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Assaypro/Human AKR1B10 AssayMax ELISA Kit/96 Well Plate/EA5403-1
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Assaypro/Human AKR1B10 AssayMax ELISA Kit/96 Well Plate/EA5403-1
品牌 / 
Assaypro
货号 / 
EA5403-1
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DETAILS
Description:This assay employs a quantitative enzyme immunoassay technique that measures the specified antigen in samples.
Type:AssayMax ELISA Kits
Samples:

Cell Culture

Tissue Extract

Catalog Number:EA5403-1
Species:Human
Format:Sandwich ELISA
Size:96 Well Plate
Range:0.156 - 10 ng/ml
Research Area:Redox Proteins, Metabolism, Homeostasis
Entrez Gene:57016
Omim:604707
UniProt:O60218
Unigene:Hs.116724
Synonyms:AKR1B10, Aldo-Keto Reductase Family 1 Member B10, ARL-1, Aldose Reductase-Like, Aldose Reductase-Related Protein, ARP, hARP, Small Intestine Reductase, SI Reductase, AKR1B10, AKR1B11
Note:For Research Use Only, Not To Be Used For Diagnostic Purposes
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分子诊断是精准医疗的技术基础,也是IVD增速最快的子行业,且国内外技术差异最小。分子诊断细分技术多,目前PCR最为成熟且应用最广,基因测序相对最新。而随着贝瑞和康和华大基因的先后上市,投资市场对基因领域怀有极大希望和热情。我国分子诊断技术发展现状分子诊断主要是应用分子生物学方法检测生物体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术。由于分子诊断可以从基因层次进行检测,因此检测灵敏度和准确性的优势较为明显,可在感染初期识别病毒或者提早... 查看更多>
医学分类对于建立诊断、预后以及选择治疗策略至关重要。传统的肿瘤分类主要基于解剖学和组织特点,现今,由于分子生物学和基因测序等技术的发展,肿瘤驱动基因的发现推动了肿瘤治疗由传统的放化疗向分子靶向治疗的转变。这一转变带来的是肿瘤分类学和治疗模式的转变,而基于分子分型的肿瘤分类使患者分层接受最优的靶向治疗,这就是精准医学的核心思路。肺癌是率先实现精准医疗的癌种。2004年起EGFR靶点的发现和EGFR-TKI药物的使用,推动了肺癌精准医疗的发 查看更多>
“2017(第五届)分子诊断产业高峰论坛”将于2017年6月19日-20日在杭州三立开元大酒店召开。2016年,国家精准医疗计划和个体化医学的发展要求持续推动了国内分子诊断技术的进步,进一步开拓新兴技术在临床的应用。液态活检作为精准医疗新技术,既有极高的科研价值,又具备助力推进精准医疗临床实践的巨大潜能,可用于癌症早期筛查、诊断、监控、治疗方案指导和疗效评估及产前诊断、器官移植诊断等领域。伴随诊断应用的发展,液态活检技术也逐渐被认可... 查看更多>
中国分子诊断技术大会旨在为扩大交流,搭建起研究与应用间畅通的桥梁,探讨逐步建立完善的分子诊断技术质量控制体系和标准,为学术界、医务界、产业界搭建起分子诊断技术研究与应用的桥梁,推动我国分子诊断技术紧跟国际前沿,进一步向前发展。... 查看更多>
在论坛上看到不停地有人在问RT-PCR的问题,实际上在以前的帖子中各位香主和eeflying(我为什么总是提他们?因为还是很佩服的哦,生怕自己说错了,被他们指出来哦)都谈到了很多,鄙人也充大头答了一些问题,但是还是有各种问题,由于的基因表达还有点实战经验(但也技止此而),所以想些点东西 查看更多>
柏业贸易(上海)有限公司在发布的分子诊断试剂原材料供应信息,浏览与分子诊断试剂原材料相关的产品或在搜索更多与分子诊断试剂原材料相关的内容。 查看更多>
中金招标有限责任公司受招标人委托对下列产品及服务进行国际公开竞争性招标,于2018-07-20在中国国际招标网公告。本次招标采用传统招标方式,现邀请合格投标人参加投标。1、招标条件项目概况:中国疾控中心寄生虫病预防控制所引进数字PCR仪1套资金到位或资金来源落实情况:已落实项目已具备招标条件的说明:已具备招标条件2、招标内容招标项目编号:0773-1840SHHW0144/03招标项目名称:中国疾控中心寄生虫病预防控制所数字PCR仪项目 查看更多>
近年来,随着中国医疗不断的改革,人们对自身健康愈加关注都驱动了体外诊断试剂市场的需求,加上国家政策的大力扶持,体外诊断试剂未来将成为并购高发的产业地带。体外诊断试剂是指在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中,对人体样本进行体外检测的试剂,具体来说就是对人体的各种体液、细胞、组织样本进行检测的试剂,和人们健康息息相关,例如人们去体检时候检测病原、抗体、查询血型、基因以及遗传疾病都需要体外诊断试剂进行... 查看更多>
数字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一种核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR,数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。... 查看更多>
“2015(第三届)分子诊断产业高峰论坛”于10月16-17日在成都隆重举行,此次会议焦点为“覆盖分子诊断,了解行业新趋势;聚焦基因检测,挖掘市场新蓝海”,来自分子诊断领域的200余位专家代表参加了此次盛会。     全式金生物(TransGen Biotech)作为国内领先的分子、细胞生物学试剂生产厂家,在会场NO.1展台设展。现场为大家展示和介绍蛋白提取试剂盒、42-65℃高温反转录试剂盒、全封闭热启动Taq酶、新型高灵敏qPC... 查看更多>
解放军总医院聋病分子诊断中心将于2011年8月6日—8月13日,举办耳聋基因诊断高级研讨班(北京市继续医学教育项目)暨全国第五届耳聋基因诊断学习班(国家级继续医学教育项目),诚邀国内耳鼻咽喉-头颈外科医生、实验室和检验科人员,计划生育、妇幼保健、残联等相关人员,以及所有对此领域感兴趣的朋友参加。 本届耳聋基因诊断高级研讨会将作为2011北京国际耳科 查看更多>
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请问大家谁有数字PCR相关的资料,可不可提供一下啊,谢谢
数字PCR可以绝对定量,理论上可以检测单个拷贝的突变,但是实际上如果突变分子比例太低,你可能取不到。20ng人基因组大致拷贝数是5.8E6,目前看文献报道,可以检出万分之一的突变比例,至于十万分之一,估计有点难度
参考体系
酶切体系(参考):
质粒17ul
buffer2ul
酶1ul
----------37度,过夜。

酶切位点
在质粒上,所选的两个酶的酶切位点不可以靠的太近,如6bp
建议载体质粒不要用双酶切,用两次单酶切之后切胶回收.另外建议加多以下两个个步骤:
1.PCR产物的酶切片断做TA克隆,之后再酶切回收,与载体相连.
2.目的片段与载体连接之后建议先转化DH5α这些容易转化的菌株.然后筛选到的阳性克隆测序之后,提质粒,用质粒转化BL21,转化率很高.质粒不一定要新鲜提取,我的质粒放在-20度冻了大半年,作为载体完全没问题,只要确定不降解.

酶切的量、小提的质粒浓度和纯度
浓度:
根据我的实验,OD值0.5左右吧,不一定很准确。260:280通常是1.8左右。3ml菌过夜,进行小提,并没有对OD限定.小提的效果好不好主要决定于你的溶液I,II,III的质量以及你的操作手法,
特别是加溶液II时最为关键。现在有很多试剂盒既便宜效果又好,条件允许的话可以考虑购买。
琼脂糖电泳目测,不一定测OD,连接比例更重要.
质粒表达载体不用测序的,通常都是跑电泳看一下质量,然后再根据图谱选择适当的酶,看能不能够切开,如果能够切开,基本上就可以采用了。
纯度:
酶切对质粒的纯度要求高,如果蛋白和RNA去的不干净会影响酶切;
我们用于酶切的质粒的ratio值一般在1.8左右。
酶量;
在量上最好不超过酶的酶切能力,一般酶都为10U/ul,就是说酶切体系里加
1ul的酶可以在合适的温度下,1小时内消化10ugDNA,但在实际操作当中
一般酶都是过量的,而且延长了酶的作用时间,比如作用6小时。
因为酶切产物用于连接,所以我们酶切时质粒的用量尽量多,用20ul的体系
时可以如下加样,我们也有用50ul的体系切过。

回收目的片段与阳标一起进行酶切:
PCR后,电泳回收目的片断(比如玻璃奶或者一次性回收柱回收),再进行酶切。除非产物非常特异,直接酶切PCR产物效果有时不是很好,还有一般PCR体系里过量得dNTPs会影响酶切效果。酶切后,可以用标准得乙醇沉淀法沉淀酶切产物,获得高纯度得酶切产物,也即是你的黏性目断片断供后边得试验。而DNA的纯度对酶切效果是有很大的影响的。而酶切时应加个阳标(如含相应酶切位点的质粒载体)来确定酶和酶切体系是不是work的。如果这两步没问题,你的酶切肯定能顺利的。如果有阳标一起来切,容易找出问题的所在。

酶切不下
酶切这一步,本来问题不大,你严格按说明书上的要求进行就行了,包括酶量,酶切体系以及DNA的量也要按要求加入。而DNA的纯度和浓度是有必要测定的,最好OD260/280要接近2.0。DNA的量过大或是纯度太低都会影响酶切效果。万一如果无法充分酶切,但有所需要的片段,就可以根据Markers的位置回收所需片段。
因为基因组大部分是甲基化的,酶切不下来的原因一可能是内切酶活性低,或者是基因组杂质含量较高,或者盐离子浓度太高(不同的酶有不同的盐浓度).还有就是基因组酶切酶的量要求比较多,大概1ugDNA/10u酶,如果不行还可以加大量,酶量不能超过酶切体系的1/10,浓度过高里面的甘油会影响酶的活性。接头5-端是去磷酸化的,这样就可以避免接头自连,pcr结果就会有东西出来。

连接酶反应温度
空掉开低一点,一般16度连接2-3小时;
放进4度冰箱中,连接过夜,16小时

多片段连接:
将三个片断放在一起连的,效果的确不好.还是应该一个一个地连接.

连接比例
我用T载体连接PCR产物,请问片段和载体的摩尔比怎么选择连接效率好?根据什么因素来调节?有没有经验值?
一般片段:载体=3~8:1。根据片段的大小、连接时间、温度、感受态细胞等因素来调节。经验值就是3~8:1。4度连接过夜,用新鲜制备的感受态细胞,一般可以得到很好的克隆效率。
补充一句:如果PCR产物片段比较大(>1kb)的话一般用3:1的比例,如果比较小就几百bp的话用>3:1的比例连接效率能高一些。3-10:1一般没问题.
建议仔细参看Teasy的说明书

接头处理
接头的处理和连接这一步其实是挺头疼的。建议先制备和接头两粘端连接的线性质粒分子。因为这对于你接头是否完成了磷酸化和退火处理提供了一个评价体系。你接头处理完,并通过评价,你就可以放心用了。退火时的处理一般要使用专门的annealingbuffer,否则效果不好。而对于粘端连接来说,应该问题不大,唯一担心的是能进行连接的片段太少了,影响下面的PCR扩增,所以酶切这一步是很关键的。
最后一步是高保真PCR,首先建议用Taq酶进行扩增,然后再用Pfu酶扩增,因为后者效率比较低。其实你用Taq酶如果扩出来,测序经blast/n后,如果有突变,你也完全可以根据正确的序列重新设计引物将之调出来。

注意感受态

如果还是不行,建议检查一下感受态菌的质量。
我的感觉是感受态很重要,你可以转化连接产物的同时用纯质粒转化进行感受态活性的验证,后者取1ul转化,10ul涂板,好的感受态一般要长50个菌落以上。其次是连接体系,目的片断与载体的摩尔比为3-10:1,除此,连接酶也很重要,最好不要使用储存太久的酶,建议你下次做的时候用别人的酶试一下。
转化要用空质粒作对照,保证感受态没问题,细菌一般长12到16小时就形成可见的菌落,转化后的菌落一般比为转化的菌落小一些。
作为2016至今风靡欧洲和美国生命科学领域的最新数字PCR平台——NaicaTM Crystal digital PCR系统,来自于法国Stilla Technologies公司,于2017年4月正式登陆中国,作为Stilla Technogies中国技术示范与服务中心,深蓝云生物科技将为中国区生命科学研究人员提供NaicaTM Crystal digital PCR系统的技术支撑和服务
各位高手不知有没有谁用过数字PCR技术,主要是用于检测肿瘤组织或DNA样品中的位点突变和等位基因不平衡。
数字PCR基本原理如下:



想请教大神们,怎样设计INT引物、MB-red探针以及MB-green探针
色谱分析做系统适用性试验主要是为了确定分析使用的色谱系统是有效的、适用的。系统适用性通常用四个参数来确定系统的适用性:分离度、柱效、重复性和拖尾因子。  其中分离度和柱效是二个最重要、也更具有实用意义的参数。分离度是判断两物质在一个方法中分离的程度,虽然与柱效相关,但在衡量系统适用性时,首先强调的应该是分离度,只有当色谱图中仅有一个色谱峰或测定微量成分时,规定柱效才有其特殊重要性。重复性和拖尾因子,分别对重现性和色谱峰的峰形做出了要求。重现性保证了方法的可重复性,对柱效能提出了要求,柱子老化、塌陷,拖尾因子则难以达到要求数字PCR 和色谱分析系统及中高压层析系统提醒你:色谱分析以分离出来时间位置来判断是何种物质,以峰的积分面积来分析其含量。色谱分析法,又称层析法。根据其分离原理,有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等方法。 ---即是一种分析方法色谱分析系统,是基于色谱分析法的一种分析仪器,如:液相色谱、气相色谱、离子色谱、凝胶色谱等。
相关疾病:脑血管疾病【下载】《数字化卒中单元管理系统》单机试用版
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卒中单元数字化管理系统.ppt(122.0k)
PCR(Polymerase Chain Reaction)技术,即聚合酶连反应,是一种扩大和复制目的片段DNA的技术,其发现对于生命科学的发展具有重要的意义。而3D数字PCR到底是什么鬼?它其实是最新出现的一款PCR仪,其具有对目的DNA分子做出绝对定量的优点,进而提供无与伦比的准确性、灵敏度。原理3D数字PCR是基于纳米流体芯片进行检测,通过一次检测,将样品分到数千个单独的PCR,检测结果部分为阳性,部分为阴性,之后进行绝对分子数统计,不需做标曲。目前可检测到2万个0.8nL的液滴(样品),能够精确的进行靶位点进行绝对定量研究。应用前景基因表达的绝对定量应用该技术,实现对DNA进行精确绝对定量,精确度可通过复制次数实现。通过准确性的进行定量检测基因,有助于临床上在治疗癌症、病毒感染等疾病作参考。同时,其具有高通量,检测速度快,成本相对低等优点,为后期精准治疗奠定基础。罕见基因的检测对于临床上的罕见的基因进行检测,不依靠参考标准,节约样本与试剂,并具有一定的精确度。3D数字PCR为液体活检提供技术支持液体活检是一种非侵入性的检测肿瘤基因及临床治疗效果的一种方法,目前可能正在开展有关3D数字PCR在在液体活检中的疗效,为后期临床提供更多可靠的指导作用。最新报道称“无创伤性肺癌检测技术即将登陆中国”。随着基因检测技术,如类似3D数字PCR技术的发展,推动我们将进入了“DNA的应用商城”这样的新时代,如23 and me、华大基因等专业的检测服务机构,提供更加专业的基因检测结果,经基因报告解读师或遗传咨询师进行通俗的解读,让我们每一个人都能够了解自己的基因,拥有自己的“生命之书”,让我们更加健康的生活。精准医疗其实本质是应用生物学信息与大数据科学的交叉发展的新型医学概念与医疗模式。对于精准医疗,重点在于“精准”,不仅仅是简单的基因测序如此简单,更需要精准的诊断与精准的治疗。
数字pcr为什么对抑制剂不敏感
在定量PCR时,我们常常纠结一个问题,究竟是相对定量还是绝对定量呢?如今,你无需纠结了,因为数字PCR(digital PCR)来了。尽管这两种技术有些类似,都是估计起始样品中的核酸量,但它们有一个重要的区别。定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量,而数字PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域:拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究(如等位基因不平衡表达)、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。
伯乐生命ddPCR(即微滴式数字PCR)系统能够确定核酸分子的绝对数目,让科研人员更加精确地研究生物学。已经被广泛应用到医学、生物学等方面,如拷贝数变异、突变检测、单细胞基因表达分析等。并且已经在癌症分子标志物的发现、传染病研究、基因组结构变异分析、基因表达分析等领域展现了强大的优势。
数字PCR介绍_核酸123
猫猫7m_3852021-07-27
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