
Overview:
PDE4Disamemberofthephosphodiesterase(PDE)familythatiscAMP-specificandhashomologytothe"dunce"geneofDrosophila.PDE4DisexpressedinbothcytosolicandparticulatefractionsinthecellandRolipram,aspecificPDE4inhibitor,inhibitsandsignificantlylowerstheIC50forthecytosolicformsoftheenzyme.TNFaupregulatesthebasalexpressionofPDE4DinHUVEC.PDE4D,whichisnotdetectedinuntreatedcells,accumulatesbeginning4hoursafterTNFatreatmentandincreasedby24hours(1).MicedeficientinPDE4DexhibitdelayedgrowthaswellasreducedviABIlityandfemalefertility(2).
GeneAliases:
DPDE3;STRK1;HSPDE4D;PDE4DN2
GenbankNumber:
NM_006203
References:
1.MiroX,etal:Phosphodiesterases4Dand7AsplicevariantsintheresponseofHUVECcellstoTNF-alpha.Biochem.Biophys.Res.Commun.274:415-421,2000.2.JinS-LC,etal:ImpairedgrowthandfertilityofcAMP-specificphosphodiesterasePDE4D-deficientmice.Proc.Nat.Acad.Sci.96:11998-12003,1999.
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实验非常不顺,想构建CDNA文库,但是从mRNA开始屡次失败,考虑主要是纯化过程中损失过多。想从总RNA入手,但是不知道实验步骤。不知那位大侠能提供总RNA建库的实验步骤。另外我现在手头有OligoDT,RT酶,苦于没有第二连合成试剂盒,不知道能否用普通PCR试剂盒Teq酶替代第二链合成过程中的DNA聚合酶I。好像有种方法合成第二链时,不需要另外的引物,利用降解的RNA作引物即可,我想直接设定PCR两个循环,合成第二链,不知方法可行否?愁啊,等着毕业,时间紧急,恳请帮忙。谢谢。

