E. coli Gyrase
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E. coli Gyrase
DNA gyrase is a bacterial type II topisomerase which can introduce negative supercoils into DNA. It is a target for both quinolone and coumarin drugs and can be used for screening potential antibacterial compounds. It is prepared from the over producing strains JMtacA and JMtacB1 and is supplied as an A2B2 complex.
Store at -80°C.
All enzyme is supplied with 5X concentrated Assay Buffer and Dilution Buffer which are also available separately. 1 U of gyrase will supercoil 0.5 µg relaxed pBR322 DNA in 30 minutes at 37°C.
See technical documents below for more detailed information and lot specific activities.
Technical Documents
E. coli Gyrase Supercoiling Assay Kits
Kits are available containing everything required to perform supercoiling reactions and to test inhibitors. They contain the enzyme, relaxed DNA substrate and the Assay and Dilution buffers.
Technical Documents
E. coli Gyrase Cleavage Assay Kits
Some drugs interrupt the DNA breakage-reunion step of the gyrase reaction. This leads to cell death and it is the mechanism behind the action of the quinolones such as nalidixic acid and ciprofloxacin. Cleavage assays are particularly useful in determining if a potential drug acts by this mechanism.
These kits are designed specifically for cleavage reactions. They contain the supercoiled pBR322 DNA substrate and the Assay and Dilution buffers required for DNA cleavage reactions in addition to the enzyme and linearised pBR322 marker.
Cleavage specific enzyme available separately on request.
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E. coli Gyrase Assay Kits for Cell Extracts
These kits are designed for assaying cell extracts containing E. coli gyrase and partially purified fractions and contain relaxed DNA substrate, Assay buffer, Dilution buffer and control supercoiled DNA.
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E. coli Gyrase ATPase Kits
These kits can be used to test the effects of potential ATPase inhibitors. For example, the coumarin drugs such as novobiocin inhibit the action of DNA gyrase by competitively inhibiting the hydrolysis of ATP thus preventing supercoiling.
These assays are microtitre plate-based and thus large numbers of compounds can be screened in a relatively short period of time. They also continuous assays which can provide more information than an end point assay.
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High / Medium-Throughput Assay Kit - E. coli Gyrase
The kit is supplied with sufficient E. coli gyrase enzyme, plasmid DNA substrate, buffers and other assay components for 100 assays. The enzyme is supplied at a concentration of 5 U/μl in Dilution Buffer. The kit is also supplied with sufficient wash buffers for one 96-well plate. These buffers are supplied as 20X concentrates and must be diluted with ultra pure water prior to use.
More information about this assay can be found on the "Services" page under "High/Medium Throughput Assay".
Kit issued with limited licence for individual use only.
Patent held by Inspiralis Ltd., Norwich, Norfolk, UK. (Patent No. GB0424953.8, US7838230)
Technical Documents
References
- Hallett, P., Grimshaw, A.J., Wigley, D.B. and Maxwell, A. (1990) Cloning of the DNA gyrase genes under tac promoter control: overproduction of the gyrase A and B proteins. Gene 93: 139-142
- Maxwell, A., Burton, N.P. and O"Hagan, N. (2006) High-throughput assays for DNA gyrase and other topoisomerases. Nucleic Acid Res. 34 (15), e104
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非病理原因导致转氨酶高得情况
1、健康人如果剧烈运动后检查转氨酶就会发现转氨酶升高。
2、如果过于劳累，会导致转氨酶升高。
3、检查前如果吃过油腻的食物或酗酒都会导致转氨酶升高。
4、怀孕的人，也会导致内分泌失调，使得转氨酶升高;
5、营养不足 饮食结构不合理如低蛋白饮食，尤其是当食物中缺乏胱氨酸、维生素E时，亦可使ALT升高。
6、日常服用的药物所产生的副作用也会导致转氨酶升高，比如红霉素、安眠药、解热镇痛药、避孕药膏还有半夏、槟榔、青黛等中药。
病理性原因导致转氨酶高得情况
1、病毒性肝炎这是引起转氨酶高常见的疾病，其他类型的肝炎也可导致转氨酶高。
2、多种药物和化学制剂都能引起转氨酶高，但停药后可恢复正常。
3、肝硬化与肝癌肝硬化活动时，一般都会出现转氨酶高。
4、胆道疾病如胆囊炎、胆石症急性发作时，除伴有发热、腹痛、恶心、呕吐、黄疸等情况外，还可引起血胆红素及转氨酶高。转氨酶是从胆管排出的，如果有胆管、胆囊及胰腺疾患，胆管梗阻，也可使转氨酶升高。病床上常见的有胆囊炎、胆管蛔虫、肝胆管结石、胆囊及胆管肿瘤、壶腹部周围癌症、先天性胆管扩张症、急慢性胰腺炎、胰头痛以及出血坏死性胰腺炎。
5、心脏疾病急性心肌梗塞、心肌炎、心力衰竭时，可引起转氨酶高。
6、其他某些感染性疾病，：除肝脏外，体内其他脏器组织如心、肾、肺、脑、睾丸、肌肉也都含有此酶。因此，当心肌炎、肾盂肾炎、大叶性肺炎、肺结核、多发性肌炎、甲状腺功能亢进症、急性败血症、肠伤寒、流脑、疟疾、钩端螺旋体病、流行性感冒、麻疹、血吸虫病、挤压综合征等患者中，亦可见血中转氨酶升高。
7、是否服用过对肝脏有损害的药物，如果有，一定要注意药物性肝炎的可能；
8、女性还要注意有无自身免疫性肝炎的可能，检查自身免疫抗体（抗核抗体、抗平滑肌抗体等）是否为阳性；
9、既往是否有胆囊炎、心脏病、肾炎等疾病，这些病也可以引起转氨酶升高；
综上所述，引起转氨酶升高的原因很多，必须认真检查，明确病因，针对病因加以治疗。
转氨酶水平在0—40之间是正常的。如果超出正常范围，医生会建议再查一次，排除由于实验室设备故障和操作错误等因素造成误差的可能。如果转氨酶水平还高，多半是由病毒性肝炎或其他肝病所致。但要确定是不是病毒性肝炎，还需要做其他检查，结合病史、症状、体征等全面分析。展开
参考文献：http://zh.wikipedia.org/wiki/%E9%85%B6%E5%BA%95%E7%89%A9_(%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%AD%A6)
ALT主要存在于肝细胞浆内，其胞内浓度高于血清中1000-3000倍。只要有1%的肝细胞坏死，就可以使血清酶增高一倍。因此，ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。但它并不具器官专一性，许多疾病都可以引起它的增高。明显升高见于急性病毒性肝炎，中度升高见于慢性肝炎、肝硬化活动期、肝癌、肝脓肿，心梗、心肌炎、心衰等也可轻度升高。因此对ALT升高的评价应密切结合临床。部分ALT升高与脂肪肝、饮用酒精有关。临床常用的保肝药物较多。但有些药物治疗效果可以但容易反复，致使一些肝脏疾病长期不能治愈，大量的肝细胞遭受破坏。如何保护肝细胞，是保护肝脏功能的关键所在。
转氨酶只不过是临床上常用的检查肝脏功能的一项指标，转氨酶的正常与否，并不能代表肝功能的好坏，转氨酶的高低也不是与肝脏功能状态呈比例的,转氨酶”水平的高低几乎不能反应肝脏的功能，转氨酶不过是肝细胞里面的一种成分而已，相比较而言这种成分在肝细胞中的含量比较高，肝细胞一旦遭到打击和破坏，转氨酶就被释放到了血液。而在这个时候，如果损害的肝脏细胞不多，肝脏完全能够正常工作
通常，体检中主要检查的转氨酶是丙氨酸转氨酶(ALT)。1%的肝脏细胞损害，
可以使血中ALT的浓度增加1倍。因此，ALT水平可以比较敏感地监测到肝脏是否受
到损害。
转氨酶水平在0—40之间是正常的。如果超出正常范围，医生会建议再查一次
，排除由于实验室设备故障和操作错误等因素造成误差的可能。如果转氨酶水平还
高，多半是由病毒性肝炎或其他肝病所致。但要确定是不是病毒性肝炎，还需要做
其他检查，结合病史、症状、体征等全面分析。
即使确认是病毒性肝炎，也不能简单地以ALT升高的程度来判断病情，因为对
于重型肝炎，可能由于存活的肝细胞比较少，释放到血液中的转氨酶很少，ALT反
而随病情的恶化而降低。
转氨酶高不都是肝炎
ALT的升高只表示肝脏可能受到了损害。除了肝炎，其他很多疾病都能引起转
氨酶增高。主要还有以下情况：
首先，人体内许多组织都含有转氨酶，比如心肌炎和心肌梗死都可能使天冬氨
酸转氨酶升高。
其次，如果有胆结石等胆道梗阻性疾病，可能因为淤胆而使血中转氨酶水平升
高。
此外，对于一些看起来没什么大病的人来说，还有可能因为长期酗酒导致酒精
肝，或饮食结构不合理导致脂肪肝，造成转氨酶高。
劳累也可能让转氨酶升高
对于健康人来说，转氨酶水平在正常范围内升高或降低，并不意味着肝脏出了
问题，因为转氨酶非常敏感，健康人在一天之内的不同时间检查，转氨酶水平都有
可能产生波动。
另外，健康人的转氨酶水平也有可能暂时超出正常范围。剧烈运动、过于劳累
或者近期吃过油腻食物，都可能使转氨酶暂时偏高。如果在检查转氨酶前一晚加班
工作，没睡好觉，或是体检前早餐时吃了油炸的东西，检查结果可能就会超出正常
范围。一个人刚刚在操场上跑了几圈，就立刻检查他的转氨酶水平，结果也可能会
高出正常范围。
如果是由于这些情况导致转氨酶升高，只要好好休息，过一段时间后再做检查
，就会发现转氨酶水平恢复正常了。
还有一种会造成转氨酶升高的情况是生病时吃了会损伤肝脏的药物，比如红霉素、四环素、安眠药、解热镇痛药、避孕药，还有半夏、槟榔、青黛等中药。在停用这些药物后，转氨酶水平会很快恢复正常。
总之，如果发现自己转氨酶高了，不要过于紧张，不要担心自己患了严重的肝脏疾病，但是也一定要给予足够的重视，好好休息，及时接受
正规复查和治疗。展开
