ProductDescription
E.coliRibonucleaseH(RNaseH)isanendonucleasethatspecificallydegradestheRNAofDNA-RNAhybrids,withoutaffectingDNAorunhybribizedRNA.ThishighlypurifiedpreparationissuitedforuseinRNAAmplificationreactions.Thisenzymepreparationispreparedinastoragebuffercontaining1.0MTrehalose.
Pleaseinquireforcustomconcentrationsandbulkquantities.
Applications:
Enablingthesynthesisofsecond-strandCDNAbyremovaloftheRNA
UsedinconjunctionwithAMVRTandT7RNAPolymeraseinamplificationofRNA
UnitDefinition:
OneunitofRNaseHisthatamountofenzymewhichcatalysistheproductionofonenmolofacid-solublenucleotidein20minutesat37ºCusingthefollowingreactionconditions:
40mMTrisHCl,pH7.5
1.0µM[3H]-poly(rA):24µMpoly(dT)
4.0mMMgCl2
1.0mMDTT
30µg/mLBSA
4.0%glycerol
StorageBufferConditionsofRNaseHinGlycerol:
20:0mMTrisHCl,pH7.5
300mMKCl
20.0mMMagnesiumAcetate
7.0mMEDTA
1.0mMDithiothreitol
50%Glycerol
0.2%TritonX100
StorageBufferConditionsofRNaseHinTrehalose.Sameasabove,exceptfor1.0MTrehaloseinsteadofGlycerol.
QualityControl:
DNaseActivity:
One-halfµgofHaefragmentsofPhiX-174DNAisincubatedat37ºCwith2.5unitsofRNaseHfor3hours,andthenelectrophoresedinanativeagarosegelsimultaneouslywithcontrolpositiveDNase1reactions.Nomorethantheequivalentof2.5X10E-4unitofDNase1isdetected.
RibonucleaseActivity:
OnemicrogramofanRNALadderisincubatedfor2hoursat37ºCwith4.0unitsofRNaseH,andthenelectrophoresedinanativeagarosegelsimultaneouslywithcontrolpositiveRNase1Areactions.Nomorethantheequivalentof8X10-8unitofRNase1Aisdetected.
SpecificActivity:
ThespecificactivityoftheE.coliRNaseHisnolessthan300,000unitspermg.
References:
Sambrook,J.,Fritsch,E.F.,andManiatis,T.(1989)MolecularCloning:ALaboratoryManual,(2ndEd.),8.64–8.65
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我的质粒抽提自DH5a大肠杆菌，用EcoRI37℃酶切2h，之前还用这个酶切条件酶切了其他质粒都会出现拖带，酶量适中没有加过量，电泳上样量在200ng左右，我以为是酶不好了，用了两个牌子的酶，都会这样，我是真不明白，为什么会有这样的拖带，哪位大神可以指教一下，感激不尽！
你这里应该是单指蛋白质水解酶。事实上，细胞内所有的蛋白水解酶发挥作用都需要一定的条件，并且一般都是有特异性的。有的是序列的特异性，有的是构象的特异性。
大多数的蛋白酶都不会降解自身，因为自身不含蛋白酶的酶切位点。
当然也有特例，最常见的是自身催化酶解。
举个例子，细胞凋亡中起始型的Caspase，例如Caspase-1，在有外界刺激（例如炎症小体存在）的情况下，会自身催化，把自己切割成三个片段，其中的两个片段组合成为四聚体，在下游发挥作用。
其他能够自剪切的酶还有很多，很多酶的成熟都需要外界刺激诱发蛋白酶原的自剪切。例如胰蛋白酶、弗林蛋白酶等。
当然发生这所有的催化反应都是需要特定的条件的。
还有一类就是像胃蛋白酶一类的特异性较差的消化道蛋白酶，其实是可以降解自身的。只是需要在pH很低的情况下，这时候，往往食物来源的蛋白质含量很高，多数蛋白酶用于消化食物，少部分会降解自身（极极少量）。胃持续分泌蛋白酶，因而胃蛋白酶有损失也影响不大。
如果能分解,那小肠液中的消化酶如何大量共存,如果不能
那它如何识别其他蛋白质物质是不是消化酶?
因为溶蛋白酶是蛋白质本质的酶
共价调节酶（covalent regulatory enzyme） 是一类由其它酶对其结构进行可逆共价修饰，使其处于活性和非活性的互变状态，从而调节酶活性。共价调节酶一般都存在相对无活性和有活性两种形式，两种形式之间互变的正、逆向反应由不同的酶催化。磷酸化是可逆共价修饰中最常见的类型。因为信号激酶能作用于很多靶分子，通过磷酸化作用信号能被极大地放大。蛋白激酶的调节作用能被催化水解磷酸基团的蛋白质磷酸酶逆转。通过磷酸化和脱磷酸化作用，使酶在活性形式和非活性形式之间互变。
别构调节：酶分子的非催化部位与某些化合物可逆地非共价结合后发生构象的改变，进而改变酶活性状态，称为酶的别构调节。有些酶分子在空间至少有两个不同的部位，一个为催化部位，一个为调节部位。某些物质可以与这种酶的调节部位相互作用而使酶分子构象发生改变，进而使催化部位受到影响，导致酶的催化活性改变，这种现象称为酶的别构调节,或称别位调节、变构调节
明白了么，少年？
