外泌小体（Exosome）是一种囊泡结构，直径通常在30-150nm，常见于正常体液和病理样本，培养细胞也可分泌。其运载的蛋白和核酸涉及其细胞间物资、信息交流，影响和调控着多方面的生理功能，包括肿瘤发生、免疫促进、凋亡调控、血管生成、炎症反应及发育和分化等。由于在体液中出现，外泌小体对于临床生物标志物检测特别有利，成为体外诊断、bioMarker研究的新热点。
作为一个日益火爆的研究载体，外泌小体的国家自然科学基金项目数量也在逐年飙升，2017年国自然外泌小体项目已经超过300项，总资助经费超过1亿元，成为新的研究热点。
外泌小体研究思路
抓住新的研究热点将会让你的工作事半功倍，下面是外泌小体通过传递lncRNA使靶细胞中的lncRNA上调，lncRNA进而抑制miRNA丰度，从而促进肿瘤进展的实例：
Exosome-TransmittedlncARSRPromotesSunitinibResistanceinRenalCancerbyActingasaCompetingEndogenousRNA.CancerCell.2016May9;29(5):653-68.doi:10.1016/j.ccell.2016.03.004.Epub2016Apr21.
进一步可以探索外泌小体如何实现lncRNA的传递？RNA在外泌小体和细胞浆中的含量是否一致？如果不是，RNA怎样实现在外泌小体中的富集？
对于外泌小体的研究思路还有很多，但外泌小体研究最关键的步骤之一是怎样方便，高效，标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索，已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。因不需要特殊的设备和试剂盒，对操作人员也没有特别的经验要求，且具有价格优势，超滤法后来居上，成为实验室中制备外泌小体的通用方法。
默克建立了基于“微滤+超滤”的外泌小体制备操作标准，相较于需要昂贵的设备及繁琐操作的超速密度梯度离心，用实验室常见的工具就可以高效解决外泌小体制备这个”高大上”问题。
细胞上清的外泌小体分离仅需两步
第一步：样品收集，微滤除细胞碎片
细胞生长至汇合
离心/抽滤去除细胞及细胞碎片(300g,10min)
使用Millex®针头式滤器（适合1-100mL样品）
或Stericup®过滤杯（适合100-1000mL样品）
过滤去除囊泡等大颗粒物质
Millex®针头式滤器
（适合1-100mL样品）
Stericup过滤杯
（适合100-1000mL样品）
第二步：超滤制备外泌小体
微滤后含血清样品使用Amicon®Ultra100KDa超滤管（<50mL），CentriconPlus70100KDa超滤管（50-200mL），或Amicon®搅拌式超滤杯配套500KDa膜片（>200mL）超滤制备外泌小体。
Amicon®Ultra超滤管
CentriconPlus70
Amicon®搅拌式超滤杯
注意事项：
无血清样品选择3kDa孔径是为了尽可能提高外泌小体的回收率。
研究者可根据样品的粘稠程度，以及需要制备的目标外泌小体/囊泡/颗粒的大小分布来选择和优化超滤孔径
(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa)，以便达到更好的得率和操作体验。
样品体积大于30mL时可以考虑用超滤杯或Centricon-70超滤管，请注意搅拌式超滤杯在200mL以内时吸附损耗可能较离心式超滤管略偏高。
可选步骤：
外泌小体用于细胞学或动物实验前的无菌处理
经过上述方法制备的外泌小体在进行细胞或动物实验之前使用Ultrafree离心式微滤管进行一步除菌过滤（离心法处理的得率更高）。
Ultrafree离心式微滤管
超滤法制备外泌小体结果数据
多维度分析4个SH-SY-5Y细胞系的外泌小体样品（含或不含血清）
不同方法制备外泌小体产量比较
不同截留分子量的超滤管外泌小体制备产量比较
不同方法制备外泌小体产量比较
默克超滤法制备的外泌小体电镜照片（放大倍数87000×)，小体直径16-82nm，有些达到485nm
