/2、2/2、3/2、4/2、5/2转染试剂（μl）和质粒的比例（μg）分别转染。
4.为增加实验的准确性和减少检测的误差，建议进行三个平行孔实验。
5.质粒的抽提质量对转染的效果有很大的影响，建议使用高质量无内毒素抽提的超纯质粒，其螺旋质粒含量大于80%，OD260/OD280>1.8。
转染流程
1.转染前一天，将细胞悬液接种到孔板中，控制细胞转染时的汇合率为70-90%。
2.制备转染试剂和质粒的复合物：
a.取待转染质粒，用Opti-MEM培养基轻轻混匀；
b.取Trans-EZ转染试剂，用Opti-MEM培养基轻轻混匀；
c.将Trans-EZ稀释液滴加到质粒稀释液中，边加边轻轻混匀后在室温放置20分钟，使DNA和Trans-EZ充分结合形成稳定的转染复合体。
3.取出细胞培养板，将步骤2得到的DNA-Trans-EZ复合体加入到接种好的细胞中，前后轻轻推摇孔板使混合均匀，做好标记，放回培养箱。
4.转染24-48小时后，观察质粒荧光转染效果，或者检测Luciferase酶活性，或者收取总蛋白做WesternBlot/RT-PCR等检测。
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发布于 ： 2016-08-23
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