关于KpnI&BamHI双酶切
2021-08-04
问题描述：
近来做构建，经常用KpnI和BamHI做双酶切，但这两个酶的酶切条件不同,KpnI为Lbuffer37度,BamHI为Kbuffer30度,我师兄建议我用单酶切,费时费力,后来我用双酶切发现效果也很好.
反应体系如下:
plasmid10ul
10xKbuffer5ul
KpnI1ul
BamHI1ul注意千万不可多加总酶量必须<4%
ddH20upto50ul
总体积改变加酶量按比例改变.
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ggjun
用户
lifei BamHI 1ul注意千万不可多加总酶量必须<4% 顺便问问：1.你用的是哪个酶的buffer？2. 4%是体积比吗？3.如果我用10ul的反应体积，加酶量都为0.2ul吗？
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lifei
用户takara的酶,是体积比,10ul体系各用0.2ul是可以的,但是0.2ul体积太小了,加样误差太大,容易加多,建议你用20ul体积,我做过很多次,每次都切的很漂亮,不过如果你一次做很多管,一起配混合液,再分开加质粒,则没有太大关系!
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ggjun
用户你用的是哪个酶的buffer？KpnI的还是BamHI的？
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