
AGScientific,Inc.成立于1997年,专注于创新生化制剂以及用于诊断测试开发的定制原材料,以推进临床前研究药物开发。产品涉及抗生素,生物洗涤剂,缓冲液,诊断,酶,医疗设备试剂,蛋白酶K,还原剂,RNaseA等。
CHAPS是一种两性离子洗涤剂,广泛应用于蛋白质纯化过程。作为这类洗涤剂的一部分,CHAPS含有一个正电荷和一个负电荷,但没有一个净的总电荷。CHAPS的生物膜亲和力相对较低,但在特定的浓度范围内可以有效地诱导溶血和蛋白溶解。CHAPS被归类为一种临界胶束浓度为6-10mM的非变性表面活性剂。
CHAPS的应用:在实验室中,CHAPS和其他两性离子洗涤剂可用于在分离蛋白之前诱导细胞裂解。它也可以用作二维凝胶电泳过程中的缓冲液,在某些情况下,它比SDS等阴离子洗涤剂更受欢迎。在蛋白质分析之前,可以通过透析从溶液中去除CHAPS。另一种技术利用专门的树脂和旋转柱也可以用来有效地去除皲裂用于监测化学反应或蛋白质结合的紫外/可见光谱学•用于离子交换色谱和等电色谱•用于细胞的膜渗透•以酶特性作为变性缓冲液的成分
嘌呤霉素盐酸盐是从阿氏链霉菌中分离得到的氨基糖苷类抗生素。嘌呤霉素是一种蛋白质合成抑制剂,它将自己整合到一个正在生长的多肽链中,导致其提前终止。嘌呤霉素的主要应用是作为基因选择抗生素,在CRISPR/Cas9基因编辑中发挥重要作用。这种以盐酸盐形式存在的嘌呤霉素试剂具有抗肿瘤、抗锥虫和抗菌的特性。重要的是要将嘌呤霉素盐酸盐储存在一个密闭的容器中,并置于通风干燥的地方。
盐酸贝斯他汀是氨基肽酶,氨基肽酶B,氨基肽酶M(CD13),和链霉菌来源的亮氨酸氨基肽酶(LAP3)的一种金属蛋白酶抑制剂。这些蛋白的抑制作用是由于肿瘤细胞的凋亡诱导。Bestatin在抗癌化疗、免疫调节、镇痛等方面表现出良好的疗效。
蛋白酶K(又称内肽酶K)是一种从真菌Tritirachiumalbumlimber培养滤液中分离出的胞外内肽酶。这种独特的真菌可以降解角蛋白(因此蛋白酶“K”),并可以利用其副产品作为碳和氮的唯一来源来生长。该酶在较宽的温度和pH范围内是稳定的,在55-65℃和pH8.0时是最佳活性。它在高盐浓度下也很稳定,在强洗涤剂如SDS的存在下也很活跃。其分子量为28.5kDa,对其多肽靶点的特异性较低。
AG蛋白酶K应用于下一代测序(NGS)和微阵列技术•核酸纯化,当从酵母、细菌、哺乳动物细胞和植物细胞裂解物中提取DNA和RNA时,通过灭活核酸酶来纯化核酸•提高PCR产物的克隆效率•使用加速器质谱法对DNA加合物水平进行定量的样品准备•核糖核酸酶保护试验中鸡尾酒酶的失活•添加到提取程序,以优化微阵列研究的原始乳腺肿瘤的RNA产量应用于蛋白质•检测具有独特抗蛋白降解能力的牛海绵状脑病蛋白。•组织消解作为另一种样品制备方法,用于液相色谱-串联质谱定量分析•特异性修饰细胞表面蛋白,分析膜结构进行蛋白定位•生成用于功能研究表征的蛋白片段
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Identificationofmembranetype-1matrixmetalloproteinaseasatargetofhypoxia-inducIBLefactor-2[alpha]invonHippel-Lindaurenalcellcarcinoma.[Article]
来源
Oncogene.24(6):1043-1052,February3,2005.
AccessionNumber
00006374-200524060-00010.
Author
Petrella,BrendaL1;Lohi,Jouko3;Brinckerhoff,ConstanceE*,1,2
Institution
(1)DepartmentofBiochemistry,NorrisCottonCancerCenter,DartmouthMedicalSchool,Lebanon,NH03756,USA;(2)DepartmentofMedicine,NorrisCottonCancerCenter,DartmouthMedicalSchool,Lebanon,NH03756,USA;(3)DepartmentofPathology,HaartmanInstitute,UniversityofHelsinkiandHelsinkiUniversityCentralHospital,Helsinki,FIN-00014,Finland
摘要原文
Metastaticrenalcellcarcinoma(RCC)resultingfromthehereditarylossofthevonHippel-Lindau(VHL)tumorsuppressorgeneistheleADIngcauseofdeathinVHLpatientsduetothedeleteriouseffectsofthemetastatictumor(s).VHLfunctionsinthedestructionofthealphasubunitsoftheheterodimerictranscriptionfactor,hypoxia-induciblefactor(HIF-1[alpha]andHIF-2[alpha]),innormoxicconditions.WhenVHLfunctionislost,HIF-[alpha]proteinisstABIlized,andtargethypoxia-induciblegenesaretranscribed.Theprocessoftumorinvasionandmetastasisinvolvesthedestructionoftheextracellularmatrix,whichisaccomplishedprimarilybythematrixmetalloproteinase(MMP)familyofenzymes.Here,wedescribeaconnectionbetweenthelossofVHLtumorsuppressorfunctionandtheupregulationofmembranetype-1MMP(MT1-MMP)geneexpressionandprotein.Specifically,MT1-MMPisupregulatedinVHL-/-RCCcellsthroughanincreaseingenetranscription,whichismediatedbythecooperativeeffectsofthetranscriptionfactors,HIF-2andSp1.Further,weidentifyafunctionalHIF-bindingsiteintheproximalpromoterofMT1-MMP.Toourknowledge,thisisthefirstreporttoshowdirectregulationofMT1-MMPbyHIF-2andtoprovideadirectlinkbetweenthelossofVHLtumorsuppressorfunctionandanincreaseinMMPgeneandproteinexpression.
编译
vonHippel-Lindau(VHL)肿瘤抑制基因遗传性丢失引起的转移性肾细胞癌(RCC)在VHL病人中导致死亡的原因是转移性瘤的有害作用。在含氧正常情况下,VHL作用是破坏异二聚转录因子和缺氧诱导因子(HIF-1[a]和HIF-2[a])的a亚基。当VHL作用丧失后,HIF[a]蛋白变的稳定,并且靶缺氧诱导基因被转录。肿瘤侵入和转移的过程包括细胞外基质的破坏—主要通过基质金属蛋白酶(MMP)家族的酶完成。研究者阐明了VHL肿瘤抑制功能的丧失与I型膜基质金属蛋白酶(MT1—MMP)基因表达和蛋白质之间的联系。基因转录的增加使VHL-/-RCC细胞中MT1—MMP发生向上调节,这一作用是转录因子HIF-2[a]及sp1共同作用的结果。据称,这份论文首次报道HIF-2调节了MT1-MMP,并且提出VHL肿瘤抑制功能与MMP基因表达和蛋白质表达之间具有直接的联系。
入院10天,伴有肩部肌肉刺痛,已有好转,但今天的肝功能常规检查,转氨酶突然从140多升到310多,入院一直有互肝措施,静脉输液。无不良饮食习惯。有慢性浅表性胃炎病史。问,转氨酶突然升高的原因?各项肝炎检查无问题,ct x 光无问题
同题,请大神指正
1.反应混合液
15mM4-AA溶液0.10ml
0.2%(w/v)苯酚溶液0.10ml
2.0M甲醇溶液0.25ml
50U/mlPOD溶溶液0.10ml
超纯水0.25ml
备注:
*50U/mlPOD溶液:将500U的POD溶于10ml超纯水中并混匀。
2.反应终止液
无水乙醇
3.酶稀释缓冲液
10mMTris-HCl缓冲液pH=8.0
4.说明
(1)4-AA:4-氨基安替比林
(2)POD:辣根过氧化物酶
5.过程
精确称量约20mg样品,加酶稀释缓冲液至总量为20ml,用酶稀释缓冲液稀释,根据需要调节浓度(χ,χ≤0.04mg/ml)
6.实验
1.准确地吸取1.0ml反应混合液到小试管中后,在37℃预孵育。
2.5分钟后,加入50μL酶溶液,并在37℃混合开始反应。在空白对照中,加入50μL酶稀释缓冲液代替酶溶液。
3.在反应开始5分钟后,加入2.0ml反应终止液以终止反应。
4.测量480nm处的吸光度。
吸光度样本溶液:As
空白对照:Ab
△A=(As-Ab)≤0.20Abs
一) 酶具有高度的专一性
(二)酶具有很高的催化效率(高效性) 一般地说,醇催化的反应速度比化学催化剂催化的反应速度要市106-1013 倍
(三)反应条件温和 化学催化剂催化化学反应,一般需要剧烈的反应条什(如:高温、高压、强酸、强碱等),但是,酶催化反应(酶促反应)一般是在常温、常压、中性酸碱度等温和的反应条件下进行的.
(四)酶易变性失活 化学催化剂在一定条件下,会因中毒而失去催化能力;而酶比化学催化剂更加脆弱,更易失去活性.凡是使蛋白质变性的因素(加强酸、强碱、高温等),都能够使酶完全失去活性.
(五)体内酶活性是受调控的 在生物体内,酶活性是受到调节控制的.这是酶区别于化学催化剂的又一个重要的特征.对酶活性调控的方式很多,如:反馈调节、共价修饰调节、酶原激活、别构调节、激素调节等.
ALT主要存在于肝细胞浆内,其胞内浓度高于血清中1000-3000倍。只要有1%的肝细胞坏死,就可以使血清酶增高一倍。因此,ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。但它并不具器官专一性,许多疾病都可以引起它的增高。明显升高见于急性病毒性肝炎,中度升高见于慢性肝炎、肝硬化活动期、肝癌、肝脓肿,心梗、心肌炎、心衰等也可轻度升高。因此对ALT升高的评价应密切结合临床。部分ALT升高与脂肪肝、饮用酒精有关。临床常用的保肝药物较多。但有些药物治疗效果可以但容易反复,致使一些肝脏疾病长期不能治愈,大量的肝细胞遭受破坏。如何保护肝细胞,是保护肝脏功能的关键所在。
转氨酶只不过是临床上常用的检查肝脏功能的一项指标,转氨酶的正常与否,并不能代表肝功能的好坏,转氨酶的高低也不是与肝脏功能状态呈比例的,转氨酶”水平的高低几乎不能反应肝脏的功能,转氨酶不过是肝细胞里面的一种成分而已,相比较而言这种成分在肝细胞中的含量比较高,肝细胞一旦遭到打击和破坏,转氨酶就被释放到了血液。而在这个时候,如果损害的肝脏细胞不多,肝脏完全能够正常工作
通常,体检中主要检查的转氨酶是丙氨酸转氨酶(ALT)。1%的肝脏细胞损害,
可以使血中ALT的浓度增加1倍。因此,ALT水平可以比较敏感地监测到肝脏是否受
到损害。
转氨酶水平在0—40之间是正常的。如果超出正常范围,医生会建议再查一次
,排除由于实验室设备故障和操作错误等因素造成误差的可能。如果转氨酶水平还
高,多半是由病毒性肝炎或其他肝病所致。但要确定是不是病毒性肝炎,还需要做
其他检查,结合病史、症状、体征等全面分析。
即使确认是病毒性肝炎,也不能简单地以ALT升高的程度来判断病情,因为对
于重型肝炎,可能由于存活的肝细胞比较少,释放到血液中的转氨酶很少,ALT反
而随病情的恶化而降低。
转氨酶高不都是肝炎
ALT的升高只表示肝脏可能受到了损害。除了肝炎,其他很多疾病都能引起转
氨酶增高。主要还有以下情况:
首先,人体内许多组织都含有转氨酶,比如心肌炎和心肌梗死都可能使天冬氨
酸转氨酶升高。
其次,如果有胆结石等胆道梗阻性疾病,可能因为淤胆而使血中转氨酶水平升
高。
此外,对于一些看起来没什么大病的人来说,还有可能因为长期酗酒导致酒精
肝,或饮食结构不合理导致脂肪肝,造成转氨酶高。
劳累也可能让转氨酶升高
对于健康人来说,转氨酶水平在正常范围内升高或降低,并不意味着肝脏出了
问题,因为转氨酶非常敏感,健康人在一天之内的不同时间检查,转氨酶水平都有
可能产生波动。
另外,健康人的转氨酶水平也有可能暂时超出正常范围。剧烈运动、过于劳累
或者近期吃过油腻食物,都可能使转氨酶暂时偏高。如果在检查转氨酶前一晚加班
工作,没睡好觉,或是体检前早餐时吃了油炸的东西,检查结果可能就会超出正常
范围。一个人刚刚在操场上跑了几圈,就立刻检查他的转氨酶水平,结果也可能会
高出正常范围。
如果是由于这些情况导致转氨酶升高,只要好好休息,过一段时间后再做检查
,就会发现转氨酶水平恢复正常了。
还有一种会造成转氨酶升高的情况是生病时吃了会损伤肝脏的药物,比如红霉素、四环素、安眠药、解热镇痛药、避孕药,还有半夏、槟榔、青黛等中药。在停用这些药物后,转氨酶水平会很快恢复正常。
总之,如果发现自己转氨酶高了,不要过于紧张,不要担心自己患了严重的肝脏疾病,但是也一定要给予足够的重视,好好休息,及时接受
正规复查和治疗。展开
酶只是催化剂,其本身无法直接氧化它。
酶是具有生物催化功能的生物大分子,即生物催化剂,它能够加快生化反应的速度,但是不改变反应的方向和产物。其只能用于改变各类生化反应的速度,但并不是生化反应本身。只是催化剂的一种。
所以NADPH氧化酶只是促进了NADPH的氧化过程,无法直接氧化NADPH。
相同点:都能以DNA为模板,从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP;DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物,而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能,而DNA聚合酶没有,当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。
4、RNA聚合酶只具有5‘到3’端的聚合酶活性,而DNA聚合酶不仅有5‘到3’端的聚合酶活性,还具有3‘到5’端的外切酶活性。保证DNA复制时候校对,所以复制的忠实性高于转录的。
5、RNA聚合酶通常作用于转录过程;DNA聚合酶通常作用于DNA复制过程

